一、内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织p38 mRNA及其蛋白质表达的变化（论文文献综述）
王丽,余剑波[1]（2021）在《线粒体形态功能障碍抗氧化应激系统与内毒素性肺损伤》文中提出内毒素性急性肺损伤是指由感染、外伤、休克及中毒等各种心源性以外因素导致的弥漫性肺实质损伤,其发病机制复杂且尚未完全阐明。近年来多项研究报道了线粒体氧化应激系统在内毒素性急性肺损伤发生过程中的相关机制,本文就线粒体抗氧化应激系统与内毒素性急性肺损伤的关系进行综述。
夏良君[2]（2021）在《脂肪间充质干细胞外泌体改善小鼠急性肺损伤的作用机制研究》文中研究说明背景:急性肺损伤（Acutelunginjury,ALI）是一种以严重的低氧血症,气道功能障碍和肺部不受控制的炎症为表现的急性临床综合征。越来越多的研究发现巨噬细胞的激活和M1表型的转化在肺部炎症的发展中起着重要的作用。线粒体作为一种与能量代谢密切相关的细胞器,无论是细胞的存活还是凋亡均与其功能密切相关。有研究认为,用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和IFN-γ刺激巨噬细胞时,巨噬细胞线粒体会发生明显的代谢重编程,这种代谢重编程对于巨噬细胞介导的免疫功能至关重要。基于间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的细胞疗法逐渐成为治疗ALI有希望的候选者,MSCs在调控巨噬细胞炎症反应的同时,巨噬细胞也可以调节干细胞的自我更新,并动员干细胞向炎症部位募集,进而提高MSCs的炎症负调控作用。最近的研究表明,在各种疾病模型中,MSCs和MSCs衍生的外泌体都有减轻肺损伤和炎症的潜力。外泌体可以通过旁分泌机制与其他细胞相互作用,介导细胞间的调控基因进行通信,或者通过细胞间相互作用而被内在化,并通过配体-受体途径导致生物学反应。与干细胞移植相比,外泌体具有更稳定和可储存,没有非整倍性的风险以及免疫排斥可能性更低的优势,已具有构成安全、有效的无细胞治疗的潜力。有多项研究集中于MSCs的外泌体对免疫细胞的作用,包括巨噬细胞,T淋巴细胞,树突状细胞和自然杀伤细胞等;但是,关于脂肪来源的MSCs（Adipose Mesenchymal Stem Cells,AdMSCs）外泌体与巨噬细胞之间的串扰却知之甚少,两者的相互作用机制值得我们进一步去探索。目的:验证脂肪间充质干细胞来源的外泌体对急性肺损伤的治疗作用,探讨外泌体通过调控巨噬细胞线粒体代谢,提高巨噬细胞抑炎作用的效应分子机制,为外泌体治疗免疫炎症疾病提供可靠科学证据,以期为外泌体治疗免疫相关炎症疾病找寻新的研究思路和方案。方法:1)从人体脂肪组织中分离扩增AdMSCs,并采用差速离心法从细胞培养上清中收集AdMSC-exos。30只健康清洁级成年雄性C57BL/6小鼠随机分成三组:正常对照组（Ctrl组）、模型对照组（PBS组）、AdMSC-exos移植组。除Ctrl组外,其余两组通过气管内滴注LPS溶液诱导小鼠肺损伤急症模型,造模后4小时分别通过尾静脉移植PBS或AdMSC-exos。造模24小时后,获取肺脏组织行H&E染色,通过流式细胞术检测肺泡灌洗液中炎症细胞分类,ELISA和qPCR观察小鼠支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10等炎症因子表达水平。同时利用MH-S（肺泡巨噬细胞细胞系）细胞开展体外实验,qPCR观察AdMSC-exos对LPS刺激后MH-S细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10等炎症因子表达水平及巨噬细胞极化的影响;Western blot检测LPS刺激后在AdMSC-exos作用下MH-S细胞中NF-κB、MAPKs等炎症激活相关信号通路的变化。2)利用MH-S细胞开展体外实验,将AdMSC-exos预先加在培养MH-S细胞的培养上清中,半小时后加入LPS诱导MH-S炎症反应,观察AdMSC-exos对LPS刺激后的MH-S细胞线粒体功能的影响。通过透射电子显微镜观察MH-S细胞线粒体超微结构的变化。检测AdMSC-exos对MH-S增殖、凋亡的影响,以及细胞线粒体中mtDNA拷贝数、ATP含量、细胞ROS产量以及线粒体功能的影响,使用海马细胞能量/生物能量代谢实时测定仪（Seahorse XF Extracellular Flux Analyzers）分析细胞的耗氧量以及胞外产酸率。同时开展体内实验,首先将30只雄性C57BL/6小鼠随机分成三组:正常对照组（Ctrl组）、模型对照组（PBS组）、AdMSC-exos移植组。除Ctrl组外,其余两组通过气管内滴注LPS溶液诱导小鼠肺损伤急症模型,造模后4小时分别通过尾静脉注射PBS和AdMSC-exos。造模24小时后,使用共聚焦显微镜观察荧光标记的AdMSC-exos在小鼠肺部的分布情况,通过肺泡灌洗获得肺泡内的免疫细胞,将它们贴壁培养2小时后获得小鼠原代肺泡巨噬细胞（Alveolar macrophages,A:Ms）,进一步检测各组小鼠AMs中mtDNA拷贝数、ATP含量,通过流式细胞术检测AMs中细胞ROS产量、功能线粒体受损数量。再利用氯磷酸脂质体清除肺泡巨噬细胞,观察AdMSC-exos对肺泡巨噬细胞耗竭后小鼠的肺部保护作用。通过过继转移AdMSC-exos处理后的骨髓来源巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophages,BMDM）,进一步观察外泌体对巨噬细胞线粒体代谢的影响。3)通过qPCR和Western blot检测外泌体中线粒体呼吸链复合物的表达。使用全能核酸酶降解AdMSC-exos 中的核酸成分,观察降解后的 AdMSC-exos 对 MH-S 炎症反应的抑制作用。通过 Western blot观察AdMSC-exos对小鼠肺泡巨噬细胞线粒体生物合成和转运的影响。体外实验中,将AdMSC-exos预先加在培养MH-S细胞的培养上清中,半小时后加入LPS诱导MH-S炎症反应,通过qPCR和western blot观察AdMSC-exos对LPS刺激后的MH-S细胞线粒体呼吸链复合物的影响。4)观察姜黄素预处理24小时后对AdMSCs及其衍生的外泌体的影响。使用CCK8法检测AdMSCs的活力,流式细胞术检测干细胞表面标志物CD105、CD90、CD45、CD34及干细胞凋亡情况,并观察姜黄素对干细胞多向分化能力的影响。通过差速离心法收集姜黄素预处理前后AdMSCs培养上清中的外泌体,Western blot检测外泌体常用标志物CD9、CD63、TSG101的表达,通过透射电镜、NTA粒径分析仪观察外泌体的表征形态和浓度。通过qPCR、Western blot检测姜黄素预处理后AdMSC-exos对LPS诱导MH-S细胞炎症反应的影响及NF-κB、MAPKs信号通路蛋白的表达。结果:1)经过脂肪间充质干细胞外泌体治疗后的ALI模型小鼠肺损伤症状得到有效缓解,肺部及全身的炎症反应减轻,肺组织及BALF中促炎性细胞因子水平降低,抑炎性细胞因子表达水平增高。AdMSC-exos移植后还可提高肺泡灌洗液中小鼠原代肺泡巨噬细胞（Alveolarmacrophages,AMs）数量,减少中性粒细胞和单核巨噬细胞的数量。体外实验中,AdMSC-exos可以促进MH-S细胞向M2型巨噬细胞分化,抑制炎症信号通路NF-κB、MAPKs上相关蛋白的磷酸化水平,增强巨噬细胞抵抗炎症反应的能力,减轻细胞炎症。2)AdMSC-exos将线粒体转移至MH-S细胞,并与MH-S线粒体内膜共定位。外泌体通过线粒体的转移对MH-S细胞线粒体功能有良好的促进作用。AdMSC-exos预处理可以改善LPS刺激后线粒体被破坏的现象,增加线粒体嵴的数量,恢复其正常结构,并提高MH-S细胞线粒体mtDNA拷贝数,增加线粒体ATP的产生,使线粒体功能受损的程度减轻,进一步促进细胞增殖减少凋亡,并且还提高了巨噬细胞氧化磷酸化和糖酵解能力。动物实验结果也表明,携带干细胞线粒体的AdMSC-exos可以被内化到小鼠肺组织巨噬细胞中。AdMSC-exos可以提高小鼠AMs细胞中mtDNA拷贝数,LPS刺激后细胞低ATP含量的形式被有效逆转。流式细胞仪分析结果显示,AdMSC-exos可以减少LPS刺激后AMs细胞ROS产量,线粒体功能受损的数量也大大下降。而对于耗竭掉AMs的ALI模型小鼠,AdMSC-exos 对肺组织损伤和炎症抑制 的保护作用明显减弱。使用 AdMSC-exos 预处理的 BMDM细胞过继转移后,也可以有效抑制LPS诱导的肺损伤和炎症反应。3)实验发现线粒体呼吸链复合物Ⅰ亚基NDUFV2以核酸和蛋白质两种形式存在于AdMSCs外泌体中。进一步的实验结果发现,当AdMSC-exos中核酸物质降解后,其调控受体巨噬细胞炎症反应的能力有所下降。qPCR和Western blot结果表明,LPS刺激会导致细胞线粒体呼吸链复合物上亚基Ⅰ～V的缺失,尤其是复合物INDUFV2的下调最为明显,而施用AdMSC-exos可以有效提高细胞线粒体复合物的表达。qPCR、流式细胞术等实验结果表明,当线粒体呼吸链复合物INDUFV2敲减后,AdMSC-exos对巨噬细胞的免疫抑制和改善线粒体代谢的能力被削弱。4)姜黄素预处理对干细胞的生长、形态、表型均无影响,也不会改变其衍生的外泌体表征。此外,姜黄素处理AdMSCs后,可以显着提高干细胞分泌的外泌体含量。在抑制炎症反应方面,使用姜黄素预处理AdMSCs后,可以增强AdMSC-exos降低炎症信号通路NF-κB、MAPKs上相关蛋白磷酸化水平的作用,有效减轻细胞炎症反应。结论:人脂肪间充质干细胞衍生的外泌体通过调控NF-κB、MAPKs信号通路抑制炎症反应,促进活化的巨噬细胞由促炎的M1型向抑炎的M2型极化,有效缓解LPS诱导的小鼠急性肺损伤;AdMSC-exos通过线粒体转移恢复巨噬细胞线粒体的结构完整性和生物遗传学,进一步促进内毒素应激的巨噬细胞向抗炎表型的功能转变,从而减轻ALI模型小鼠肺组织的损伤和炎症,AdMSC-exos的保护作用在很大程度上取决于线粒体转移和肺泡巨噬细胞的代谢重编程;AdMSC-exos中包含AdMSCs细胞中的线粒体呼吸链复合物NDUFV2片段,并通过转移定位到受体巨噬细胞的线粒体内膜上,继而调整巨噬细胞由于线粒体呼吸链复合物缺失引起的线粒体功能障碍,起到抑制炎症反应的作用。同时,姜黄素预处理AdMSCs后可以增加干细胞外泌体的产量,极大地提高了外泌体的提取效率,并且还可提高AdMSC-exos抵抗巨噬细胞炎症反应的能力。总的来说,外泌体治疗代表了一种有前景的无细胞疗法,包含线粒体片段转移的外泌体也为临床治疗线粒体功能障碍相关的疾病提供了新的见解,中医药与干细胞疗法的联合运用可以起到相辅相成的作用,这一思路也为临床上治疗多种免疫炎症疾病提供更多选择。
罗景华[3]（2020）在《分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用》文中研究说明背景:急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性呼吸衰竭。2017年国际上首次制定新生儿ARDS标准（蒙特勒标准）。由于新生儿生物学、病理生理学等特殊性,其发病机制仍不明。我们前期收集2014年1月1日～2017年7月30日925例呼吸窘迫早产儿临床资料,基于新生儿ARDS标准进行分组,发现与新生儿呼吸窘迫综合征（NRDS）相比,ARDS新生儿气管内滴入肺表面活性剂后氧合改善、临床症状好转,但很快病情反复,需要多次肺表面活性剂的使用。我们推测ARDS患儿体内存在使肺表面活性剂快速灭活的成份,阻断此活性成份,可有效改善ARDS患儿临床症状。研究表明分泌型磷脂酶A2（sPLA2）能够改变肺表面活性剂磷脂的组成、降低肺泡稳定性,且为多种炎性介质的限速酶。另外研究显示ARDS时炎症反应的失控与P38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路及核因子-κB（NF-κB）的激活密切相关。故本研究将通过体内外实验观察分泌型磷脂酶A2阻断剂（Varespladib）对ARDS新生大鼠肺表面活性剂中二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、肺表面活性蛋白A（SP-A）、p38MAPK/NF-κB信号通路关键因子等表达的影响,探讨Varespladib对新生大鼠ARDS肺的保护作用及可能机制。方法:采用腹腔注射LPS构建新生儿ARDS模型,随机分成3组:对照组（38 只）、LPS 组（41 只）、LPS+sPLA2 阻断剂组（Varespladib）（40 只）。HPLC检测肺组织中DPPC含量;电子天平称量肺组织湿重,称重后干燥48h,称量干重,计算肺组织湿/干重比例;HE染色观察病理变化及计算肺组织损伤评分:ELISA检测各组血清中SP-A、IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2及肺泡灌洗液中SP-A表达。RT-PCR、WB检测肺组织中sPLA2、p38 MAPK及NF-κB信号通路关键因子（p38 MAPK、p-p38 MAPK,NF-κB p65、p-NF-κB p65）表达;体外LPS干预肺Ⅱ上皮细胞（A549）,随机分为5组:对照组、LPS组、LPS+Varespladib 组、LPS+Varespladib 组+p38 MAPK 激动剂（Anisomycin）组、LPS+Varespladib 组+NF-κB p65 激动剂（Betulinic acid）。通过 CCK8 检测各组细胞增殖情况,RT-PCR检测p38 MAPK、NF-κB p65mRNA的表达,WB检测p38 MAPK、p-p38MAPK（Thr180+Tyr182）,NF-κB p65,p-NF-κB p65（Ser536）蛋白表达。结果:LPS可减少新生大鼠肺组织中DPPC、SP-A表达及促进IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2等炎性因子的表达导致肺损伤;Varespladib可上调DPPC、SP-A的表达,抑制IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2炎性因子的表达,减轻肺损伤、降低死亡率（P<0.05）;LPS可显着上调新生大鼠肺组织中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA表达和磷酸化蛋白/总蛋白比值（p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65）（P<0.05）,促进其磷酸化（P<0.05）。Varespladib 可下调新生大鼠肺组织中P38 MAPK、NF-κB P65mRNA表达和磷酸化蛋白/总蛋白比值（P<0.05）,抑制 P38 MAPK 及 NF-κB P65 磷酸化（P<0.05）。LPS 促进肺 Ⅱ型上皮细胞系（A549）的贴壁生长、促进细胞异常增殖;LPS促进A549细胞中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA和磷酸化蛋白/总蛋白比值增加（P<0.05）,促进其磷酸化（P<0.05）;Varespladib抑制肺Ⅱ型上皮细胞（A549）异常增殖、下调A549细胞中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA和磷酸化蛋白/总蛋白比值（P<0.05）,抑制 P38 MAPK 及 NF-κB P65 磷酸化（P<0.05）。结论:sPLA2阻断剂通过减少肺表面活性物的降解,减少炎性因子的释放对ARDS新生大鼠肺起保护作用;sPLA2阻断剂可能通过阻断P38MAPK/NF-κB p65信号通路减少ARDS新生大鼠肺损伤。
朱长乐[4]（2020）在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中认为本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。
阮涛[5]（2020）在《甲型流感病毒破坏肺上皮紧密连接结构的分子机制》文中研究表明甲型流感病毒（Influenza A Virus,IAV）属于正黏病毒科（Orthomy xoviridae）,是引起上呼吸道感染的主要病原体。全球每年病死于季节性流感的患者高达50万。由于人群对新的流感病毒亚型缺乏免疫力,2009年流感大流行导致约60万人丧生。新亚型如H5N1和H7N9等一直是引起流感大流行的的重要隐患。高致病性禽流感病毒感染家禽可引起较高的病死率,严重危害养殖业的发展。甲型流感不时造成流行或大流行,不仅给畜禽养殖业造成重大的经济损失,而且对人类健康构成严重威胁。流感的急性发病期的表征以急性呼吸窘迫综合征为主,呼吸道内肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的天然屏障受到攻击和破坏是引起急性呼吸窘迫综合征的主要原因。屏障受损后导致肺泡通透性增加,肺泡内发生蛋白质样积液和水肿,其内容物含有纤维素、红细胞和炎性细胞。肺泡水肿和内容物的聚积导致气体交换障碍和呼吸困难。肺组织的病理变化进一步加剧,诱发病毒性肺炎和继发细菌感染,最后导致多器官功能衰竭及病人死亡。紧密连接（Tight Junction,TJ）是上皮细胞之间的一种重要的连接复合体,起着细胞旁通透屏障和维持细胞极性的作用,阻止溶质和水等大分子物质自由通过上皮间隙同时也阻止细菌和病毒等微生物的进入。紧密连接的组装、分解和维持由多种的细胞信号通路所调控,在这些信号分子中Shh信号通路中转录因子Gli1通过转录调控紧密连接蛋白的表达。另外泛素连接酶Itch可通过翻译后调控相关紧密连接蛋白的降解。肿瘤领域研究发现MAPK和PI3K信号通路交叉激活转录因子Gli1以及其下游的Snail转录因子。H1N1病毒激活PI3K信号通路,H5N1病毒不能激活该信号通路。这些信号通路是否参与流感病毒破坏细胞间的紧密连接结构仍不清楚;紧密连接结构在H1N1和H5N1病毒侵袭过程中的分子机制未有报道。本研究拟以流感病毒感染肺上皮细胞（A549）和C57BL/6小鼠为模型,探究IAV破坏肺泡上皮紧密连接结构,增加肺上皮细胞通透性的分子机制。H1N1病毒破坏肺上皮紧密连接结构的机制研究本部分试验研究IAV H1N1 PR8和CA09毒株破坏肺泡上皮紧密连接结构的分子机制。Western blot结果显示,H1N1 PR8和CA04毒株感染A549细胞均能够增加转录因子Gli1、Snail和Slug的蛋白表达,抑制紧密连接蛋白E-cadherin、Occludin和ZO-1的表达。免疫荧光试验结果表明H1N1 PR8毒株增强转录因子Gli1和Snail在细胞核中的定位,破坏紧密连接蛋白Occludin和ZO-1在细胞膜上的分布。荧光素酶试验结果显示,H1N1病毒增强Gli1基因启动子的活性。qRT-PCR结果显示,流感H1N1 PR8毒株感染A549细胞中Gli mRNA的表达水平显着增加。为了研究转录因子Gli1是否调控紧密连接蛋白,加入Gli1抑制剂GANT61显着逆转H1N1病毒诱导的紧密连接蛋白降解。免疫荧光试验显示,加入GANT61明显恢复紧密连接蛋白Occludin和ZO-1在细胞膜上表达。跨膜电阻试验结果显示,GANT61明显减少H1N1引起的肺上皮细胞跨膜电阻值的降低。H1N1病毒感染肺上皮细胞导致ERK和AKT的磷酸化水平显着增加,加入ERK和AKT的抑制剂U0126和LY294002阻止H1N1病毒降低紧密连接蛋白,恢复紧密连接蛋白Occludin和ZO-1在细胞膜上的表达,阻止H1N1病毒引起的肺上皮细胞电阻值的降低。体内试验结果表明H1N1 PR8毒株感染C57/B6小鼠显着增加转录因子Gli1和Snail的表达,增加ERK和AKT的磷酸化水平,抑制紧密连接蛋白的表达。GANT61治疗则阻断H1N1诱导的转录因子Gli1和Snail的上调,恢复紧密连接蛋白的表达,小鼠的肺损伤程度明显好转。这些结果表明H1N1病毒通过PI3K和MAPK信号通路激活转录因子Gli1和Snail,抑制紧密连接蛋白的表达,增加肺上皮细胞间的通透性。H5N1病毒破坏肺上皮紧密连接结构的机制研究为研究H5N1病毒破坏肺上皮紧密连接结构的分子机制,同样采用了 A549和MDCK细胞的体外试验。Western blot结果显示,H5N1病毒感染A549和MDCK细胞没有诱导反而抑制转录因子Gli1和Snail的蛋白表达,同时H5N1病毒抑制紧密连接蛋白E-cadherin、Occludin、Claudin-1和ZO-1的表达。H5N1病毒感染显着增加ERK、p38和TAK1的磷酸化水平,加入ERK、p38和TAK1的抑制剂U0126、SB202190和5Z-7-oxozeaenol显着抑制ERK、p38和TAK1的磷酸化水平,恢复H5N1病毒降低的紧密连接蛋白。免疫荧光试验结果显示,加入这些抑制剂显着恢复恢复紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1在细胞膜上的分布。敲除TAK1显着恢复H5N1病毒降解的紧密连接蛋白。跨膜电阻试验结果显示,U0126、SB202190和5Z-7-oxozeaenol显着减少H5N1引起的肺上皮细胞跨膜电阻值的降低。H5N1病毒感染增强E3泛素连接酶体Itch的表达,加入蛋白酶体抑制剂MG132恢复紧密连接蛋白的表达。免疫共沉淀结果显示,H5N1病毒感染增强Occludin蛋白的泛素化降解,抑制剂SB202190和5Z-7-oxozeaenol抑制H5N1病毒诱导的Occludin蛋白的泛素化降解。敲除Itch也显着抑制H5N1病毒诱导的Occludin蛋白的泛素化降解。体内试验结果表明H5N1感染C57/B6小鼠显着抑制转录因子Gli1和Snail的表达,增加ERK和TAK1的磷酸化水平,增加Itch的表达,抑制紧密连接蛋白的表达。5Z-7-oxozeaenol治疗恢复紧密连接蛋白的表达,小鼠的肺损伤程度明显好转。本部分实验结果表明,H5N1病毒通过激活TAK1下游的ERK和p38 MAPK信号通路诱导E3泛素连接酶Itch的表达,促进紧密连接蛋白的降解。本研究首次发现泛素-蛋白酶体系统可能参与H5N1病毒引起的肺泡上皮紧密连接结构损伤。揭示E3泛素连接酶Itch可能是抗病毒研究的潜在靶标。综上所述,H1N1病毒通过PI-3和MAP激酶信号通路诱导转录因子Gli1和Snail的表达,在转录水平上抑制紧密连接蛋白的表达增加肺上皮细胞间的通透性;与H1N1病毒的结果相反,H5N1病毒抑制转录因子Gli1和Snail的表达,但H5N1病毒激活TAK1和MAPK诱导泛素连接酶Itch的表达,促进紧密连接蛋白泛素化修饰和蛋白降解。
赖芳[6]（2020）在《从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制》文中进行了进一步梳理急性肺损伤（ALI）是危重症常见并发症,临床可引发急性呼吸窘迫综合征,脓毒症是引发ALI的主要病因之一。脓毒症ALI发病率高,死亡率高,临床救治困难,目前仅保护性通气策略、限制性液体管理是有循证医学证据支持可改善预后的措施,尚无药物可明确改善脓毒症ALI预后。寻求对脓毒症ALI有效的干预措施是研究的热点之一。中医药治疗脓毒症、ALI等危重症有着悠久的历史,现代中医救治危重症亦有较多进展。目前多数医家将其归于“暴喘”、“喘脱”范畴,无论中医内治法、外治法均多有长足发展。通过系统整理脓毒症ALI的中西医研究进展,我们发现,针刺足三里在干预脓毒症ALI有一定优势。为进一步系统整理现有文献情况,本研究参考SYRCLE动物实验系统评价的方法对文献中针刺足三里干预脓毒症ALI的动物实验文献进行整理,并在此基础上优化设计动物实验并开展研究,提出从胆碱能抗炎通路探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用及机制,为进一步临床研究及应用提供科学依据。目的:1.全面、系统、客观地评价目前针刺足三里干预脓毒症ALI的已有文献报道情况,总结证据特点,在此基础上优化设计动物实验。2.实验证实针刺足三里对脓毒症ALI的作用,并从胆碱能抗炎通路（CAP）探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用机制。方法:1.参考SYRCLE动物实验系统评价的方法,在PubMed、Cochrane图书馆（CENTRAL）、Embase（Excerpt Medica Database）、中国生物医学文献服务系统（CBM）、中国知网（China National Knowledge Infrastructure,CNKI）、万方医学网（Wanfang Data）和维普数据库（VIP Database）7个数据库从建库到2019年5月31日的文献进行系统地检索、筛选、整理有关针刺足三里干预脓毒症ALI的动物实验文献,总结现有实验结果设计、结果情况,分析影响实验结果的因素,结合文献调研情况,优化设计动物实验方案设计,以进一步探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用及机制。2.参照美国胸科协会对脓毒症ALI动物造模的推荐方式及造模成功评判标准,采用脂多糖（LPS）气道内滴入的方法构建大鼠脓毒症ALI模型,进行生存分析,共60只大鼠随机分为4组:假模型组、电针组、模型+同期麻醉组、模型+非同期麻醉组,每组15只。假模型组给予生理盐水气道内滴入;电针组于气道内滴入LPS造模后30min给予执行电针30min,每日1次,共执行3次;模型+同期麻醉组于LPS气道内滴入造模后,每次电针组执行电针时同期给予麻醉药麻醉;模型+非同期麻醉组于造模后不予任何干预。观察各组大鼠生存情况至造模后第7天。3.同上方法及标准构建大鼠脓毒症ALI模型,进行机制探讨,共35只大鼠随机分为7组:假模型组、模型组、电针组、PNU组（使用CAP通路关键受体α 7nAChR激动剂PNU-282987）、MLA组（使用α 7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭）、PNU+电针组、MLA+电针组,每组5只。假模型组给予生理盐水气道内滴入;电针组于造模后30min给予电针30min 1次、造模后24h取材前30min执行电针治疗1次,PNU组、MLA组于造模后30min分别给予PNU-282987、甲基牛扁亭腹腔注射,PNU+电针组、MLA+电针组分别于造模后30min给予相应药物腹腔注射并给予电针30min 1次,造模后24h取材前30min执行电针治疗1次。造模后24h取材,收集大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,离心后上清液用于BALF蛋白含量测定,细胞沉淀重悬后涂片行白细胞、中性粒细胞计数;称取肺组织湿重及烤干至恒重重量计算肺组织湿干重比;血液离心取上清测定血清蛋白含量,与BALF蛋白含量比较计算肺毛细血管蛋白渗漏程度;取采用肺组织切片HE染色观察肺组织病理改变;采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IL-10含量;采用Western Blot方法检测肺组织NF-κB蛋白水平、α 7nACHR蛋白水平;以组织活性测试盒（南京建成）测定肺组织ChAT、AChE活性。结果:1.动物实验系统评价结果:从7个数据库共检索获得4417篇文献,按照纳入、排除标准,通过标题、摘要筛选获得74篇文献,通过全文获取及阅读最后共纳入19篇文献。（1）目前关于针刺足三里干预脓毒症肺损伤的动物实验文献大多数（约63%）为5年之前发表,肺损伤评价指标相对粗浅、单一,疗效评估未足够全面;（2）19篇文献中仅4篇文献采用足三里单穴进行干预,其余均配以其他穴位进行干预,针刺足三里穴的作用效果未能充分明确;（3）针刺干预时机89.5%的文献为造模前预处理,仅10.5%为造模后立即针刺干预,与临床实际可切入干预时机相距甚远;（4）机制研究方面不够深入,可结合针刺足三里在脓毒症方面的其他研究结果进一步深入探讨;（5）文献的总体质量较低,偏倚风险较高。根据当前研究进展及系统评价结果,提出采用合适、稳健的脓毒症肺损伤模型,通过死亡率、较全面的肺损伤评价指标评价通过足三里单穴进行造模后等待再行干预处理的效果,并从胆碱能抗炎通路对作用机制进行探讨。2.动物实验结果:（1）生存分析:无论是与模型+同期麻醉组还是与模型+非同期麻醉组相比,电针组7天生存率明显提高（P<0.05）。（2）肺组织病理评分:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组、PNU组、PNU+电针组大鼠肺组织病理评分明显下降,差异有统计学意义（P<0.01）,电针组下降趋势更明显;MLA组、MLA+电针组与模型组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）肺组织湿/干重比:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺湿/干重比明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）。（4）BALF白细胞计数、中性粒细胞计数:模型组较假模型组均明显升高（白细胞,P<0.05;中性粒,P<0.01）;与模型组相比,电针组BALF中白细胞、中性粒细胞有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（5）肺毛细血管蛋白渗漏程度:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺毛细血管蛋白渗漏程度下降,差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）。（6）ELISA炎症因子检测:血清IL-6、IL-10水平模型组较假模型组均明显升高（均P<0.01）;与模型组相比,电针组血清IL-6水平明显下降（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）;IL-10水平各组间差异无统计学意义（P>0.05）。（7）肺组织ChAT活性检测:模型组较假模型组明显降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺组织ChAT活性明显升高（P<0.05）。（8）肺组织AChE活性检测:模型组较假模型组明显降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺组织AChE活性有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（9）肺组织NF-κ B蛋白表达:模型组较假模型组明显升高（P<0.05）;与模型组相比电针组肺组织NF-κ B表达明显下降（P<0.05）,其余各组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。（10）肺组织α 7nAChR蛋白表达:假模型组、模型组、电针组肺组织α 7nAChR蛋白表达无明显差异（P>0.05）,其余各组较上述三组均明显升高（P<0.05）。结论:1.目前文献研究提示电针足三里可能可减轻脓毒症肺损伤,但尚未较全面、系统进行验证,机制研究不够深入,胆碱能抗炎通路可能是电针足三里发挥作用的重要通路。2.本研究以LPS气道内滴入建立脓毒症ALI大鼠模型,模型构建成功。在模型构建成功的基础上验证电针足三里干预的有效性,与模型组相比,电针足三里可改善脓毒症ALI大鼠7天死亡率,造模后24h肺损伤明显减轻。3.通过检测胆碱能抗炎通路关键调控因子的活性,本研究发现,电针足三里可显着提高脓毒症肺损伤大鼠肺组织ChAT活性,降低肺组织NF-κ B表达水平,降低炎症因子IL-6的水平,进一步通过与使用胆碱能抗炎通路关键受体α 7nAChR激动剂及拮抗剂的组别比较,发现电针足三里可能是通过神经电刺激促进神经递质乙酰胆碱的生成和释放而产生激活胆碱能抗炎通路发挥抗炎作用,而不是通过影响α 7nAChR表达或增强α 7nAChR与受体激动剂结合等机制产生作用。
宫丽荣[7]（2020）在《HO-1对内毒素急性肺损伤内质网应激介导细胞凋亡的作用及机制》文中研究表明既往我们研究发现,血红素氧合酶-1（HO-1）在内毒素急性肺损伤（ALI）中发挥重要内源性保护作用,但作用机制远未阐明。内质网应激（ERS）介导的细胞凋亡可能是参与肺损伤发病的重要环节,而HO-1对肺损伤时ERS调控作用及机制尚不清楚。为此,本研究主要探讨ERS介导的细胞凋亡在HO-1保护内毒素ALI中的作用及可能机制。为了探讨HO-1对内毒素急性肺损伤内质网应激介导细胞凋亡的作用及可能机制,我们从在体LPS诱导小鼠急性肺损伤模型和离体LPS攻击肺泡上皮细胞模型两个水平进行了研究,具体分为以下三个部分:第一部分:建立内毒素急性肺损伤小鼠模型,验证ERS介导的细胞凋亡参与内毒素ALI的发病过程:分别给与ERS抑制剂和诱导剂,测定ERS发生标志物（GRP78、ATF6、IRElα及PERK）及ERS相关凋亡蛋白（CHOP、caspase-12）的变化,观察肺损伤程度（氧合指数、肺损伤评分及肺组织湿/干重比）。第二部分:利用条件性肺HO-1基因敲除小鼠建立内毒素ALI模型,初步探讨HO-1对内毒素ALI时ERS介导细胞凋亡的影响及作用机制:与野生型小鼠比较,观察HO-1基因敲除小鼠肺组织ERS发生标志物（GRP78、ATF6、IRElα及PERK）蛋白表达、肺组织细胞凋亡、ERS相关凋亡蛋白（CHOP、caspase-12）的变化,测定HO-1基因和蛋白表达变化,测定肺组织中CO的含量,观察肺损伤程度（氧合指数、肺损伤评分及肺组织湿/干重比）。第三部分:利用离体大鼠肺泡Ⅱ型上皮模型,在细胞层面进一步明确HO-1调控ERS介导细胞凋亡可能的作用机制:利用LPS建立细胞内毒素攻击模型,观察HO-1基因沉默肺泡Ⅱ型上皮细胞ERS发生标志物（GRP78、IRElα及PERK）蛋白表达、细胞凋亡、ERS相关凋亡蛋白（CHOP、caspase-12）的变化,测定CO的含量和肺泡表面活性物质C（SP-C）表达。并探讨HO-1调控ERS介导细胞凋亡可能的信号通路:利用PERK、IRE1α抑制剂预处理大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞后加入LPS建立细胞模型,观察蛋白p-PERK、p-e IF2α、p-IRE1α、TRAF2、CHOP及caspase-12蛋白的表达。在实验一中,我们利用C57BL/6小鼠尾静脉注射LPS构建ALI模型,观察了不同LPS诱导剂量及诱导时间点时小鼠肺损伤情况、炎症因子指标和氧化应激指标的变化,最后选取LPS 15 mg/kg、诱导12h建立急性肺损伤模型。此外,我们利用ERS抑制剂TUDCA和激动剂衣霉素干预成功验证了ERS介导的细胞凋亡参与内毒素ALI的发病过程,为后续相关研究打下基础。由实验二我们发现,与野生型C57BL/6小鼠比较,HO-1-/-小鼠给予LPS 15mg/kg诱导12h后肺损伤程度加重,表现为肺损伤评分、肺W/D比值及BALF中总蛋白含量升高、氧合指数明显减低,凋亡指数（AI）升高,CO水平降低,肺组织ERS相关蛋白GRP78、p-PERK、及p-IRE1α表达水平升高,肺组织ERS凋亡蛋白CHOP、caspase-12 m RNA和蛋白表达显着升高。这些研究结果提示HO-1可能通过抑制ERS介导的细胞凋亡减轻LPS诱导的小鼠肺脏损伤。通过实验三我们发现,与动物实验结果一致,HO-1对内毒素攻击肺泡Ⅱ型上皮细胞有保护作用,HO-1可能通过抑制ERS介导的细胞凋亡减轻内毒素诱导的细胞损伤。进一步的机制研究发现,在肺泡Ⅱ型上皮细胞中,PERK抑制剂GSK2606414预处理减少了LPS诱导的GRP78、p-PERK、p-e IF2α及CHOP蛋白表达,IRE1α抑制剂GSK2850163预处理减少了LPS诱导的p-IRE1α、TRAF2及凋亡蛋白caspase-12的表达,结合HO-1基因沉默可导致GRP78、p-PERK、p-e IF2α、CHOP、p-IRE1α、TRAF2、caspase-12蛋白表达水平升高及细胞凋亡增多的结果,提示HO-1可能通过PERK/e IF2α/CHOP和IRElα/TRAF2/caspase-12通路抑制细胞凋亡。由此,我们得出结论ERS介导的细胞凋亡参与内毒素诱导的ALI过程,HO-1可能通过ERS中PERK/e IF2α/CHOP、IRElα/TRAF2/caspase-12通路抑制细胞凋亡从而减轻LPS诱导的急性肺脏损伤。HO-1调控ERS介导细胞凋亡的其它机制尚有待进一步的研究。
张圆[8]（2019）在《基于线粒体融合-分裂动态平衡研究HO-1在电针刺内毒素急性肺损伤中的保护作用》文中提出目的 针刺可以减轻内毒素急性肺损伤,但具体机制尚不明确。我们既往研究发现:在内毒素急性肺损伤时,血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）表达上调可以促进线粒体融合、抑制线粒体分裂,其内源性器官保护作用可能与影响线粒体融合/分裂相关;电针刺可以通过上调HO-1表达以减轻内毒素急性肺损伤。这些研究结果引起我们对针刺、HO-1与线粒体融合/分裂蛋白相关性的关注。鉴于此,本课题拟阐明电针刺对内毒素急性肺损伤（acute lung injury,ALI）肺组织线粒体融合/分裂运动的影响;探讨电针刺是否通过上调HO-1调控内毒素ALI肺组织线粒体融合/分裂的动态平衡改善线粒体功能以减轻肺损伤。方法 阐明电针刺对内毒素ALI肺组织线粒体融合/分裂运动的影响;探讨电针刺是否通过上调HO-1调控内毒素ALI肺组织线粒体融合/分裂的动态平衡改善线粒体功能以减轻肺损伤,本研究分为实验一和实验二。实验一:为探讨电针刺对内毒素ALI肺组织线粒体融合/分裂运动的影响,我们选取新西兰大白兔40只,采用随机数字表法分为4组即正常对照组（C组）、急性肺损伤组（M组）、非穴位电针刺激+急性肺损伤组（SEAM组）和穴位电针刺激+急性肺损伤组（EAM组）。M组、SEAM组、EAM组经耳缘静脉注射LPS 5 mg/kg制备内毒素急性肺损伤模型。静脉注射LPS前4、3、2、1 d和30 min,EAM组选取足三里和肺俞穴,SEAM组选取足三里和肺俞穴旁开1 cm非经非穴部位,建立电针刺模型。注射LPS 6 h后处死动物,光镜下观察病理学结果并计算肺损伤评分,检测W/D,电镜观察线粒体超微结构改变,检测活性氧（Reactive oxygen species,ROS）生成、腺苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）含量、呼吸控制率（respiratory control ratio,RCR）及线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）以了解线粒体功能状态,采用Real-Time PCR检测和Western blot法测定线粒体融合/分裂标记物表达来了解线粒体融合/分裂的变化情况。实验二:为探讨电针刺是否可以通过HO-1调节肺组织线粒体运动相关蛋白来调控其融合/分裂的动态变化,我们选取健康清洁级雄性新西兰大白兔70只,采用随机数字表法分为7组即正常对照组（C组）、LPS建立内毒素ALI模型组（LPS组）、非穴位电针刺+LPS建立内毒素ALI模型组（LPS+non-acupoint EA组）、电针刺激穴位+LPS建立内毒素ALI模型组（LPS+EA组）、电针刺激穴位+内毒素ALI模型+HO-1阻断剂组（LPS+EA+ZnPP组）、电针刺激穴位+内毒素ALI模型+HO-1诱导剂组（LPS+EA+hemin组）、电针刺激穴位+内毒素ALI模型+HO-1诱导剂+HO-1阻断剂组（LPS+EA+hemin+ZnPP组）。LPS组、LPS+non-acupoint EA组、LPS+EA组、LPS+EA+ZnPP组、LPS+EA+hemin组、LPS+EA+hemin+ZnPP组经耳缘静脉注射LPS 5 mg/kg制备内毒素急性肺损伤模型。LPS+EA组、LPS+EA+ZnPP组、LPS+EA+hemin组、LPS+EA+hemin+ZnPP组静脉注射LPS前4、3、2、1 d和30 min时选取足三里和肺俞穴进行电针刺激,建立电针刺模型。LPS+non-acupoint EA组给予非穴位电刺激。LPS+EA+hemin group组、LPS+EA+hemin+ZnPP组给予LPS前1h静脉注射100mg/kg HO-1诱导剂hemin,LPS+EA+ZnPP组、LPS+EA+hemin+ZnPP组给予LPS前1h静脉注射10μmol/kg HO-1抑制剂ZnPP。注射LPS 6 h后处死动物,光镜下观察病理学结果并计算肺损伤评分,检测W/D,电镜观察线粒体超微结构改变,检测ATP含量、ROS生成量、RCR及MMP以了解线粒体功能状态,采用Real-Time PCR检测和Western blot法测定线粒体融合/分裂标记物及HO-1的表达明确电针是否通过上调HO-1调控线粒体融合/分裂平衡的。结果通过实验一我们发现:与C组比较,M组、SEAM组和EAM组肺损伤评分、W/D及ROS含量均升高,ATP含量、MMP与RCR均降低,Mfn1、Mfn2和OPA1的mRNA和蛋白表达下调,Drp1 mRNA和蛋白表达上调（P均<0.05）;与M组比较,EAM组肺组织肺损伤评分和W/D均降低（P<0.05）,SEAM组肺损伤评分和W/D差异无显着统计学意义（P>0.05）,SEAM组和EAM组肺组织ATP含量、MMP与RCR均升高,ROS生成降低,Mfn1、Mfn2和OPA1 mRNA和蛋白表达上调,Drp1 mRNA和蛋白表达下调（P均<0.05）;与SEAM组比较,EAM组肺损伤评分、W/D和ROS含量均降低,ATP含量、MMP与RCR均升高,Mfn1、Mfn2和OPA1的mRNA和蛋白表达上调,Drp1 mRNA和蛋白表达下调（P均<0.05）。通过实验二我们发现:与C组比较,LPS组、LPS+non-acupoint EA组、LPS+EA组、LPS+EA+ZnPP组、LPS+EA+hemin组、LPS+EA+hemin+ZnPP组肺损伤评分、W/D和ROS的产生均升高,ATP含量、MMP和RCR均降低,Mfn1、Mfn2、OPA1mRNA和蛋白的表达显着降低,而Drp1和HO-1 mRNA和蛋白的表达水平升高（P均<0.05）;与LPS组比较,LPS+EA组肺损伤评分和W/D均降低（P均<0.05）,LPS+non-acupoint EA组肺损伤评分和W/D差异无显着统计学意义（P>0.05）,LPS+non-acupoint EA组、LPS+EA组ATP含量、MMP和RCR均升高,ROS的产生减少,Mfn1、Mfn2、OPA1和HO-1 mRNA和蛋白的表达显着升高,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平降低（P均<0.05）;与LPS+non-acupoint EA组比较,LPS+EA组肺损伤评分、W/D、ROS的产生均减少,ATP含量、MMP和RCR均升高,Mfn1、Mfn2、OPA1、HO-1 mRNA和蛋白的表达显着升高,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平降低（P均<0.05）;与LPS+EA组比较,LPS+EA+hemin组肺损伤评分、W/D和ROS的产生均降低,ATP含量、MMP和RCR均升高,Mfn1、Mfn2、OPA1、HO-1mRNA和蛋白的表达显着升高,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平降低（P均<0.05）,LPS+EA+ZnPP组肺损伤评分、W/D、ROS的产生均升高,ATP含量、MMP和RCR均降低,Mfn1、Mfn2、OPA1、HO-1mRNA和蛋白的表达显着降低,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平升高（P均<0.05）;与LPS+EA+hemin组比较,LPS+EA+ZnPP组、LPS+EA+hemin+ZnPP组肺损伤评分、W/D和ROS的产生均升高,ATP含量、MMP和RCR均降低,Mfn1、Mfn2、OPA1、HO-1mRNA和蛋白的表达显着降低,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平升高（P均<0.05）;与LPS+EA+ZnPP组比较,LPS+EA+hemin+ZnPP组肺损伤评分、W/D和ROS的产生均减少,ATP含量、MMP和RCR均升高,Mfn1、Mfn2、OPA1和HO-1 mRNA和蛋白的表达显着升高,而Drp1mRNA和蛋白的表达水平降低（P均<0.05）。结论 1.电针刺可通过调节内毒素ALI时肺组织线粒体融合/分裂的动态平衡来改善线粒体功能,从而发挥肺保护作用;2.电针刺调控内毒素ALI肺组织线粒体融合/分裂的动态平衡,其机制与针刺上调HO-1有关。
李心怡[9]（2018）在《羟考酮及miRNA-140对急性肺损伤的保护作用》文中进行了进一步梳理第一部分:羟考酮对大鼠脓毒症急性肺损伤的影响目的 采用静脉注射脂多糖（LPS）的方法复制大鼠脓毒症急性肺损伤（ALI）模型,观察大鼠动脉血气、肺组织通透性指数、肺病理组织学的改变,并检测肺组织水通道蛋白AQP-1、AQP-5,Toll样受体4（TLR4）及核转录因子（NF-κB）的表达水平,以探讨羟考酮对大鼠急性肺损伤可能的保护机制。方法 健康雄性SD大鼠36只,体重250～300 g,随机分为3组（n=12）:假手术组（S组）、急性肺损伤组（A组）和羟考酮预先给药组（O组）。A组和O组采用静脉注射LPS 8 mg/kg建立急性肺损伤模型。S组注射等容量生理盐水,O组于注射LPS前10 min静脉注射羟考酮2 mg/kg,S组和A组分别注射相应容积的生理盐水。LPS注射后6 h采集股动脉血1 ml进行动脉血气分析。LPS注射后6h处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,测定肺通透性指数（LPI）,用ELISA法测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）的浓度;取肺组织,测定肺组织湿/干重比值（W/D）,光镜下行病理学损伤评分,免疫蛋白印记法检测AQP-1、AQP-5、TLR4及NF-κB蛋白的表达。结果 与S组比较,A组动脉血氧分压及氧合指数明显下降,血浆TNF-α和IL-1β浓度,肺组织W/D比值、LPI、病理学损伤评分以及肺组织TLR4、NF-κB表达水平均升高,AQP-1、AQP-5表达水平降低（P<0.05）;与A组比较,O组大鼠动脉血氧分压及氧合指数升高,血浆TNF-α和IL-1β的浓度,肺组织W/D比值、病理学损伤评分以及肺组织TLR4、NF-κB表达水平均降低,AQP-1、AQP-5表达水平升高（P<0.05）。结论（1）羟考酮可改善急性肺损伤大鼠肺微血管通透性,减轻肺水肿,其机制可能与上调AQP-1、AQP-5的表达有关;（2）羟考酮可减轻急性肺损伤大鼠肺组织的炎症反应,可能与抑制TLR4及NF-κB的表达有关。第二部分:miR-140在脓毒症急性肺损伤中的表达及其调控炎症反应机制的研究目的 从体内和体外实验两个方面探讨微小RNA-140（miR-140）在脓毒症急性肺损伤的差异表达及其与炎性因子表达的相关性。方法 30只雄性SD大鼠随机等量分为5组:假手术组（sham组）,ALI 3h、6h、12h及24h组。股静脉注射LPS 8 mg/kg构建脓毒症ALI模型。采用LPS（浓度2ug/L）诱导人肺Ⅱ型上皮细胞（A549）损伤,建立脓毒症ALI细胞模型。细胞分为五组:空白对照组（NC组）和LPS3h、6h、12h及24h组。于各时间点观察大鼠肺组织病理学改变,检测大鼠血浆以及A549细胞中miR-140和TNF-α、IL-1β表达水平,并分析两者相关性;检测大鼠肺组织miR-140和TLR4表达水平,并分析两者相关性。采用软件Targetscan和RNAhybrid数据库对miRNA-140进行靶基因预测,构建双荧光素酶重组载体,并将此重组质粒与miR-140共转染A549细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检测miR-140对TLR4转录活性的影响。构建TLR4过表达质粒,并将此质粒与miR-140共转染A549细胞,Western blotting检测细胞中TLR4及NF-κB蛋白的表达。结果（1）与对照组相比,ALI大鼠血浆TNF-α、IL-1β浓度明显增高,miR-140的表达显着下调,miR-140与IL-1β、TNF-α水平亦均呈负相关（P<0.05）;（2）ALI大鼠肺组织TLR4表达增强,miR-140的表达下调,两者呈负相关;（3）LPS处理的A549细胞中miR-140、IL-1β、TNF-α变化趋势与ALI大鼠中趋势一致;（4）双荧光素酶报告结果以及restore实验显示:TLR4可能是miR-140的靶基因。结论（1）在脓毒症急性肺损伤动物和细胞模型中,miR-140表达显着下调;（2）TLR4可能是miR-140的靶基因;（3）miR-140通过负向调控TLR4的表达,减轻急性肺损伤中的炎症反应。第三部分:miR-140调控Toll like receptor 4信号通路在脂多糖诱导肺上皮细胞损伤中的作用目的 在体外模拟脓毒症急性肺损伤（ALI）的模型,观察miR-140对TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路的调控机制以及对细胞凋亡的影响,探讨其对急性肺损伤的保护作用。方法 将体外培养的人肺Ⅱ型上皮细胞（A549）,分别转染miR-140 mimic或miR-140 inhibitor 48小时,然后给予终浓度为2 μg/ml的LPS诱导肺上皮细胞损伤。实验分为三组:（1）对照组（CON组）:不加任何试剂;（2）LPS组:加入终浓度为2 μg/ml的LPS;（3）miR-140 mimic组（MI组）:先转染miR-140 mimic,后加入LPS;（4）空白mimic组（NC组）:先转染negativecontrol,后加入LPS（5）miR-140 inhibitor组（IN组）:先转染miR-140 inhibitor,后加入LPS;加入LPS继续培养24h后分别收集各组细胞及上清液进行相关指标检测。利用实时定量PCR检测各组目标基因mRNA表达水平,Western blotting检测目的蛋白的表达。采用TUNEL染色以及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与CON组比较,LPS组细胞内miR-140表达下调,细胞凋亡率明显增高（P<0.05）;与LPS组比较,miR140-mimic组细胞内miR-140表达上调,细胞凋亡率明显降低,细胞内TLR4、NF-κB、TRAF6、RIP、Caspase-3蛋白表达降低,XIAP、SCOS-3 蛋白表达增强（P<0.05）,TLR4、TRAF6、RIP、XIAP 的 mRNA 表达具有与蛋白表达相似的变化趋势;与LPS组比较,miR140-inhibitor组细胞内miR-140表达下调,细胞凋亡率升高,TLR4、NF-κB、TRAF6、RIP、Caspase-3蛋白表达增强,XIAP、SCOS-3 蛋白表达降低（P<0.05）,TLR4、TRAF6、RIP、XIAP 的 mRNA 表达具有与蛋白表达相似的变化趋势;与LPS组比较,negativecontrol组目标蛋白的表达以及细胞凋亡率无明显改变。结论（1）miR-140通过负调控TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路抑制细胞凋亡,从而对脂多糖诱导的肺上皮细胞损伤起保护作用。（2）上调miR-140或抑制TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路的激活有望成治疗急性肺损伤相关性疾病的有效靶点。
肖雪飞[10]（2012）在《姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用及分子机制研究》文中指出脓毒症是机体由感染所引发的全身炎症反应综合征,是各种严重创伤、烧伤、缺氧、再灌注损伤及外科大手术后常见的并发症,是重症监护室患者的首位死亡原因。肺脏是脓毒症时最易受损伤的靶器官,脓毒症时急性肺损伤出现最早,发生率最高。脓毒症时,由于内毒素等刺激炎症细胞产生大量的炎性介质及脂质代谢产物,促使炎性反应细胞尤其是中性粒细胞和巨噬细胞在肺组织中募集和活化,进一步产生细胞因子、趋化因子、氧自由基及蛋白酶等,扩大炎性反应,形成瀑布样级联反应,导致肺泡上皮细胞及血管内皮细胞受损、通透性增加,影响细胞间隙、水钠转运及表面活性物质的产生,大量富含蛋白及细胞成分的液体以较快速度进入肺组织,形成渗透性肺水肿,导致透明膜形成和肺泡塌陷,并伴有肺间质纤维化。姜黄素（Curcumin,Cur）是姜黄类植物中提取的一种多酚,具有广泛的药理作用,传统医学中应用于恶性肿瘤、糖尿病、风湿病等。近年的研究揭示其具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗纤维化以及防癌抗癌等作用,可能与其抑制NF-κB和激活剂蛋白-1（AP-1）等转录因子的激活及表达有关,而且无明显的毒副作用。研究表明姜黄素在炎症性疾病的治疗上有广阔的应用前景。但目前,姜黄素抗炎的生化基础及路径仍未阐明,能否作为脓毒症急性肺损伤的治疗用药也须作进一步评价。本研究拟利用大鼠盲肠结扎穿刺（CLP）致脓毒症急性肺损伤（ALI）的动物模型,从整体动物和分子水平观察姜黄素治疗脓毒症急性肺损伤后肺换气功能的改变、肺通透性变化、髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）水平、病理学指标以及细胞因子如TNF-α、IL-10、IL-6及ICAM-1、MIP2的变化,并结合NF-κB及MAPK三条信号转导通路（ERK、JNK和p38MAPK）的变化等,旨在阐明姜黄素治疗脓毒症急性肺损伤的机制,为脓毒症急性肺损伤的预防和临床救治提供一种新的研究思路。目的：观察姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用。方法：采用盲肠结扎穿刺致脓毒症急性肺损伤大鼠模型。SD大鼠随机分为5组：假手术组；模型对照组；溶媒干预组；低（50mg/kg）、高剂量（200mg/kg）姜黄素干预组。术后不同时间点（6h、12h、24h）处死大鼠8只收集血液及肺组织标本。测定实验各组多项动脉血气指标、肺水含量（肺湿干重比）、支气管肺泡灌洗液中蛋白含量及细胞（总数,中性粒细胞和淋巴细胞）计数、光镜观察肺组织病理形态变化、测定肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平及髓过氧化物酶（MPO）活性及细胞因子如’TNF-α、IL-1β、IL-6水平,并比较观察实验各组72小时生存率。结果：1.与假手术对照组比较,模型组各项指标均出现有统计学意义的显着改变：表明本研究制备的脓毒症致ALI模型成功可靠。与假手术对照组比较,（1）模型组大鼠肺部气体交换功能降低,表现为PaO2/FiO2和Pa O2均显着降低（P<0.05或P<0.01）；（2）模型组大鼠肺泡上皮细通透性及微血管通透性增加,表现为肺水含量（肺湿干重比）、BALF中的蛋白含量及细胞（总数,中性粒细胞和淋巴细胞）计数明显增高（P<0.05或P<0.01）；（3）模型组大鼠发生明显炎症反应,表现为肺组织病理评分明显增高,BALF细胞因子TNF-α、IL-1β、 IL-6水平明显增高（P<0.05或P<0.01）；（4）模型组大鼠肺部中性粒细胞浸润、氧自由基增多及抗氧化能力减弱,表现为模型组MPO活力水平及MDA水平明显增高,而SOD水平下降（P<0.05或P<0.01）。2.与模型组比较,不同剂量姜黄素干预组多项反应肺组织损伤的指标均得到显着改善,高剂量组效果基本上都优于低剂量组。与模型组比较：（1）姜黄素干预能改善大鼠肺部气体交换功能,不同剂量姜黄素干预组大鼠PaO2/FiO2和Pa02均有显着改善（P<0.05或P<0.01）,提高了肺组织的氧合状况。（2）姜黄素干预能抑制大鼠肺泡上皮细胞通透性及微血管通透性的恶性增加,不同剂量的姜黄素均能够显着降低CLP诱导ALI大鼠肺水含量（肺湿干重比）、BALF中的蛋白含量、细胞（总数,中性粒细胞和淋巴细胞）计数上调的指标（P<0.05或P<0.01）。（3）姜黄素干预能抑制大鼠炎症反应,不同剂量姜黄素干预组肺组织病理评分显着降低,不同剂量姜黄素干预组能够不同程度抑制CLP致ALI的BALF细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.01）,抑制肺部炎症反应。（4）姜黄素干预能抑制肺部中性粒细胞浸润及氧化应激反应,不同剂量姜黄素干预组MPO活力水平及MDA水平均显着的降低,SOD活性水平却显着上升（P<0.05或P<0.01）。3.假手术对照组、模型组及姜黄素干预组72h生存率观察发现姜黄素干预组能有效提高CLP大鼠72h生存率：其中50mg/kg剂量组72h生存率为80%,较CLP组提高了40%；200mg/kg剂量组72h生存率为90%,较CLP组提高了50%；而溶媒干预组72h生存率为40%,与CLP组相同。结论：姜黄素通过减轻脓毒症ALI大鼠肺部微血管内皮细胞损伤,改善肺部气体交换功能,抑制ALI大鼠肺部炎症反应和通透性增高等对脓毒症ALI大鼠发挥保护作用；最终显着提高大鼠的生存率。目的：通过观察姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠中IKK/NF-κB信号通路的影响,探讨其对脓毒症急性肺损伤保护作用的分子机制。方法：SD大鼠随机分为3组（每组10只）：假手术组；模型对照组；姜黄素干预组（200mg/kg）。CLP术后12h后,收集血液及肺组织标本。ELISA法检测血清中TNF-α、ICAM-1及MIP-2水平；RT-PCR检测肺组织TNF-α、ICAM-1及MIP-2mRNA的表达；EMSA法检测肺组织NF-κB DNA结合活性；Werstern blotting测定肺组织细胞核内NF-κB p65和肺组织中p-IKKser180/pser181和IκBα蛋白的表达。结果：1.与假手术对照组比较,模型组血清TNF-α、ICAM-1及MIP-2水平和肺组织TNF-α、ICAM-1及MIP-2mRNA的表达均明显增加（P<0.05或P<0.01）；与假手术对照组比较,模型组肺组织NF-κB DNA结合活性和肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白及肺组织p-IKKser180/pser181蛋白水平明显增加（P<0.05或P<0.01）,肺组织IKBa含量明显降低（P<0.05或P<0.01）。2.与模型组比较,姜黄素干预组血清TNF-α、ICAM-1及MIP-2水平和肺组织TNF-α、ICAM-1及MIP-2mRNA的表达均明显降低（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较,姜黄素干预组肺组织NF-κB DNA结合活性和肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白及肺组织p-IKKser180/βser181蛋白水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,肺组织IκBα含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：姜黄素对脓毒症ALI大鼠的保护作用可能与其抑制IKK/NF-κB信号通路减少相关炎性基因和蛋白表达有关。目的：通过观察姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠中MAPK（ERK、 JNK和p38MAPK）信号通路的影响,探讨其对脓毒症急性肺损伤保护作用的分子机制。方法：SD大鼠随机分为4组（每组6只）：假手术组；模型对照组；姜黄素干预组（200mg/kg）。CLP术后12h后,收集血液及肺组织标本。免疫组织化学染色和Werstern blotting检测pERK、pJNK及pp38MAPK蛋白表达；RT-PCR检测肺组织TNF-α mRNA的表达；ELISA检测血清中TNF-α水平。结果：1.与假手术对照组比较,模型组肺组织pERK、pJNK及pp38MAPK和TNF-α mRNA的表达水平及血清中TNF-α水平均明显增加（P<0.05或P<0.01）。2.与模型组比较,姜黄素干预组肺组织pERK、pJNK及pp38MAPK和TNF-α mRNA的表达水平及血清中TNF-α水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：姜黄素对脓毒症ALI大鼠的保护作用可能与其抑制MAPK三条信号通路（ERK、JNK和p38MAPK）的活化,减少相关炎性基因和蛋白表达有关。
二、内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织p38 mRNA及其蛋白质表达的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织p38 mRNA及其蛋白质表达的变化（论文提纲范文）
（1）线粒体形态功能障碍抗氧化应激系统与内毒素性肺损伤（论文提纲范文）
| 1 ALI的表现及可能机制 |
| 2 线粒体的抗氧化应激系统 |
| 2.1 超氧化物歧化酶（superoxide disrnutase,SOD) |
| 2.2 谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx) |
| 2.3 血红素氧化酶（HO) |
| 2.4 胆红素 |
| 2.5 其他 |
| 3 小结 |
| 4 展望 |
（2）脂肪间充质干细胞外泌体改善小鼠急性肺损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论(前言) |
| 参考文献 |
| 第一章 理论研究 |
| 综述 间充质干细胞来源的细胞外囊泡治疗肺部疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 脂肪间充质干细胞外泌体改善小鼠急性肺损伤的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 外泌体通过改善肺泡巨噬细胞线粒体代谢抑制炎症反应 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 线粒体复合物INDUFV2是外泌体调控炎症反应的关键分子 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 姜黄素预处理可提高外泌体免疫抑制功能的效应研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分: 外源性肺表面活性剂在新生儿ARDS中的疗效观察 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分: 分泌型磷脂酶A2阻断剂对新生大鼠ARDS肺损伤作用的体内实验研究 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分: 分泌型磷脂酶A2阻断剂在新生大鼠ARDS肺损伤中保护作用的体外实验 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 分泌型磷脂酶A2及其在ARDS中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩写简要 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（4）清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治急性肺损伤的研究进展 |
| 1 中医对急性肺损伤的认识 |
| 2 急性肺损伤的病因病机 |
| 3 中药复方药干预急性肺损伤的研究 |
| 4 中药单体干预急性肺损伤的研究 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性肺损伤发病机制及治疗药物的研究进展 |
| 1 病因与临床表现 |
| 2 病理特征 |
| 3 ALI的发病机制 |
| 4 ALI的治疗药物 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一部分 清金化痰汤干预急性肺损伤的研究 |
| 前言 |
| 实验一 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 质谱分析清金化痰汤及其含药血清的主要成分 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷对急性肺损伤干预作用的研究 |
| 前言 |
| 实验五 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足及展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）甲型流感病毒破坏肺上皮紧密连接结构的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 流感病毒的概述 |
| 1.1 流感病毒粒子的结构及基因组 |
| 1.2 流感病毒粒子的理化特性 |
| 1.3 流感病毒毒力及跨宿主传播机制 |
| 1.4 流感病毒诱导的宿主细胞信号通路 |
| 1.5 流感病毒的预防与治疗 |
| 2 肺泡上皮结构与紧密连接 |
| 2.1 肺泡上皮结构与功能 |
| 2.2 紧密连接的结构和通透性特点 |
| 2.3 紧密连接蛋白 |
| 2.4 紧密连接的信号调控 |
| 2.5 紧密连接与肺损伤之间的关系 |
| 3 流感病毒与肺损伤之间的关系 |
| 4 研究目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 H1N1病毒破坏肺上皮紧密连接结构的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 细胞株、病毒 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 细胞培养 |
| 1.6 病毒感染细胞 |
| 1.7 病毒滴度的测定 |
| 1.8 Western blot检测蛋白表达量 |
| 1.9 免疫荧光试验 |
| 1.10 荧光素酶报告试验 |
| 1.11 免疫共沉淀试验 |
| 1.12 细胞跨膜电阻的测定 |
| 1.13 Snail siRNA稳转细胞的筛选 |
| 1.14 细胞活力检测 |
| 1.15 小鼠体内试验 |
| 1.16 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 流感病毒H1N1激活转录因子Gli1并下调紧密连接蛋白的表达 |
| 2.2 转录因子Gli1对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.3 Snai1对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.4 MAPK信号通路对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.5 PI3K信号通路对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.6 H1N1流感病毒诱导Gli1和Snail的体内表达 |
| 2.7 体内抑制Gli1表达对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.8 细胞活力检测 |
| 2.9 转录因子Gli1与NS1蛋白相互作用 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 H5N1病毒破坏肺上皮紧密连接结构的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 试验试剂 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 Western blot检测相关蛋白表达 |
| 1.5 免疫荧光试验 |
| 1.6 免疫共沉淀试验 |
| 1.7 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 H5N1病毒抑制转录因子Gli1和Snail的表达 |
| 2.2 H5N1病毒抑制紧密连接蛋白的表达 |
| 2.3 MAPK信号通路对紧密连接蛋白的调控 |
| 2.4 p38信号通路对紧密连接蛋白的调控 |
| 2.5 JNK通路对紧密连接蛋白的调控 |
| 2.6 TAK1信号通路对紧密连接蛋白的调控 |
| 2.7 泛素化修饰对紧密连接蛋白的调控 |
| 2.8 H5N1病毒通过泛素化途径降解Occludin蛋白的表达 |
| 2.9 H5N1病毒体内抑制紧密连接蛋白表达 |
| 2.10 体内抑制TAK1表达对紧密连接蛋白的调控作用 |
| 2.11 细胞活力检测 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（6）从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 脓毒症急性肺损伤的现代医学研究进展 |
| 1.1.1 定义及流行病学 |
| 1.1.2 发病机制 |
| 1.1.3 脓毒症急性肺损伤的西医治疗进展 |
| 1.2 脓毒症急性肺损伤的中医研究进展 |
| 1.2.1 祖国医学对脓毒症急性肺损伤的认识 |
| 1.2.2 祖国医学对脓毒症急性肺损伤的治疗进展 |
| 1.3 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的研究进展 |
| 1.3.1 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的中医理论基础 |
| 1.3.2 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的西医理论依据及研究进展 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 针刺足三里对实验性脓毒症急性肺损伤的系统评价 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 检索策略 |
| 2.2.2 纳入与排除标准 |
| 2.2.3 数据提取与偏倚风险评价 |
| 2.3 研究结果 |
| 2.3.1 纳入文献筛选流程及结果 |
| 2.3.2 纳入研究的基本特征 |
| 2.3.3 研究质量和发表偏倚 |
| 2.3.4 疗效评价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 影响针刺足三里改善脓毒症急性肺损伤作用的因素 |
| 2.4.2 针刺足三里改善脓毒症急性肺损伤的结局指标的选择及机制探讨 |
| 2.4.3 局限性 |
| 2.4.4 进一步实验研究的方案优化 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症急性肺损伤的作用及机制研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 实验动物 |
| 3.3 实验流程及方案 |
| 3.3.1 实验流程图 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 造模方法 |
| 3.3.4 干预措施 |
| 3.4 取材、指标观察与检测 |
| 3.4.1 血清样本收集 |
| 3.4.2 支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)收集 |
| 3.4.3 BALF白细胞计数及中性粒细胞计数计算 |
| 3.4.4 肺组织取材 |
| 3.4.5 肺组织病理切片、苏木素-伊红(HE)染色 |
| 3.4.6 肺组织毛细血管蛋白渗漏程度评估 |
| 3.4.7 肺湿/干重比值 |
| 3.4.8 酶联免疫吸附法(ELISA)检测 |
| 3.4.9 肺组织病理评分 |
| 3.4.10 肺组织乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性检测 |
| 3.4.11 肺组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测 |
| 3.5 统计分析 |
| 3.6 结果 |
| 3.6.1 一般现象观察及生存分析 |
| 3.6.2 肺组织病理结果 |
| 3.6.3 大鼠肺组织湿/干重比(wet/dry ratio,W/D) |
| 3.6.4 BALF白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEU)计数 |
| 3.6.5 肺毛细血管蛋白渗漏程度 |
| 3.6.6 ELISA检测结果 |
| 3.6.7 ChAT、AChE活性检测 |
| 3.6.8 Western Blot检测结果 |
| 3.7 小结 |
| 3.8 讨论 |
| 3.8.1 ALI动物模型的评判标准 |
| 3.8.2 本实验采用的脓毒症ALI动物造模方式的理论依据及模型构造情况 |
| 3.8.3 干预措施以外的影响因素 |
| 3.8.4 肺脏局部CAP参与电针足三里对脓毒症ALI的调节 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间科研成果及奖励 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）HO-1对内毒素急性肺损伤内质网应激介导细胞凋亡的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、验证ERS介导的细胞凋亡参与内毒素急性肺损伤的发病过程 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.1.3 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 不同LPS诱导剂量下小鼠生存率比较 |
| 1.2.2 LPS诱导小鼠肺组织损伤程度的变化 |
| 1.2.3 LPS 诱导后不同时间点肺组织 W/D 比值和 BALF 中总蛋白含量的变化 |
| 1.2.4 LPS 诱导后不同时间点肺组织和血清内 MDA 含量和 SOD 活性的变化 |
| 1.2.5 LPS诱导后不同时间点肺组织和血清炎症因子的变化 |
| 1.2.6 TUDCA及衣霉素对LPS诱导小鼠肺损伤的影响 |
| 1.2.7 TUDCA 及衣霉素对 LPS 诱导小鼠肺组织和血清炎症因子的影响 |
| 1.2.8 TUDCA及衣霉素对LPS诱导小鼠肺组织细胞凋亡的影响 |
| 1.2.9 TUDCA 及衣霉素对 LPS 诱导小鼠肺组织 ERS 相关蛋白的影响 |
| 1.2.10 TUDCA 及衣霉素对 LPS 诱导小鼠肺组织 ERS 凋亡蛋白表达的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 内毒素所致急性肺损伤动物模型的制备方法 |
| 1.3.2 急性肺损伤动物模型的评估 |
| 1.3.3 内质网应激(ERS)在多种疾病过程中发挥着重要作用 |
| 1.3.4 ERS 同样在脓毒症及多种肺部疾病的发病过程中发挥着重要作用 |
| 1.4 小结 |
| 二、HO-1 对内毒素诱导小鼠肺组织内质网应激介导细胞凋亡的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 HO-1基因敲除对LPS诱导小鼠肺损伤的影响 |
| 2.2.2 HO-1基因敲除对LPS诱导小鼠肺组织细胞凋亡的影响 |
| 2.2.3 HO-1 基因敲除对 LPS 诱导小鼠肺组织 HO-1 表达及 CO 水平的影响 |
| 2.2.4 HO-1 基因敲除对 LPS 诱导小鼠肺组织 ERS 相关蛋白表达的影响 |
| 2.2.5 HO-1 基因敲除对 LPS 诱导小鼠肺组织 ERS 凋亡蛋白表达的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 ERS介导的细胞凋亡在急性肺损伤中的作用 |
| 2.3.2 血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)-1 的生物学作用 |
| 2.3.3 HO-1 通过调控 ERS 介导的细胞凋亡在内毒素肺损伤中发挥保护作用 |
| 2.4 小结 |
| 三、HO-1 对内毒素攻击肺泡Ⅱ型上皮细胞 ERS 介导细胞凋亡的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 统计方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 RNAi干扰效果的评价 |
| 3.2.2 siRNA基因沉默HO-1 对内毒素攻击肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响 |
| 3.2.3 siRNA基因沉默HO-1 对内毒素攻击肺泡Ⅱ型上皮细胞ERS相关蛋白表达的影响 |
| 3.2.4 探讨LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞时ERS介导细胞凋亡的分子通路 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 PERK/e IF2α通路在ERS中的作用 |
| 3.3.2 IRE1α/TRAF2 通路在ERS中的作用 |
| 3.3.3 siRNA沉默HO-1 对内毒素攻击细胞模型的影响 |
| 3.3.4 HO-1 可能通过 PERK/e IF2α/CHOP 和 IRElα/TRAF2/caspase-12 通路减轻肺泡Ⅱ型上皮细胞 ERS 介导的细胞凋亡 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 内质网应激与肺疾病的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）基于线粒体融合-分裂动态平衡研究HO-1在电针刺内毒素急性肺损伤中的保护作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、 电针刺对内毒素 ALI 肺组织线粒体融合/分裂运动的影 响 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要药品及试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.1.4 主要液体及其配制 |
| 1.1.5 实验分组 |
| 1.1.6 内毒素肺损伤模型的建立 |
| 1.1.7 电针刺模型的建立 |
| 1.1.8 肺组织病理学检测(HE染色) |
| 1.1.9 兔肺脏干湿比重(Wet/Dry,W/D) |
| 1.1.10 肺组织透射电镜流程 |
| 1.1.11 肺组织线粒体的提取 |
| 1.1.12 活性氧(ROS)生成 |
| 1.1.13 腺苷三磷酸(ATP)含量 |
| 1.1.14 线粒体膜电位(MMP)检测 |
| 1.1.15 呼吸控制率(RCR) |
| 1.1.16 Real-Time PCR法测定mRNA表达 |
| 1.1.17 Western blot法测定蛋白的表达 |
| 1.1.18 本实验流程图 |
| 1.1.19 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 光镜下兔肺组织病理学形态变化、肺损伤程度评分和肺组织W/D比率 |
| 1.2.2 透射电镜下观察兔肺组织线粒体结构变化 |
| 1.2.3 4 组兔ROS生成、ATP含量、MMP、RCR变化 |
| 1.2.4 4 组兔内毒素肺损伤肺组织Mfn1、Mfn2、OPA1 和Drp1 的mRNA表达水平的比较 |
| 1.2.5 4 组兔内毒素急性肺损伤肺组织Mfn1、Mfn2、OPA1 和Drp1 蛋白表达水平的比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 兔内毒素肺损伤模型的构建 |
| 1.3.2 电针刺模型的建立 |
| 1.3.3 线粒体融合/分裂运动失衡—内毒素急性肺损伤肺组织线粒体功能障碍的关键 |
| 1.3.4 电针刺调控ALI肺组织线粒体融合/分裂运动平衡 |
| 1.4 小结 |
| 二、 内毒素 ALI 时 HO-1 在电针刺调控细胞线粒体融合/分裂 运动中的作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要液体及其配制 |
| 2.1.5 实验分组 |
| 2.1.6 内毒素肺损伤模型的建立 |
| 2.1.7 电针刺模型的建立 |
| 2.1.8 肺组织病理学的观察 |
| 2.1.9 兔肺脏干湿比重(Wet/Dry,W/D) |
| 2.1.10 肺组织透射电镜流程 |
| 2.1.11 肺组织线粒体的提取 |
| 2.1.12 ROS生成 |
| 2.1.13 ATP含量 |
| 2.1.14 线粒体膜电位(MMP)检测 |
| 2.1.15 呼吸控制率(RCR) |
| 2.1.16 Real-Time PCR法测定mRNA表达 |
| 2.1.17 Western blot法测定蛋白的表达 |
| 2.1.18 本实验流程图 |
| 2.1.19 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 光镜下兔肺组织病理学形态变化、肺损伤程度评分和肺组织W/D比率 |
| 2.2.2 7 组兔ROS生成、ATP含量、线粒体膜电位(MMP)和呼吸控制率(RCR)的变化 |
| 2.2.3 透射电镜下观察兔肺组织线粒体结构变化 |
| 2.2.4 7 组兔肺组织线粒体融合-分裂标记物(Mfn1/2、OPA1 和Drp1)及HO-1mRNA表达 |
| 2.2.5 7 组兔肺组织线粒体融合-分裂标记物(Mfn1/2、OPA1 和Drp1)及HO-1蛋白的表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 电针刺肺保护作用的重要机制之一—抗氧化应激损伤 |
| 2.3.2 HO-1—电针刺抗氧化应激损伤作用在细胞超微环境层面的重要媒介 |
| 2.3.3 HO-1 转位线粒体并调控线粒体融合-分裂运动平衡—针刺在内毒素急性肺损伤时发挥肺保护作用的新机制 |
| 2.3.4 针刺的穴位特异性 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 本研究的局限与展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 电针刺在急性肺损伤中的保护作用机制 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）羟考酮及miRNA-140对急性肺损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 羟考酮对大鼠脓毒症急性肺损伤的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 检测指标 |
| 2 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 肺组织W/D,LPI |
| 3.2 肺通透性指数（LPI ) |
| 3.3 动脉血气分析 |
| 3.4 肺组织病理学检查 |
| 3.5 肺组织细胞凋亡率 |
| 3.6 各组大鼠血浆TNF-a及IL-ip的浓度 |
| 3.7 肺组织TLR4、NF-kB、AQP-1及AQP-5蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脓毒症急性肺损伤大鼠模型建立 |
| 4.2 急性肺损伤中AQP-1、AQP-5的改变以及羟考酮对其影响 |
| 4.3 急性肺损伤中TLR4的作用以及羟考酮对其影响 |
| 小结 |
| 第二部分 miR-140在急性肺损伤中的表达及其调控炎症反应机制的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 检测指标 |
| 2 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 急性肺损伤的动物实验 |
| 3.2 急性肺损伤的细胞实验 |
| 3.3 双荧光素酶报告实验 |
| 3.4 restore实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脓毒症急性肺损伤体内和体外模型的建立 |
| 4.2 microRNA在肺部炎症疾病中具有差异表达 |
| 4.3 miR-140靶基因的预测及验证 |
| 4.4 miR-140通过负向调控TLR4的表达而减轻ALI炎症反应 |
| 小结 |
| 第三部分 miR-140调控Toll like receptor 4信号通路在脂多糖诱导肺上皮细胞损伤中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 检测指标 |
| 2 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 肺上皮细胞形态学观察 |
| 3.2 A549细胞转染miR-140 mimic后miR-140的表达 |
| 3.3 调控miR-140后A549细胞的凋亡情况 |
| 3.4 调控miR-140后细胞TLR4、TRAF6、RIP、XIAPmRNA表达 |
| 3.5 调控miR-140后细胞TLR4、NF-κB、TRAF6、RIP、Caspase-3蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脓毒症急性肺损伤细胞模型的构建 |
| 4.2 miR-140参与了炎症所致的肺上皮细胞凋亡 |
| 4.3 TLR4-TRAF6-NF-κB信号通路在急性肺损伤中的意义 |
| 4.4 miR-140负向调控TLR4-TRAF6-NF-κB通路在急性肺损伤中的作用 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻博期间科研成果 |
| 致谢 |
（10）姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 附图 |
| 第二部分 姜黄素在脓毒症急性肺损伤大鼠中对IKK/NF-κB信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 附图 |
| 第三部分 姜黄素在脓毒症急性肺损伤大鼠中对MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 附图 |
| 研究总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间研究成果及获奖情况 |
四、内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织p38 mRNA及其蛋白质表达的变化（论文参考文献）
- [1]线粒体形态功能障碍抗氧化应激系统与内毒素性肺损伤[J]. 王丽,余剑波. 中国中西医结合外科杂志, 2021(03)
- [2]脂肪间充质干细胞外泌体改善小鼠急性肺损伤的作用机制研究[D]. 夏良君. 南京中医药大学, 2021(02)
- [3]分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用[D]. 罗景华. 南方医科大学, 2020(06)
- [4]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]甲型流感病毒破坏肺上皮紧密连接结构的分子机制[D]. 阮涛. 扬州大学, 2020(01)
- [6]从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制[D]. 赖芳. 广州中医药大学, 2020(06)
- [7]HO-1对内毒素急性肺损伤内质网应激介导细胞凋亡的作用及机制[D]. 宫丽荣. 天津医科大学, 2020(06)
- [8]基于线粒体融合-分裂动态平衡研究HO-1在电针刺内毒素急性肺损伤中的保护作用[D]. 张圆. 天津医科大学, 2019(02)
- [9]羟考酮及miRNA-140对急性肺损伤的保护作用[D]. 李心怡. 武汉大学, 2018(01)
- [10]姜黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用及分子机制研究[D]. 肖雪飞. 中南大学, 2012(12)