一、肝郁脾虚大鼠模型胃肠动力障碍的机制（论文文献综述）
李夏[1]（2021）在《基于内质网自噬研究痛泻要方对IBS-D肝郁脾虚证的作用机制》文中认为研究背景肠易激综合征（irritable bowel syndrome,IBS）是一种临床上常见的功能性胃肠疾病,症状包括腹部不适并伴随与之相关的大便性状或频率的改变。IBS影响着全球4-10%的人群。对大多数人来说,IBS症状会反复发作和缓解,为社会带来了巨大的经济负担,IBS的发病在患有心理疾病的人和年轻成年女性中比普通人群更常见。腹泻型肠易激综合征（irritable bowel syndrome with predominant diarrhea,IBS-D）是 IBS 中最常见的一个亚型。肠易激综合征的病理生理学机制复杂多样,目前也没有具体定论。生物-心理-社会概念认为,这种疾病是心理社会因素的产物,并在肠道生理病理相互作用的多个层面上发生改变。胃肠道动力异常,脑-肠神经系统调控功能异常,内脏超敏反应,肠道的感染与炎症反应,心理情绪改变,肠道微生态变化,肠道黏膜屏障功能的破坏等因素与之密切相关。肠道黏膜屏障损伤、肠道通透性增加为其主要的发病机制之一,各种病原体及毒素通过肠黏膜进入体内,引起一系列免疫反应。肠道黏膜通透性增加与内脏高敏感亦会相互作用,从而出现一系列腹痛、腹泻症状。内质网（endoplasmicreticulum,ER）是哺乳动物细胞内非常重要的细胞器之一,是新生跨膜蛋白和分泌蛋白脂质生物合成和折叠的关键部位。在多种应激因素的刺激下,可引起错误折叠蛋白在内质网中积累,进一步引发内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）反应,当ERS持续进行,未折叠及错误折叠蛋白过度堆积,细胞就会启动凋亡途径,影响肠道杯状细胞和潘氏细胞及其分泌功能,引起炎症反应、细胞凋亡及肠黏膜屏障损伤。ER自噬在ER稳态中发挥了作用,ER自噬可能通过缓解ERS所带来的肠道上皮细胞凋亡,对肠黏膜屏障起到了保护作用。因此,以内质网应激与自噬为切入点,研究肠道黏膜屏障的损伤机制,可以为治疗IBS-D提供一些新的思路与方法。根据IBS-D的主要临床症状,可将其归属于中医“腹痛”“泄泻”的范畴,其临床中最常见的证型为肝郁脾虚证,而痛泻要方作为临床治疗IBS-D肝郁脾虚证的经典名方,在临床实践中取得了良好的疗效。那么,痛泻要方缓解IBS-D症状的机制是什么,是否通过调控内质网自噬与应激来发挥作用,从而影响肠道黏膜屏障,这些问题都值得深入研究。第一部分临床研究研究目的观察痛泻要方治疗IBS-D肝郁脾虚证患者的疗效与安全性;明确血清中黏膜屏障损伤生物标记物及内质网应激标记蛋白GRP78在IBS-D患者中的表达情况,以及痛泻要方对血清中生物标记物的干预作用。研究方法采用探索性自身前后对照的试验方法。患者予痛泻要方颗粒1袋/次,2次/日,进行为期4周的治疗,停药4周后随访。以IBS-SSS量表、Bristol粪便性状量表作为主要疗效评价指标,以SF-36量表、功能性胃肠病PRO量表、中医症状积分量表作为次要疗效评价指标,对疗效进行评价;收集服药前（baseline）、服药后（week4）患者的血清和健康志愿者的血清,使用Elisa法检测血清中zonulin、I-FABP、DAO、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的含量水平;通过收集IBS-D患者和健康志愿者的肠道黏膜组织,使用HE染色法,观察病理变化;使用免疫组织化学法,观察内质网应激标志蛋白GRP78的表达。研究结果IBS-SSS 量表:基线（baseline）、服药中（week2）、服药后（week4）、随访期（week8）的IBS-SSS量表得分差异具有统计学意义（P<0.001）。Bristol 量表:基线（baseline）、服药中（week2）、服药后（week4）、随访期（week8）的Bristol量表得分差异具有统计学意义（P<0.001）。SF-36 量表:基线（baseline）、服药中（week2）、服药后（week4）、随访期（week8）的SF-36量表生理机能（PF）、生理职能（RP）、一般健康状况（GH）、精力（VT）、情感职能（RE）、精神健康（MH）、健康变化（HT）这7个维度的分值变化具有统计学意义（P<0.05）;躯体疼痛（BP）和社会功能（SF）分值差异不具有统计学意义（P>0.05）。功能性胃肠病PRO量表:基线（baseline）、服药中（week2）、服药后（week4）、随访期（week8）的功能性胃肠病PRO量表消化不良、全身状况、排便、心理、社会功能这5个维度的分值变化具有统计学意义（P<0.05）。反流维度分值变化不具有统计学意义（P>0.05）。中医症状积分:基线（baseline）、服药中（week2）、服药后（week4）、随访期（week8）的中医症状积分在少腹拘急、体倦乏力、神疲懒言、自汗、头身肢体困倦的分值变化具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。其余症状的分值变化不具有统计学意义（P>0.05）。HE染色:健康人结肠黏膜结构完整,上皮细胞之间连接紧密,腺体结构排列规则整齐,未见明显充血水肿、糜烂、溃疡。IBS-D患者结肠黏膜结构欠完整,黏膜增厚,腺体增生,黏膜下层血管扩张。血清Elisa检测:服药后（week4）,与基线（baseline）相比,患者血清zonulin、I-FABP、DAO、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平降低（P<0.001）,IL-10表达水平上升（P<0.001）;但服药后与健康对照组相比,血清zonulin、I-FABP、DAO、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-10表达水平差异仍具有统计学意义（P<0.001）。免疫组织化学检测:与健康对照组相比,IBS-D患者组GRP78蛋白的平均光密度值升高,差异具有统计学意义（P<0.001）。研究结论1.痛泻要方在改善IBS-D肝郁脾虚证患者的腹痛、腹胀程度及频率,粪便性状、生活质量及精神情绪等各方面具有良好的效果。在改善中医症状少腹拘急、体倦乏力、神疲懒言、自汗、头身肢体困倦、脘胁胀痛、情绪抑郁或急躁、失眠、嗳气、食少纳呆、脘腹痞闷、畏寒肢冷等方面也有一定的疗效。2.IBS-D患者肠道组织中出现病理学改变,肠黏膜结构欠完整,黏膜增厚,腺体增生,黏膜下层血管扩张。血清中肠道通透性相关蛋白zonulin、I-FABP、DAO表达水平增加,肠道通透性增加。血清中IL-6、IL-8、TNF-α表达水平升高、IL-10的表达水平降低,表明肠道组织中存在低度炎症,紧密连接损伤的情况。痛泻要方干预后可以改善上述情况。3.IBS-D患者肠道组织中内质网应激标志蛋白GRP78表达升高,说明IBS-D患者肠道组织中持续发生内质网应激现象。第二部分在体实验研究研究目的明确痛泻要方对IBS-D肝郁脾虚证病证结合模型大鼠的干预效果;以内质网应激、内质网自噬为切入点,探讨痛泻要方改善肠道黏膜屏障及肠道通透性的作用机制。研究方法采用新生大鼠母子分离法（neonatal maternal separation,NMS）+4%醋酸灌肠+慢性不可预知心理应激法的造模方法建立IBS-D肝郁脾虚证大鼠模型,使用痛泻要方干预14天,以一般情况、体重、粪便含水量、腹壁回撤反射实验（abdominal withdrawal reflex,AWR）、进食量、抓力、糖水偏嗜实验、尿D-木糖含量、病理组织表现为观察指标,对模型建立及中药疗效进行评价。采用免疫组织化学方法观察大鼠结肠组织GRP78的表达;采用透射电镜观察大鼠结肠上皮细胞中内质网与自噬小体的位置与数量;采用免疫荧光双标法观察自噬小体与内质网共定位情况;采用Western blot方法检测大鼠结肠组织各蛋白GRP78、Claudin-4、Occludin、LC3、p62、Beclinl、E-caderhin 的表达情况。研究结果实验期间正常组大鼠毛质柔顺、色泽光亮、干净,精神状态良好,活动性好,粪便成枣核样。病证结合模型组大鼠毛色晦暗、干枯,精神状态欠佳,活动减少,粪便溏稀,肛周污渍明显。病证结合模型组大鼠与正常组大鼠相比,体重减轻,差异具有统计学意义（P<0.01）;粪便含水量增加,差异具有统计学意义（P<0.01）;各档位AWR评分均升高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;进食量明显减少,差异具有统计学意义（P<0.01）;抓力明显减弱,差异具有统计学意义（P<0.001）;糖水偏嗜程度明显降低,差异具有统计学意义（P<0.001）;尿D-木糖含量明显降低,差异具有统计学意义（P<0.001）。使用痛泻要方干预14天后,与模型组相比,痛泻要方低剂量组大鼠体重升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;痛泻要方低、中、高剂量组、阳性药物雷帕霉素组大鼠粪便含水量、AWR评分均降低;大鼠进食量、糖水偏嗜、尿D-木糖含量均增加;差异具有统计学意义（P<0.05）;痛泻要方低、中剂量组、阳性药物雷帕霉素组大鼠抓力均增加,差异具有统计学意义（P<0.01）。GRP78免疫组化结果显示,与模型组相比,痛泻要方低、中剂量组、雷帕霉素组GRP78光密度值降低,差异具有统计学意义（P<0.01,P<0.001）;透射电镜下观察肠上皮细胞发现,痛泻要方低、中剂量组、雷帕霉素组内质网附近可见自噬小体,与正常组、病证结合模型组、3-MA组相比,自噬小体数量较多;免疫荧光双标结果显示,与模型组相比,痛泻要方低、中剂量组、雷帕霉素组大鼠肠组织黏膜层Atg8表达升高,与内质网共定位现象增多。Western blot结果显示,与病证结合模型组相比,痛泻要方低、中、高剂量组、阳性药雷帕霉素组GRP78的表达均具有下调趋势,差异不具有统计学意义（P>0.05）;与病证结合模型组相比,痛泻要方低、中、高剂量组、阳性药物雷帕霉素组 Claudin-4 蛋白、Occludin 蛋白、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比例、Beclin-1 蛋白、E-caderhin 蛋白的表达均具有上调趋势,但差异不具有统计学意义（P>0.05）;痛泻要方低、中、高剂量组、雷帕霉素组p62蛋白的表达量均具有下调趋势,但差异不具有统计学意义（P>0.05）。研究结论1.新生大鼠母子分离+4%醋酸灌肠+慢性不可预知心理应激三者叠加法建立的病证结合大鼠模型符合IBS-D肝郁脾虚证的疾病和中医证候特征,是中药复方干预疗效观察及疾病证候机制研究的理想模型。2.痛泻要方可改善大鼠一般状态、体重、进食量、粪便含水量、肠道内脏敏感性、肠道通透性、粪便含水量。在改善肠道黏膜病理表现,缓解轻度炎症也起到一定的作用。3.痛泻要方可以调节内质网自噬水平,促进自噬小体的产生及内质网自噬,进而缓解内质网应激,起到对内质网稳态及细胞稳态的调节作用,抑制因内质网应激而引起的细胞凋亡,增强肠道黏膜屏障,降低肠道通透性。
钱梦[2]（2021）在《补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础》文中研究说明研究背景:中医证候具有跨系统的病理生理学内涵,中医复方成分复杂且具有多系统、多靶点的作用特点,这使得单一角度研究证候或方药具有很大的不确定性。而辨证论治中的“方-证相关”的经验及原理则要求在研究方药或证候时有必要将二个方面结合起来。目前,探查方证关联的现代生物学基础正在成为方证相关领域的重要研究热点。“脾主肌肉”是中医脾脏的重要生理属性之一,补中益气汤是健脾益气的代表方之一,临床和实验研究显示该方用于脾虚肌无力显示一定的健脾强肌效用,但目前有关脾主肌肉的现代病理生理学内涵和补中益气汤作用的分子机制尚不清楚。因此探查补中益气汤（方）与脾虚肌肉无力（证）关联的生物学基础对于揭示脾主肌肉的现代内涵和补中益气汤的分子机制具有重要的科学意义。肌肉减少症临床表现以肌肉无力或/和萎缩为特征,与中医脾虚肌肉无力证甚为接近。研究表明,蛋白质代谢失衡是肌肉减少症的重要的病理生理学基础,涉及系统-器官-细胞分子不同层面的调控失常。本学科前期的研究显示,饮食不节+游泳力竭法复制的脾虚证大鼠模型涉及多系统的异常变化并伴有骨骼肌肌力下降及病理损伤,涉及能量代谢障碍、神经-肌肉接头功能异常及炎性损伤等机制。健脾类方的比较研究显示,补中益气汤对该模型肌肉损伤有更好的改善作用,并涉及对其多个病理生理学环节的调节。基于上述背景,我们推测中医脾虚肌无力证是之前探查到的炎性激活、能量代谢异常、内分泌失调等多个环节共同参与导致肌肉蛋白质代谢失调为特点的一种病证,并有其独特分子调控机制。研究目的:应用“饮食失节+过度疲劳”法建立并评价脾虚肌无力证小鼠模型,在此基础上观察补中益气汤对该模型的健脾强肌效用,并以肌肉蛋白质代谢失衡为切入,在整体、器官及分子不同维度上,探查脾虚肌无力证模型的病理生理变化特点与补中益气汤的作用靶标及二者关联的生物学基础。研究一脾虚肌无力模型小鼠的建立与评价方法:昆明小鼠随机分为正常组与模型组（每组各30只）,模型组采用“饮食不节+过度疲劳”法建立脾虚证肌无力小鼠模型,正常组正常饲养。各组小鼠:（1）每周观测并记录各组小鼠的外观行为评分、体重及饮食量;（2）实验第2、4周末进行负重游泳力竭实验,测定小鼠负重游泳力竭时间;（3）实验第1、2、3、4周末使用抓握力仪测定小鼠抓握力;（4）第15 d和29 d分两批次,酶联免疫（ELISA）法测定小鼠血清D-木糖、胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、血管活性肠肽（VIP）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）;称量法测定计算胸腺与脾脏指数、肌湿重与肌重/体重比;制作腓肠肌HE切片,观察病理改变,利用Image J软件计算肌纤维直径与横截面面积。结果:与正常组比较,模型组小鼠:（1）实验第2-4周活动状态、皮肤毛发、大便状态积分均明显增高（P<0.01）;第1-4周体重明显降低（P<0.01）;第1周饮食量明显增加（P<0.01）,第3-4周饮食量明显降低（P<0.01）;（2）第2-4周游泳力竭时间明显缩短（P<0.01或P<0.05）;（3）第1-4周抓握力呈递进性明显降低（P<0.01）;（4）第2-4周血清D-木糖、GAS、MTL含量明显降低,VIP明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数明显降低,血清IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.01 或P<0.05）,IL-6 明显升高（P<0.01 或P<0.05）;腓肠肌湿重和湿重/体重比明显降低（P<0.05）,光镜下的腓肠肌纤维排列松散,边缘变钝,肌纤维间隙与肌束间隙明显变宽,肌纤维直径与横截面面积明显减少（P<0.01 或 P<0.05）。结论:“饮食失节+疲劳过度”法建立的模型小鼠在呈现中医脾虚证候相关的外观行为和实验室指标改变的同时,伴有骨骼肌肌力的下降与肌纤维的萎缩,表明“饮食失节+疲劳过度”法可成功建立小鼠脾虚肌无力证模型。研究二脾虚肌无力小鼠肌肉蛋白质失衡的分子机制及补中益气汤的干预作用方法:昆明小鼠随机分为正常组、模型组、补中益气汤高剂量组与低剂量组（每组各15只）。除正常组外,其余各组小鼠均采用“饮食不节+过度疲劳”法建立脾虚证肌无力模型,连续4周;其中中药高、低剂量组自第15d开始分别按3.8 g/kg·d和1.9g/kg-d灌服补中益气汤（颗粒溶液）。各组小鼠按研究一时间与方法观测:（1）观测不同时间点的外观行为积分、体重、饮食量、游泳力竭时间与抓握力;（2）实验第29 d的血清D-木糖、GAS、MTL、VIP、IL-1β、IL-6、TNF-α,促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、生长激素（GH）、睾酮（T）,下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）与促性腺激素释放激素（GnRH）;胸腺与脾脏指数及肌湿重与肌重/体重比,腓肠肌的病理改变和肌纤维直径与横截面面积;ELISA法测定腓肠肌糖皮质激素受体α（GRα）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）、胰岛素（INS）、胰岛素受体（INSR）、GH、T、IL-1β、IL-6、TNF-α、肌肉抑制素（myostatin）、激活素受体ⅡB（ACTR2B）;Western Blot法检测腓肠肌磷脂酰肌醇3-激酶（pi3k）、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、磷酸化核糖体蛋白S6激酶（p-s6k1）、磷酸化真核翻译起始因子4B（p-eIF4B）、胰岛素受体低物1（IRS1）、磷酸化苏氨酸激酶3（p-Smad3）、磷酸化叉头蛋白O3A（p-Foxo3a）蛋白的相对表达量;免疫组化法检测肌萎缩蛋白1（Atrogin-1）和肌肉特异性环指蛋白1（MuRF-1）的阳性表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠:（1）实验第1-4周活动状态积分明显增高（P<0.05）,第2-4周皮肤毛发和大便状态积分明显增高（P<0.01）;第1周饮食量明显增加（P<0.01）,第3-4周饮食量明显降低（P<0.01）;第1-4周体重明显降低（P<0.01）,游泳力竭时间明显缩短（P<0.05）。（2）血清D-木糖含量、GAS、MTL含量明显降低,VIP明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数均明显降低（P<0.01）;腓肠肌湿重和肌重/体重比均明显降低（P<0.01或P<0.05）,镜下腓肠肌纤维排列松散,边缘变钝,肌纤维间隙与肌束间隙明显变宽;肌纤维直径与横截面面积均明显减少（P<0.01）;第2和第4周抓握力明显下降（P<0.01）;腓肠肌总蛋白明显降低（P<0.05）,INS、INSR、IGF-1和IGF-1R 含量明显减少（P<0.01）,pi3k、p-akt、mTOR、p-s6k1 以及 p-eIF4B 的表达量降低（P<0.05）,Myostatin、ACTR2B 含量和 Atrogin-1、MuRF-1、p-Smad3、p-Foxo3a表达量均明显增加（P<0.01或P<0.05）;下丘脑CRH/GnRH明显增加/降低（P<0.01 或P<0.05）,血清 ACTH、CORT、IL-6 明显升高,GH、T、IL-1β、TNF-α 明显降低（P<0.01 或P<0.05）,腓肠肌 GR-α、IL-1β、IL-6、TNF-α明显升高（P<0.01或P<0.05）,GH和T明显降低（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较,中药高、低剂量组小鼠:（1）实验第3-4周活动状态、皮肤毛发、大便状态积分均明显降低（P<0.01或P<0.05）,体重明显增加（P<0.01）;第4周饮食量明显增加（P<0.01）,游泳力竭时间明显延长（P<0.05）。（2）第4周,高剂量组D-木糖含量明显增加、VIP含量明显降低（P<0.01或P<0.05）,高、低剂量组的血清GAS、MTL含量均明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数均明显升高（P<0.01或P<0.05）;二个剂量组的抓握力呈不同程度地增加（P<0.01）;高剂量组肌纤维形态与正常组接近,肌纤维直径与横截面面积均明显增加（P<0.01或P<0.05）;高、低剂量组腓肠肌总蛋白均明显增高（P<0.05）,腓肠肌内 INS、INSR、IGF-1 和 IGF-1R含量明显增加（P<0.01 或P<0.05）,pi3k、p-akt与mTOR蛋白表达量均明显升高（P<0.01或P<0.05）,Myostatin和ACTR2B含量、Atrogin-1和MuRF-1表达量明显降低（P<0.01或P<0.05）,高剂量组p-s6k1蛋白表达量明显升高（P<0.05）;高、低剂量组下丘脑CRH与血清ACTH、CORT、IL-6和腓肠肌内GR-α、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均明显降低（P<0.01或P<0.05）,下丘脑GnRH、血清T、L-1β、TNF-α和腓肠肌GH、T均明显升高（P<0.01或P<0.05）,高剂量组血清GH明显升高（P<0.05）。结论:脾虚肌无力小鼠的肌肉萎缩机制涉及整体、器官组织与分子不同层面。整体水平上,HPA轴功能的过度激活促进了蛋白质的降解,而内分泌系统相关激素的分泌减少又不利于蛋白质的合成;器官组织层面上,肌肉组织内炎性因子的高表达进一步促进了蛋白质降解;分子层面上,肌肉蛋白质代谢失衡则涉及mTOR/INS与UPS/myostatin信号通路之间的平衡失调。补中益气汤对脾虚肌无力模型小鼠具有明显的健脾强肌效用,其作用机制涉及对神经-内分泌-免疫多系统、肌肉蛋白质的合成与分解平衡及mTOR/INS与UPS/myostatin信号通路的调节。上述研究结果,为补中益气汤益气健脾强肌作用的临床运用提供了一定的药理学依据,对于揭示中医脾主肌肉的现代内涵、补益气汤健脾强肌作用的分子机制及补中益气汤-脾虚肌肉无力证关联的生物学基础具有重要意义。
王淼蕾[3]（2021）在《平胃胶囊对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠肠黏膜屏障功能及肠道微生态的影响》文中研究表明目的:观察平胃胶囊对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠闭合蛋白（Occludin）、骨架蛋白（Claudin-4）、带状闭合蛋白-1（ZO-1）的影响及肠道微生物群落丰富度和多样性变化的影响,挖掘其可能作用机制及治疗靶点,为临床应用平胃胶囊治疗该病提供实验依据。方法:将48只健康Wistar雄性大鼠适应性喂养一周之后进行随机分组,分为正常组10只、造模组38只,模型建立21天后,随机抽取造模组与正常组大鼠各3只,进行HE染色观察结肠组织病理形态变化,并观察记录的大鼠相关行为学检测来验证模型是否建立成功。再将造模组随机分为模型组（model）、匹维溴铵组（PWBJ）、中药低剂量组（PWⅠ）、中药中剂量组（PWⅡ）、中药高剂量组（PWⅢ）,每组7只,进行治疗给药,给药14天,每日2次,两次至少间隔8h。治疗给药结束后进行行为学实验并采集大鼠血浆、结肠组织及粪便标本,实验期间观察记录大鼠的一般情况、体重增长情况;光学显微镜下观察大鼠结肠组织的病理学形态改变。采用ELISA法检测大鼠血浆中D-乳酸水平;实时荧光定量（RT-q PCR）技术检测大鼠结肠组织中ZO-1、Occludin、Claudin-4m RNA的表达;采用免疫组化SP法检测大鼠结肠组织中ZO-1、Occludin、Claudin-4的蛋白含量。采用16s RNA基因测序分析大鼠粪便中微生物群落丰富度和多样性的变化。结果:（1）一般情况:与contrl相比,model大鼠形体消瘦,懒动喜扎堆,毛发干枯黄燥,情绪暴躁易怒,大便溏稀、肛周及尾巴被稀便包裹呈黑灰色且污浊臭秽;与model相比,治疗后各组大鼠精神、活动度明显好转,大便成形,腹泻明显改善。（2）体重变化:与contrl相比,model大鼠体重明显下降（P<0.001）;与model相比,各组内大鼠体重未见显着差异（P>0.05）,治疗后PWBJ、PWⅠ、PWⅡ组体重明显上升（P<0.05）,差异具有统计学意义,且PWBJ、PWⅡ、PWⅢ三组间体重比较无统计学意义（P>0.05）。（3）大鼠粪便含水量:与contrl相比,model大鼠粪便含水量均显着上升（P<0.05,P<0.01）;与model相比,治疗后各组大鼠粪便含水量均有不同程度的下调（P<0.01）,差异具有统计学意义。（4）旷场实验:与contrl相比,model大鼠行为轨迹总路程、直立次数、穿越中央场次数明显减少（P<0.001,P<0.01）;与model相比,治疗后各组大鼠行为轨迹总路程、直立次数、穿越中央场次数均显着增加（P<0.001,P<0.01,P<0.05）,差异具有统计学意义。（5）糖水偏嗜率:与contrl相比,model大鼠对糖水的偏嗜率明显下降（P<0.001,P<0.05）,与model相比,治疗后各组大鼠对糖水的偏嗜率显着上升（P<0.05）,差异具有统计学意义。（6）血浆D-LA含量检测:与contrl相比,model大鼠血浆中D-LA含量有所升高（P<0.05）,与model相比,治疗后各组大鼠血浆中D-LA含量表达降低（P<0.01,P<0.05）,差异具有统计学意义。（7）结肠组织病理学形态改变:光镜下观察各组大鼠结肠黏膜组织,黏膜各层上皮结构及细胞排列完整,未见明显的充血、水肿,各组表现相似;model大鼠结肠组织可见少量炎性细胞浸润。（8）RT-q PCR法检测结果:与contrl相比,model大鼠结肠组织中Occludin m RNA、ZO-1m RNA水平显着下降（P<0.001）,Claudin-4m RNA水平明显升高（P<0.01）,与model相比,治疗后各组大鼠结肠组织中Occludin m RNA、ZO-1m RNA水平显着上升（P<0.001,P<0.05）,Claudin-4m RNA水平明显下降（P<0.01）,差异具有统计学意义。（9）免疫组化SP法检测结果:结肠组织中Occludin、ZO-1蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.001）,Claudin-4蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.001）;治疗后各组大鼠结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达均明显升高,Claudin-4蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）,差异具有统计学意义。（10）肠道微生物多样性变化:与contrl相比,model中OTUs明显增多,并且在治疗后各组OTUs均显着下降。6组大鼠肠道菌群微生物群落结构组成在门水平上主要由厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和变形菌门（Proteobacteria）组成,其中model厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度增加,治疗后其相对丰度均有所下降;PWBJ组大鼠肠道菌群拟杆菌门（Bacteroidetes）的相对丰度高于model;在属水平上主要由乳酸杆菌属（Lactobacillus）、肠球菌属（Enterococcus）、多形杆状菌属（Bacteroides）组成,其中益生菌乳酸杆菌属（Lactobacillus）相对丰度在model明显降低,平胃胶囊不同剂量组乳酸杆菌属相对丰度均明显高于model。结论:（1）4%乙酸灌肠+束缚应激+夹尾刺激可成功建立肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型。（2）平胃胶囊可有效地恢复模型大鼠的体重,缓解大鼠的腹泻程度,改善大鼠焦虑、抑郁样行为改变,起到调节情绪障碍的作用。（3）平胃胶囊可降低大鼠血浆中D-LA的含量,上调ZO-1、Occludin的水平,下调Claudin-4的水平,说明IBS-D的发病机制与肠黏膜屏障功能的改变即ZO-1、Occludin、Claudin-4的水平变化有关。平胃胶囊可能通过改善肠黏膜屏障功能及肠道菌群的变化起到治疗IBS-D的作用。
刘阳[4]（2021）在《和胃理气方对功能性消化不良大鼠胃肠动力及cAMP/PKA信号通路的影响》文中研究说明目的:通过观察和胃理气方对肝郁气滞型功能性消化不良（FD）模型大鼠一般状况、胃肠动力水平及胃组织环磷酸腺苷（c AMP）/蛋白激酶A（PKA）信号通路的影响,从胃肠动力障碍角度探究和胃理气方治疗功能性消化不良可能机制,为中医药治疗功能性消化不良提供新的切入点。材料与方法:选取40只SPF级SD大鼠,依照随机数字表法将大鼠分为空白组、模型组、多潘立酮组、和胃理气方组,各组10只大鼠。除空白组外,别的各组采取“郭氏夹尾激怒法”制备FD大鼠肝郁气滞型动物模型。造模时间共为14天。在造模后的治疗阶段,空白组与模型组用等量生理盐水实行灌胃治疗,连续治疗14天,早晚各1次;多潘立酮组给予多潘立酮溶液实行灌胃治疗,连续治疗14天,早晚各1次;和胃理气方组给予煎制而成的中药混悬液实行灌胃治疗,连续治疗14天,早晚各1次。于造模前1天、造模第14天以及治疗第14天分别观测大鼠体重与一般情况变化。治疗完成后,对大鼠进行麻醉并处死,确定胃排空与小肠推进的比值,采用ELISA法测定大鼠血液中c AMP、PKA含量,用western-blot法检测大鼠胃窦组织中c AMP蛋白和PKA蛋白的表达水平。结果:1.各组大鼠一般情况相对比。造模前1天各组所有大鼠毛发光亮、大便成型、情绪平和、精神状态尚可,各组大鼠行为学及体重指标无明显差异,不具有统计学意义（P>0.05）。造模第14天,空白组大鼠一般状况及体重指标与造模前基本无明显变化,而其他3组造模组大鼠行为学表现变化比较明显,大鼠均出现了皮毛粗糙无光泽,情绪不稳定,容易激怒撕咬,大便稀溏,倦卧少动,体重增长缓慢。与空白组大鼠相比,造模大鼠和空白组之间的差异具有统计学显着（P<0.05）。治疗第14天,多潘立酮组与和胃理气方组大鼠较模型组大鼠行为学及体重指标均有所改善,多潘立酮组和和胃理气方组大鼠毛发变得光泽柔顺,情绪趋于稳定平和,活动量增加,大便逐渐成形。多潘立酮组与和胃理气方组与模型组相比,食物摄入量与饮用水量显着增多,体重明显增长（P<0.05）;在治疗后,多潘立酮组与和胃理气方组相比较,大鼠行为学与体重指标改变无显着差别,差异无统计学意义（P>0.05）。2.四组大鼠胃排空率、小肠推进比相对比发现。与空白组相比,模型组大鼠胃排空速度与小肠推进速度显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。经药物治疗后,与模型组相比,多潘立酮组与和胃理气方组胃排空率和小肠推进比明显提高（P<0.05）。3.免疫组织化学法检测结果。模型组对比空白组发现,测得的大鼠血液里c AMP、PKA水平明显减低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,c AMP、PKA在多潘立酮组与和胃理气方组大鼠血液中显着增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。和胃理气方组与多潘立酮组相比,大鼠血液中c AMP、PKA含量无明显差异（P>0.05）。4.western-blot法检测结果。与空白组对照,c AMP、PKA蛋白在模型组大鼠胃窦组织中表达显着减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,c AMP、PKA蛋白在多潘立酮组与和胃理气方组大鼠胃窦组织中表达含量明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。和胃理气方组与多潘立酮组相比,大鼠胃窦组织中c AMP、PKA蛋白表达无明显差异（P>0.05）。结论:1.和胃理气方能够改善肝郁气滞型FD模型大鼠的行为学指标与体重指标。2.和胃理气方能够提高肝郁气滞型FD模型大鼠的胃排空速度和小肠推进速度。3.和胃理气方能够改善肝郁气滞型FD模型大鼠的胃肠排空,调节胃肠功能,进而促进胃肠动力,其机制可能与激活c AMP/PKA信号通路,提高c AMP、PKA的表达有关。
张鑫[5]（2021）在《基于脑肠互动探讨和胃理气方对功能性消化不良大鼠脑肠肽的影响》文中研究说明目的:通过观察和胃理气方对肝郁型功能性消化不良大鼠胃排空功能及下丘脑和胃中Ghrelin蛋白表达、血浆中Nesfatin-1的含量的影响,从脑肠互动方面探讨和胃理气方治疗肝郁型功能性消化不良的可能机制。材料和方法:将40只健康雌性Wistar大鼠,按照随机数字表法将大鼠随机分为2组,正常组（10只）和模型组（30只）。适应性喂养7天后,模型组进行不规则喂养加夹尾刺激双因素法建立肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠模型,空白组进行常规饲养,共计21天。期间密切观察大鼠比较大鼠的一般状态。造模结束后,将模型组大鼠随机分为和胃理气方组、吗丁啉组及模型对照组,每组10只。和胃理气方组予大鼠0.9702g/ml的和胃理气方药液灌胃,吗丁啉组予大鼠0.25mg/ml的吗丁啉悬浊液灌胃,空白组及模型组在药物组给予药物治疗期间,同时灌服等体积的0.9%生理盐水。每日两次,连续14天。治疗结束后,观察记录各组大鼠的一般状态并与之前进行比较。研究结束后,对所有大鼠进行胃排空率检测以评估其胃肠动力、测定大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin的蛋白表达及血清Nesfatin-1含量。结果:1.与空白组大鼠相比,模型组大鼠表现出易惊易怒,毛发黯淡,反应迟钝,厌食厌水等状态,胃排空率显着降低（P<0.05）,提示造模成功。2.与空白组大鼠相比,肝郁型FD大鼠胃窦及下丘脑Ghrelin表达水平均明显下降（P<0.05,P<0.05）,和胃理气方组及吗丁啉组大鼠胃窦及下丘脑Ghrelin蛋白表达显着提高（P<0.05,P<0.05）,与和胃理气方组相比,吗丁啉组大鼠胃Ghrelin蛋白表达稍低（P<0.05）。3.与空白组大鼠相比,肝郁型FD模型组大鼠血清Nesfatin-1含量明显升高（P<0.05）,经药物治疗后,和胃理气方组及吗丁啉组大鼠血清Nesfatin-1含量明显降低（P<0.05,P<0.05）。结论:1.本实验成功复制肝郁型FD大鼠模型,通过对比治疗前后的大鼠一般状态,表明和胃理气方对肝郁型功能性消化不良大鼠的焦虑抑郁状态具有明显改善。2.通过对比各组大鼠胃排空率,和胃理气方组和吗丁啉组大鼠胃排空率显着高于模型组,表明和胃理气方与吗丁啉可较好的促进胃肠动力,改善功能性消化不良大鼠的胃肠道症状。3.通过检测各组大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin蛋白的表达,发现与空白对照组相比,模型组大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin蛋白表达明显降低,和胃理气方能上调肝郁型FD大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin蛋白的表达,推测和胃理气方可能通过参与调节脑肠互动改善肝郁型FD大鼠的胃肠动力及抑郁状态。4.通过检测各组大鼠血清Nesfatin-1的含量,与空白对照组相比,模型组大鼠血清Nesfatin-1的含量升高,和胃理气方可以明显降低肝郁型FD大鼠血清Nesfatin-1的含量,说明和胃理气方可能通过下调Nesfatin-1的表达来促进肝郁型FD大鼠的食欲及摄食行为。推测和胃理气方改善肝郁型FD大鼠的抑郁及食欲可能是通过参与脑肠肽的调节,从多方面来治疗功能性消化不良,具有良好优势。
范梦男[6]（2020）在《胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究》文中指出目的:观察胃痛消痞方对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）大鼠行为学、胃内残留率、小肠推进率、胃窦及下丘脑组织脑肠肽（brain-gut peptide,BGP）)相关受体表达的影响,从脑肠轴（brain-gut axis,BGA）及BGP途径探讨胃痛消痞方治疗FD的可能的分子机制,为临床治疗FD探索新方法,为FD的中医临床治疗提供理论基础与实验依据。材料与方法:健康SPF级SD雄性大鼠48只,随机分为空白对照组（空白组）、模型空白组（模型组）、胃痛消痞方组（中药组）、莫沙必利组（西药组）,每组各12只。除空白组外,其他各组大鼠采用改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法复制FD大鼠模型,连续刺激21d。造模成功后,观察各组大鼠一般情况及行为学表现,且解剖胃窦显示并无实质性损伤;治疗期间,空白组、模型组大鼠灌胃生理盐水。实验干预的胃痛消痞方由免煎中药配方颗粒剂组成:党参10g、柴胡12g、白芍20g、延胡索20g、白术20g、砂仁15g、枳实12g、炒麦芽20g、炙甘草6g、焦山楂10g、鸡内金10g。西药药选用枸橼酸莫沙必利片（10mg/片）。中药组和西药组大鼠根据人与大鼠等效剂量换算后给予相应药物灌胃,每日2次,连续给药21d。治疗结束后,观察各组大鼠的一般情况评分;禁食不禁水24小时后,将混有墨水的营养性半固体糊灌胃各组大鼠,麻醉后处死各组大鼠,测定胃内残留率和小肠推进率;免疫组化法检测各组大鼠胃窦及下丘脑五-羟色胺（5-Hydroxytryptamine,5-HT）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达;实时荧光定量PCR法（quantitative Real-time PCR）及蛋白印记（western Blot,WB）法检测各组大鼠胃窦及下丘脑组织中BDNF、五-羟色胺3a受体（5-Hydroxytryptamine 3a receptors,5-HT3aR）、α型降钙素基因相关肽（α-calcitonin gene-related peptide,α-CGRP）、G蛋白偶联受体39（G protein-coupled receptor 39,GPR39）基因及蛋白表达。结果:1.各组大鼠一般状态比较造模后,空白组大鼠皮毛光泽,精神状态良好,活动度良好,饮水量及进食量正常,体质量增加,肌肉结实,二便正常,全程无死亡;各造模组大鼠均出现毛色光泽度差、精神萎靡、活动度差、进食量及饮水量减少、体质量增加缓慢或减少等现象。治疗3周之后,模型组大鼠一般情况及行为表现仍然不佳,中药组及西药组上述情况均有不同程度的好转,但无明显差异。2.各组大鼠胃肠动力改变与空白组比较,模型组大鼠小肠推进率降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠小肠推进率增高（P<0.05）,且中药组较西药组增加明显（P<0.05）,差异显着。与空白组比较,模型组大鼠胃内残留率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃内残留率降低（P<0.05）,且中药组较西药组降低明显（P<0.05）,差异显着。3、各组大鼠胃窦及下丘脑组织5-HT、BDNF蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达增高（P<0.05）,且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。4、各组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39 mRNA表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA相对表达量减少（P<0.05）;与模型组比较,中药组及西药组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA相对表达量均增加（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中GPR39 mRNA表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中GPR39 mRNA表达降低（P<0.05）;与西药组比较,中药组大鼠胃窦组织GPR39 mRNA表达降低不明显,差异显着（P<0.05）。5、各组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39 mRNA表达与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA表达降低（P<0.05）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA表达增高（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP mRNA增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中GPR39 mRNA表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中GPR39 mRNA表达降低（P<0.05）;且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。6、各组大鼠胃窦组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中BDNF、α-CGRP蛋白表达降低（P<0.05）,其中5-HT3aR蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中BDNF、5-HT3aR、CGRP蛋白表达增高（P<0.05）;与西药组比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP增加明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织中GPR39蛋白表达增加（P<0.01）;与模型组相比较,中药组和西药组大鼠胃窦组织中GPR39蛋白表达降低（P<0.05）;与中药组相比较,西药组大鼠胃窦组织GPR39蛋白降低明显,差异显着（P<0.05）。7、各组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP、GPR39蛋白表达与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR蛋白表达降低（P<0.05）,其中α-CGRP蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、α-CGRP蛋白表达明显增高（P<0.05）;与西药组相比较,中药组大鼠下丘脑组织BDNF、5-HT3aR、α-CGRP蛋白增高明显,差异显着（P<0.05）。与空白组比较,模型组大鼠下丘脑组织中GPR39蛋白表达增加（P<0.01）;与模型组比较,中药组和西药组大鼠下丘脑组织中GPR39蛋白表达均降低（P<0.05）;且中药组较西药组效果更好（P>0.05）,但差异没有统计学意义。结论:1.改良郭氏夹尾刺激法联合张氏不规则喂食法能够复制FD大鼠模型。2.胃痛消痞方可以改善FD大鼠毛色、改善活动灵活度、增加进食量、提高体重以及缓解暴躁易激惹行为学症状,从而证明胃痛消痞方对FD有治疗作用。3.胃痛消痞方能减少FD大鼠胃内残留率、增加小肠推进率,改善胃肠动力是胃痛消痞方治疗FD的机制之一。4.胃痛消痞方治疗FD的机制是通过上调5-HT、BDNF的表达,从精神心理因素方面实现FD的治疗,是其作用机制之一。5.胃痛消痞方对FD的治疗过程中存在BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA脑肠互动正反馈机制。6.胃痛消痞方治疗FD的机制是通过BGA上调5-HT、BDNF、α-CGRP,下调GPR39的表达实现的。
吴冬[7]（2020）在《基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨耳甲电针治疗功能性消化不良的效应与机制研究》文中指出功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）是有餐后饱胀不适、早饱感、上腹痛、上腹烧灼感症状中的一项或多项,且上述症状不能用器质性、系统性或代谢性疾病等来解释产生这些慢行消化不良症状原因的一种疾病。本课题组根据耳穴区特定的解剖部位,多年来一直开展耳甲电针的相关研究,本研究通过临床观察评价耳甲电针对FD的治疗效果,同时通过动物实验进一步阐释其疗效机制。方法研究一耳甲电针治疗功能性消化不良的疗效观察研究选取2018年6月～2019年5月于首都医科大学附属北京同仁医院就诊的功能性消化不良患者90例,随机分为耳甲电针组和对照刺激组各45例。耳甲电针组刺激区域为耳甲腔,对照刺激组刺激区域为外耳缘中部,即上耳舟部。使用华佗牌SDZ-ⅡB电子针疗仪进行治疗,脉冲为疏密波,其中密波频率为20 Hz,疏波频率为4 Hz,刺激强度为8-20 mA,患者每周治疗5次,每次30 min,临床试验疗程4周。所有患者治疗前后均使用主要症状评分表、功能性消化不良生活质量量表（FDDQL）、汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、抑郁自评量表（SDS）评估患者症状的严重程度,并参照功能性消化不良中医诊疗专家共识意见（2017）和功能性消化不良中西医结合诊疗共识意见（2017）制定的疗效评估方法,对比分析耳甲电针组与对照刺激组治疗功能性消化不良的疗效。应用SPSS 24.0软件进行统计分析,以P<0.05为差异具有统计学意义上。研究二耳甲电针对FD模型大鼠动物行为学、组织形态学的影响31只成年SPF级Sprague-Dawley（SD）大鼠,分为空白组、模型组、耳甲电针组、对照刺激组,各组大鼠适应性喂养5天。本研究采用夹尾刺激法对模型组、耳甲电针组、对照刺激组大鼠进行FD模型复制。造模结束后,空白组、模型组动物自由摄食摄水,不予任何处理;耳甲电针组、对照刺激组FD模型大鼠麻醉后,采用华佗牌SDZ-ⅡB型电子针疗仪进行干预,耳甲电针组刺激区域为大鼠双侧耳甲腔,对照刺激组刺激区域为大鼠双侧耳缘,脉冲为疏密波,其中密波频率为20 Hz,疏波频率为4 Hz,刺激强度为4 mA,每天干预30 min,连续14天。分别于造模后和干预后,使用一般情况评分、体重、3h进食量、旷场实验水平运动和垂直运动得分、强迫游泳不动时间,以评估各组大鼠功能性消化不良的动物行为。结束干预后大鼠禁食不禁水24 h,取大鼠胃及十二指肠组织,应用HE染色观察各组大鼠胃与十二指肠组织的形态学变化。研究三耳甲电针对FD模型大鼠血清学的影响使用酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清乙酰胆碱（ACh）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、5-羟色胺（5-HT）、血管活性肠肽（VIP）,评价不同干预方法对FD模型大鼠血清乙酰胆碱（ACh）、炎症因子、脑肠肽的影响。研究四耳甲电针对FD模型大鼠p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响使用蛋白质印迹法检测胃和十二指肠的p38 MAPK、IκB-α、p65 NF-κB蛋白表达水平,探讨耳甲电针对FD模型大鼠p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响,以及耳甲电针治疗FD的效应机制.结果研究一耳甲电针治疗功能性消化不良的疗效观察基线方面耳甲电针组在性别、年龄、文化程度、病程方面,较对照刺激组均无统计学差异（P>0.05）。治疗后,耳甲电针组在主要症状评分表、FDDQL、HAMA、HAMD、SDS、中医症状量化评分,较对照刺激组均具有统计学差异（P<0.05）。耳甲电针组治疗有效率是91.11%,高于对照刺激组治疗有效率68.89%,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中耳甲电针组临床痊愈4例,显效29例,有效8例,有效率91.11%,对照刺激组临床痊愈0例,显效2例,有效29例,有效率 68.89%。研究二耳甲电针对FD模型大鼠动物行为学、组织形态学的影响造模后大鼠呈现毛发粗糙、枯黄,便溏,进食量、饮水量减少,活动度、灵敏度降低,静卧扎堆乃至蜷缩于鼠笼角落,情志抑郁不安,易受惊。模型组大鼠一般情况评分较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠一般情况评分均升高（P<0.05）;耳甲电针组一般情况评分高于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠体重较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠体重均升高（P<0.05）;耳甲电针组体重高于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠3h进食量较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠3h进食量均升高（P<0.05）;耳甲电针组3h进食量高于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠旷场实验水平运动得分较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠旷场实验水平运动得分均升高（P<0.05）;耳甲电针组旷场实验水平运动得分高于对照刺激组（P<0.05）模型组大鼠旷场实验垂直运动得分较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠旷场实验垂直运动得分均升高（P<0.05）;耳甲电针组旷场实验垂直运动得分高于对照刺激组（P<0.05）模型组大鼠强迫游泳不动时间较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠强迫游泳不动时间均降低（P<0.05）;耳甲电针组强迫游泳不动时间低于对照刺激组（P<0.05）。HE染色胃病理切片显示,模型组胃粘膜上皮细胞有明显微损伤和脱落、排列无序,腺体明显水肿、排列不规则,有炎性细胞浸润;耳甲电针组:胃黏膜上皮细胞未见明显损伤,腺体结构完整、排列较整齐,炎症细胞浸润明显减少。十二指肠模型组十二指肠黏膜结构较完整,肠绒毛排列紊乱,高矮不一,部分倒伏、融合,黏膜层有炎性细胞浸润;耳甲电针组十二指肠黏膜结构较完整,肠绒毛排列较整齐,部分绒毛尖端破溃,黏膜层炎性细胞浸润减少。研究三耳甲电针对FD模型大鼠血清学的影响模型组大鼠血清ACh含量较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组大鼠血清ACh含量均下降（P<0.05）;耳甲电针组血清ACh含量低于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠血清IL-2含量较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠血清IL-2含量均下降（P<0.05）;耳甲电针组血清IL-2含量低于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠血清IL-6含量较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠血清IL-6含量均下降（P<0.05）;耳甲电针组血清IL-6含量低于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠血清TNF-α含量较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠血清TNF-α含量均下降（P<0.05）;耳甲电针组血清TNF-α含量低于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠血清5-HT含量较空白组显着降低（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠血清5-HT含量均升高（P<0.05）;耳甲电针组血清5-HT含量高于对照刺激组（P<0.05）。模型组大鼠血清VIP含量较空白组显着升高（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组、对照刺激组大鼠血清VIP含量均下降（P<0.05）;耳甲电针组血清VIP含量低于对照刺激组（P<0.05）。研究四耳甲电针对FD模型大鼠p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响与空白组比较,模型组胃p38 MAPK蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组胃p38 MAPK蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组胃p38 MAPK蛋白水平上调（P<0.05）。与空白组比较,模型组胃IκB-α蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组胃IκB-α蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组IκB-α蛋白水平上调（P<0.05）。与空白组比较,模型组胃p65 NF-κB蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组胃p65 NF-κB蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组p65 NF-κB蛋白水平上调（P<0.05）。与空白组比较,模型组十二指肠p38 MAPK蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组胃p38 MAPK蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组胃p38 MAPK蛋白水平上调（P<0.05）。与空白组比较,模型组十二指肠IκB-α蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组十二指肠IκB-α蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组十二指肠IκB-α蛋白水平上调（P<0.05）。与空白组比较,模型组十二指肠p65 NF-κB蛋白水平上调（P<0.05）;与模型组比较,耳甲电针组十二指肠p65 NF-κB蛋白水平下调（P<0.05）;与耳甲电针组比较,对照刺激组十二指肠p65 NF-κB蛋白水平上调（P<0.05）。结论1、耳甲电针对功能性消化不良患者具有较好的临床疗效,可用于治疗功能性消化不良。2、耳甲电针可影响FD模型大鼠动物行为和组织形态。3、耳甲电针具有抗炎、调控脑肠肽的效应。4、耳甲电针可以下调FD模型大鼠p38 MAPK/NF-κB信号通路的蛋白表达,即耳甲电针治疗功能性消化不良的机制可能通过调控p38 MAPK/NF-κB信号通路,抑制炎症反应,从而改善功能性消化不良的症状。
臧希[8]（2020）在《痛泻要方调控脑肠肽5-HT、SP、NPY治疗IBS肝郁脾虚证的疏肝止泻机制研究》文中指出目的:观察痛泻要方对肠易激综合征（irritable bowel syndrome,IBS）肝郁脾虚证大鼠下丘脑5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、结肠P物质（substance P,SP）、神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）的调控,探讨痛泻要方治疗IBS肝郁脾虚证的机制。方法:将所有大鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药（痛泻要方）组、西药（匹维溴铵）组,每组15只。对除正常组外的其余各组大鼠采用“束缚+番泻叶灌胃”的方法进行造模。造模成功后进行药物干预,正常组、模型对照组给予0.9%的生理盐水,西药组给予匹维溴铵,痛泻要方组给予痛泻要方溶液。治疗结束后,取大鼠下丘脑和结肠,采用免疫组化法检测大鼠下丘脑5-HT,结肠SP、NPY的含量。采用GraphPad Prism version 7.0统计软件的Tukey多重比较检验对实验数据进行统计分析,组间差异采用单因素方差分析（one way-ANOVA）进行统计学分析。结果:与正常组相比较,模型组大鼠下丘脑5-HT的表达降低（p<0.01）;与模型组相比较,痛泻要方组大鼠下丘脑5-HT表达则升高（p<0.001）,匹维溴铵组大鼠下丘脑5-HT表达也升高,但是差异无统计学意义。与正常组相比,模型组大鼠结肠的SP免疫组化染色强度显着升高（p<0.0001）;与模型组相比,痛泻要方组大鼠结肠的SP免疫组化染色强度明显降低（p<0.0001）,匹维溴铵组大鼠结肠的SP免疫组化染色强度明显降低（p<0.01）;痛泻要方组和匹维溴铵组之间差异无统计学意义。与正常组相比,模型组大鼠结肠的NPY免疫组化染色强度明显降低（p<0.0001）;与模型组相比,痛泻要方组和匹维溴铵组大鼠结肠NPY则升高（p<0.0001）;痛泻要方组和匹维溴铵组之间差异无统计学意义。结论:（1）痛泻要方疏肝解郁治疗IBS肝郁脾虚证的中枢调控中心可能位于下丘脑,其缓解肝郁症状的机制与增加下丘脑5-HT含量有关。（2）痛泻要方疏肝止痛作用的机制可能是:减少结肠SP的分泌,抑制了SP对疼痛信息的传递;提升结肠NPY含量,抑制肠道初级传入神经元的兴奋,使得疼痛信号的产生减少。（3）痛泻要方健脾止泻作用的机制可能是:减少结肠SP分泌,改善胃肠动力、减少黏液分泌;升高结肠NPY分泌,抑制肠液和胰液分泌,抑制胃肠道运动。
戴宁[9]（2020）在《功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究》文中认为目的功能性消化不良是以餐后饱胀不适、早饱感不适、上腹痛、上腹部烧灼感为主要临床表现的一种功能性胃肠病。本病的患病率较高,缺乏特效药物。虽然功能性消化不良的发病机制尚不清楚,但是有研究表明与脑肠肽密切相关。在辨证论治和病证结合思想的指导下,中医治疗本病具有较好疗效。因此,本研究将探讨功能性消化不良脾虚证的中医证候及香砂六君子加减方干预作用的机理,为功能性消化不良的机制和新药开发提供参考,丰富中医辨证论治和整体观的内涵。方法理论研究:通过检索中国知网和“北京中医药大学古籍及民国图书数字化平台”,整理功能性消化不良相关的中医名词术语,运用比较分析法探讨功能性消化不良这一西医疾病对应的中医病名;同时,分析功能性消化不良的中医病因病机。应用文献计量的方法,分析功能性消化不良的主要中医证型;同时,在辨证论治思想的指导下,分析中医方剂治疗功能性消化不良这一证型的理论依据。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的综合疗效（症状改善情况、有效率、不良事件发生率等）进行系统评价和meta分析,为临床应用提供依据,为实验研究阳性药物和疗程的选择奠定基础。实验研究:首先,采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法复制功能性消化不良脾虚证大鼠模型,通过观察大鼠的一般情况及胃肠动力情况来评价模型。此后,给予香砂六君子加减方和多潘立酮进行药物干预,通过上述指标评价药物疗效,反证模型成功。同时,建立功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的分离培养方法,筛选香砂六君子加减方药物血清的最佳干预条件,评价其对胃窦平滑肌细胞的影响。在此基础上,从整体水平和离体细胞水平两个方面,采用分子生物学实验技术检测血清、组织和胃窦平滑肌细胞中脑肠肽（SP,SS,Ghrelin,VIP,GAS,CCK,CGRP）。结果理论研究:（1）中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与功能性消化不良最为接近。功能性消化不良的中医病因包括先天禀赋不足、外感邪气、饮食、痰湿、气郁、瘀血等,核心病机为脾气虚弱、中焦气机阻滞,病位在脾,但与心、肝、肺、肾具有一定的关系。（2）功能性消化不良的中医证型主要为脾气虚证、肝胃不和证、肝脾不和证、脾胃湿热证和寒热错杂证,其中脾气虚证的比例最高。在中医病证结合观念的指导下,从脾论治功能性消化不良脾虚证既符合病机特点,也满足辨证论治的要求。因此,具有补脾理脾作用的香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证在理论层面是可行的、科学的。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的随机对照试验的研究进行系统评价和meta分析,发现香砂六君子汤可以改善功能性消化不良患者的症状、提高其生活质量,同时降低复发率和不良事件发生率。不论是单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与常规治疗药物合用,有效率均显着高于常规治疗。在纳入的27项研究中,有26项研究比较了有效率。在这26项研究中,不论疗程是14天、28天,还是30天,试验组的有效率均显着高于对照组。此外,这26项研究中,有16项研究仅使用多潘立酮作为对照药,针对这16项研究进行了亚组分析,结果显示不论单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与多潘立酮联合使用,有效率均高于多潘立酮对照组。这为实验研究的药物选择和疗程提供参考。实验研究:（1）采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法成功制备了功能性消化不良脾虚证大鼠模型。与对照组相比,模型组大鼠大鼠的毛发疏松不泽、神疲乏力、倦卧怠动,进食量和饮水量增长缓慢,体重显着降低,胃肠动力下降。胃部病理结果显示两组大鼠胃部均未出现病理改变。（2）给予药物干预后,与模型组大鼠相比,给药组大鼠的一般情况、进食量、饮水量、体重有所改善,胃肠动力有所恢复,且各组大鼠胃部和下丘脑均未出现病理改变。（3）大鼠整体水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠血清和胃中SP、GAS、Ghrelin含量均显着降低,SS、VIP、CCK、CGRP含量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中、高剂量的香砂六君子加减方显着增加了大鼠血清和中SP、GAS、Ghrelin含量,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着降低了大鼠血清中SS、VIP和CGRP含量,同时多潘立酮还降低了大鼠胃中VIP、CCK和CGRP的含量,低剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中SS、VIP和CCK的含量,中剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中CGRP的含量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠血清中SP含量显着降低,血清中的CCK和CGRP含量显着升高,三个剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃中VIP含量均显着高于多潘立酮组。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中 SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA 表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮显着增加了大鼠胃和下丘脑中SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,降低了大鼠胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与模型组相比,中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃中SP mRNA表达量,上调了胃和下丘脑中GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中GAS mRNA和Ghrelin mRNA表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA表达量显着升高。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量显着降低,SS蛋白表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS蛋白表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中SP蛋白表达量和Ghrelin蛋白表达量显着降低。（4）采用酶消化法成功分离培养功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞,用CCK-8法筛选药物血清干预胃窦平滑肌细胞的最佳条件,发现10%浓度药物血清、干预24h为最佳条件,与模型组相比,阳性药组和高剂量的香砂六君子加减方均可以显着促进细胞增殖。（5）细胞水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞上清中SP、GAS、Ghrelin含量显着降低、SS含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的的香砂六君子加减方均可以增加胃窦平滑肌细胞上清中SP含量、GAS含量和Ghrelin含量,降低SS含量。与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞的SP mRNA含量显着下降,SS mRNA含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的香砂六君子加减方均上调胃窦平滑肌细胞SP mRNA表达量,中剂量的的香砂六君子加减方下调胃窦平滑肌细胞SS mRNA表达量。结论（1）《中医内科学》仅依据功能性消化不良的主要症状将其归属于痞满、嘈杂、胃脘痛的范畴,但并没有分析FD的中医病因病机。此外,笔者在阅读文献的过程中,发现研究者们不仅将FD归属于痞满、嘈杂、胃脘痛,还将其归属于反胃、厌食、纳呆等范畴,由此可见中医对FD的认识尚不明确。因此,本研究通过系统地查阅现代文献和工具书,同时梳理古代文献,对FD的定义和临床表现进行分析,发现中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与FD较为对应,FD的主要中医病因为外邪侵袭、饮食不节、情志不畅、思虑过度等,病机以脾气虚弱、中焦气机阻滞为核心,病位主要在脾,与肝、心、肺、肾具有一定的关系。在功能性消化不良的辨证分型中,脾气虚证位居首位。香砂六君子加减方治疗功能性消化不良具有理论可行性。（2）临床中,可以使用香砂六君子汤治疗功能性消化不良,改善症状,提高有效率。（3）功能性消化不良脾虚证大鼠出现胃肠动力下降,且大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin表达下降,SS、VIP、CCK、CGRP上升,表明脑肠肽表达异常可能是功能性消化不良脾虚证的重要发病机制之一。给予香砂六君子加减方干预后,发现功能性消化不良脾虚证大鼠的症状体征有所改善,胃动力增强,其药物血清可以促进胃窦平滑肌细胞的增殖,香砂六君子加减方可以上调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin的表达,下调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SS、VIP、CCK、CGRP的表达,表明调节脑肠肽异常、恢复胃动力可能是香砂六君子加减方的药效作用机制之一。
桑小普[10]（2020）在《慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究》文中指出脾虚证本质的研究是中医现代化研究的重要内容之一。随着研究的深入,人们发现脾虚证的致病机理涉及消化系统、免疫系统、内分泌系统、神经系统、血液系统、肠道菌群和能量代谢等多个方面。近年来,系统生物学的方法开始应用于脾虚证本质研究,但尚处于初步阶段。目前已有学者分别使用iTRAQ技术、16S rDNA测序技术和基因芯片技术对脾虚证的蛋白组学、微生物组学和转录组学进行了探索,但是,应用RNA-seq或Small RNA-seq技术进行脾虚证研究的相关报道较少。本论文共分为两部分。由于气虚体质是脾虚证的前驱状态,研究健康人气虚体质的生物学机制将有助于理解脾虚证的早期发生状态。论文的第一部分研究了健康人气虚体质相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控。论文第二部分研究了慢性胃炎脾虚证相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控,从病证结合的角度,研究脾虚证的病理机制。目的:在本次研究中我们以健康人气虚体质、慢性浅表性胃炎（Chronic Superficial Gastritis,CSG）脾虚证和慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis,CAG）脾虚证人群为研究对象,应用最前沿的RNA-seq技术和ceRNA理论,从转录组学水平上进行了脾虚证内在生物学机制的研究。综合两部分的研究结果,我们试图从体质、证候、疾病的自然进展方向,研究健康人气虚体质、CSG脾虚证和CAG脾虚证内在转录调控机制的相互关联,找到“气虚体质—脾虚证”相关的生物标志物或标志网络,以期阐释脾虚证的生物学基础。本研究也有助于预测疾病的发生与发展,从而为明确脾虚证自身特点及与其他因素（如体质、证候、疾病等）的关系提供了可能。方法:2016年6月～2018年12月期间,在北京中医药大学附属东方医院通过广告或电话进行健康受试者招募,包括健康人平和体质、气虚体质和湿热体质。同期进行慢性胃炎患者招募,包括慢性浅表性胃炎（脾虚证、湿热证）,慢性萎缩性胃炎（脾虚证、湿热证）患者。采集临床研究受试者外周血,分离白细胞后提取总RNA,分别进行RNA-seq和Small RNA-seq分析。获得的测序数据用生物信息学方法进行分析,筛选出差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA,对差异表达基因进行生物功能与信号通路富集分析。对差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA进行ceRNA网络构建,获得脾虚证相关的ceRNA调控网络关系。本研究经北京中医药大学东方医院临床研究伦理委员会审查,伦理审批号:JDF-IRB-2016031002临床研究注册号:NCT02915393。结果:第一部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例25例,分别为健康人平和体质13例、气虚体质7例、湿热体质5例。随机选择了健康人平和体质5例、气虚体质5例、湿热体质4例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq分析。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了健康人气虚体质相关的差异表达mRNA60个、lncRNA76个、miRNA42个。功能分析发现,细胞质膜组成成分和细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO富集中出现。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性在差异表达lncRNA和miRNA的GO富集中出现。在对健康人气虚体质相关差异基因的通路分析中发现,赖氨酸降解在差异表达lncRNA和miRNA的KEGG富集中出现。3、通过对健康人气虚体质的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得3182个miRNA-lncRNA对,955个miRNA-mRNA对,最终筛选到9514对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 36个GO功能和31个KEGG信号通路。4、从健康人气虚体质差异表达的mRNA中筛选出99个免疫相关的基因,涉及了11个GO功能和8个KEGG信号通路。第二部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例70例,分别为CSG脾虚证28例、湿热证21例;CAG脾虚证7例、湿热证14例。随机选择了CSG脾虚证6例、CSG湿热证5例、CAG脾虚证5例,CAG湿热证5例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq建库和测序。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了CSG脾虚证患者相关的差异表达mRNA7个、lncRNA 103个、miRNA4个。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,胰岛素分泌以及胰岛素信号通路分别在差异表达mRNA和miRNA的KEGG分析中显着富集。通过对CSG脾虚证的差异表达 miRNA、mRNA 和 lncRNA 进行 ceRNA 分析,共获得 433 个 miRNA-lncRNA 对,226个miRNA-mRNA对,最终筛选到548对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了10个GO功能和11个KEGG信号通路。从CSG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出89个免疫相关的基因,涉及了 66个GO功能和15个KEGG信号通路。3、我们获得了 CAG脾虚证患者相关的差异表达mRNA 20个、lncRNA 79个、miRNA 29个。在对CAG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜和细胞质膜的组成成分在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得1028个miRNA-lncRNA对,1123个miRNA-mRNA对,最终筛选到3625对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 59个GO功能和34个KEGG信号通路。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出139个免疫相关的基因,涉及了 20个GO功能和28个KEGG信号通路。4、从上述测序结果中进一步挖掘,获得脾虚证相关的差异表达mRNA 570个、lncRNA2009个、miRNA 303个,这些差异基因涉及了 9个GO功能和4个KEGG信号通路。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得6个miRNA-lncRNA对,9个miRNA-mRNA对,最终筛选到4对ceRNA,其中的关键基因CD300H的mRNA水平在气虚体质和脾虚证中显着降低（P=0.03）。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出84个免疫相关的基因,涉及了 9个GO功能和18个KEGG信号通路。结论:健康人气虚体质与慢性胃炎脾虚证存在特异的转录组表达谱,且气虚体质与脾虚证的差异基因表达谱具有一定的相似性,尤其体现在免疫相关的基因表达方面。功能分析提示“气虚体质—脾虚证”涉及多种免疫相关功能异常,此外在激素分泌、细胞质膜、信号转导、物质代谢等多种生命活动中存在差异。转录组学的联合分析揭示了CD300H基因的ceRNA参与“气虚体质—脾虚证”相关的转录调控网络。本研究的结果为挖掘脾虚证潜在的生物学基础提供了重要参考。
二、肝郁脾虚大鼠模型胃肠动力障碍的机制（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝郁脾虚大鼠模型胃肠动力障碍的机制（论文提纲范文）
（1）基于内质网自噬研究痛泻要方对IBS-D肝郁脾虚证的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述1: 内质网在IBS-D肠道黏膜屏障损伤中机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2: 从“肝脾”论治IBS-D的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 第一章 痛泻要方治疗IBS-D肝郁脾虚证患者临床疗效观察 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 研究对象与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二章 IBS-D肝郁脾虚证患者肠道通透性及内质网应激的变化情况 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二部分 在体实验研究 |
| 第一章 IBS-D肝郁脾虚证大鼠模型建立与痛泻要方疗效评价 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二章 痛泻要方通过内质网自噬影响肠黏膜屏障的作用机制研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（2）补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医脾虚证的研究现状 |
| 1. 脾虚证的现代内涵 |
| 2. 脾虚肌无力模型的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 “补中益气汤”防治肌肉疾病的研究概况 |
| 1. 临床研究 |
| 2. 实验研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 肌肉减少症的分子机制 |
| 1. 蛋白质合成与分解失衡 |
| 2. 激素水平 |
| 3. 炎性因子 |
| 4. 神经-肌肉功能衰退 |
| 5. 氧化应激与线粒体损伤 |
| 6. 其他 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 研究一 脾虚肌无力小鼠模型的建立与评价 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 脾虚肌无力小鼠肌肉蛋白质失衡的分子机制及补中益气汤的干预作用 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1. 立论背景与研究思路 |
| 2. 脾虚肌无力证模型小鼠的建立与评价 |
| 3. 脾主肌肉及脾虚肌无力的现代病生理学内涵 |
| 4. 补中益气汤健脾强肌功效的现代作用机制 |
| 5. 补中益气汤(方)-脾虚肌无力(证)关联的生物学基础 |
| 6. 本研究的创新点及局限性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）平胃胶囊对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠肠黏膜屏障功能及肠道微生态的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 动物模型的建立 |
| 2.3 动物模型评价标准 |
| 2.4 给药途径和方法 |
| 2.5 标本采集及处理 |
| 3.指标观察检测 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 焦虑、抑郁样行为检测 |
| 3.3 腹泻指标检测 |
| 3.4 肠道通透性检测 |
| 3.5 肠黏膜组织病理学观察 |
| 3.6 免疫组化SP法检测Occludin、Claudin-4、ZO-1 蛋白表达 |
| 3.7 qPCR检测Occludin、Claudin-4、ZO-1 mRNA表达 |
| 3.8 16S rRNA菌群测序分析 |
| 3.9 统计学处理 |
| 4.实验结果 |
| 4.1 一般情况 |
| 4.2 体重变化 |
| 4.3 模型评价结果 |
| 4.4 肠道通透性检测 |
| 4.5 肠黏膜组织病理学观察 |
| 4.6 免疫组化SP法测Occludin、Claudin-4、ZO-1 蛋白表达水平 |
| 4.7 qPCR检测Occludin、claudin4、ZO-1mRNA表达水平 |
| 4.8 肠道微生态多样性分析 |
| 讨论 |
| 1.肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型的建立 |
| 2.肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型的评价 |
| 3.肠道微生态与肠黏膜屏障的相关性探讨 |
| 4.疏肝健脾法治疗肝郁脾虚型 IBS-D 的理论基础 |
| 5.平胃胶囊对IBS-D大鼠的作用机制探讨 |
| 6.平胃胶囊的方药分析及药理机制探讨 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 动物实验伦理审查表 |
| 肠易激综合征的研究进展文献综述 |
| 1.现代医学对IBS-D的认识 |
| 2.中医对IBS-D的认识 |
| 3.总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果 |
（4）和胃理气方对功能性消化不良大鼠胃肠动力及cAMP/PKA信号通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 中西医治疗功能性消化不良的研究概况 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）基于脑肠互动探讨和胃理气方对功能性消化不良大鼠脑肠肽的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究的创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在校科研成绩 |
| 致谢 |
（6）胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一:胃痛消痞方对FD大鼠胃肠动力的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二:胃痛消痞方对FD大鼠胃窦及下丘脑组织中5-HT、BDNF表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三:胃痛消痞方对FD大鼠胃窦组织中BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验四:胃痛消痞方对FD大鼠下丘脑组织中BDNF、5-HT3aR、a-CGRP、GRP39 mRNA及蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 功能性消化不良的中医治疗 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（7）基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨耳甲电针治疗功能性消化不良的效应与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 综述部分 |
| 综述一 现代医学对功能性消化不良的研究现状 |
| 1 功能性消化不良的概念与诊断 |
| 2 功能性消化不良的流行病学 |
| 3 功能性消化不良的病因和病理机制 |
| 4 功能性消化不良与炎症的关系 |
| 5 功能性消化不良与脑肠轴的关系 |
| 6 功能性消化不良的治疗现状 |
| 7 小结 |
| 8 参考文献 |
| 综述二 中医对功能性消化不良的研究现状 |
| 1 古代文献对功能性消化不良的认识 |
| 2 中医治疗功能性消化不良的研究现状 |
| 3 小结 |
| 4 参考文献 |
| 综述三 针灸对功能性消化不良的研究现状 |
| 1 针灸古代文献对功能性消化不良的认识 |
| 2 针灸治疗功能性消化不良的研究现状 |
| 3 耳穴治疗功能性消化不良的研究现状 |
| 4 参考文献 |
| 综述四 耳迷走神经刺激的研究现状 |
| 1 耳迷走神经刺激与耳穴的关系 |
| 2 迷走神经的概念 |
| 3 耳迷走神经的概念 |
| 4 迷走神经刺激的分类 |
| 5 耳迷走神经刺激对疾病的治疗 |
| 6 耳迷走神经刺激对炎症的治疗 |
| 7 小结 |
| 8 参考文献 |
| 前言 |
| 研究部分 |
| 研究一 耳甲电针治疗功能性消化不良的疗效观察 |
| 1 研究方案与设计 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 研究二 耳甲电针对FD模型大鼠动物行为学影响的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 研究三 耳甲电针对FD模型大鼠血清学影响的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 研究四 耳甲电针对FD模型大鼠P38 MAPK/NF-κB信号通路影响的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
| 附录1 临床试验研究随机数字表 |
| 附录2 伦理审批件 |
| 附录3 病例报告表和知情同意书 |
（8）痛泻要方调控脑肠肽5-HT、SP、NPY治疗IBS肝郁脾虚证的疏肝止泻机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用符号及缩略词表 |
| 前言 |
| 1.实验目的 |
| 2.实验材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 药材与试剂 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 造模 |
| 2.5 给药 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 痛泻要方对IBS肝郁脾虚证大鼠5-HT表达的影响 |
| 3.1.1 痛泻要方对IBS肝郁脾虚证大鼠下丘脑5-HT表达的影响 |
| 3.1.2 前期研究中痛泻要方对IBS肝郁脾虚证大鼠结肠5-HT表达的影响 |
| 3.2 痛泻要方对IBS肝郁脾虚证大鼠结肠SP表达的影响 |
| 3.3 痛泻要方对IBS肝郁脾虚证大鼠结肠NPY表达的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 肝郁脾虚是腹泻型IBS主要的中医学病机 |
| 4.2 IBS与中枢神经系统的关系 |
| 4.3 肝郁脾虚证与中枢神经系统的关系 |
| 4.3.1 边缘系统是肝主疏泄的高级中枢 |
| 4.3.2 自主神经系统是肝主疏泄的信息通路 |
| 4.4 痛泻要方治疗IBS肝郁脾虚证的机制 |
| 4.4.1 痛泻要方源流 |
| 4.4.2 痛泻要方单味药的药理作用 |
| 4.4.3 痛泻要方的组方特点 |
| 4.4.4 痛泻要方治疗IBS肝郁脾虚证的机制 |
| 4.4.5 痛泻要方通过增加下丘脑5-HT含量缓解IBS肝郁脾虚证的肝郁症状 |
| 4.4.6 痛泻要方通过降低结肠SP、升高结肠NPY含量缓解IBS腹泻、腹痛症状 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 功能性消化不良的研究进展 |
| 1. 功能性消化不良的发病机制 |
| 2. 功能性消化不良的现代医学治疗方法 |
| 3. 功能性消化不良的中医治疗 |
| 4. 功能性消化不良动物模型研究 |
| 5. 小结 |
| 综述二 脑肠肽的研究进展 |
| 1. 脑肠肽的概念 |
| 2. 相关脑肠肽的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 理论研究 |
| 理论研究一 功能性消化不良的中医理论研究 |
| 1. 功能性消化不良的中医病名 |
| 2. 中医对功能性消化不良症状的认识 |
| 3. 中医对功能性消化不良病因病机的认识 |
| 4. 结论 |
| 理论研究二 香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证的理论研究 |
| 1. 功能性消化不良中医证型的分布情况 |
| 2. 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证的理论与文献依据 |
| 3. 结论 |
| 文献研究 香砂六君子汤治疗功能性消化不良的系统评价 |
| 1 资料和方法 |
| 2 研究结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验研究 |
| 实验研究一 功能性消化不良脾虚证大鼠模型的复制与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究二 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的疗效 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究三 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究四 功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的制备与培养 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究五 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞条件的筛选 |
| 1. 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究六 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠离体胃窦平滑肌细胞的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 脾虚证内涵源流及现代研究进展 |
| 一、前言 |
| 二、脾虚证的中医概念形成源流 |
| 三、脾虚证的现代研究进展 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 综述二 转录组学在中医证候研究中的应用 |
| 一、前言 |
| 二、转录组学及其检测技术概况 |
| 三、转录组学与中医证候 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 健康人气虚体质相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 慢性胃炎脾虚证相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 结语和展望 |
| 一、脾虚证的潜在生物学机制 |
| 二、本研究的局限性 |
| 三、对中医学现代化研究的思考与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
四、肝郁脾虚大鼠模型胃肠动力障碍的机制（论文参考文献）
- [1]基于内质网自噬研究痛泻要方对IBS-D肝郁脾虚证的作用机制[D]. 李夏. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础[D]. 钱梦. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]平胃胶囊对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠肠黏膜屏障功能及肠道微生态的影响[D]. 王淼蕾. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [4]和胃理气方对功能性消化不良大鼠胃肠动力及cAMP/PKA信号通路的影响[D]. 刘阳. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [5]基于脑肠互动探讨和胃理气方对功能性消化不良大鼠脑肠肽的影响[D]. 张鑫. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [6]胃痛消痞方对FD大鼠脑肠肽相关受体影响的实验研究[D]. 范梦男. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [7]基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨耳甲电针治疗功能性消化不良的效应与机制研究[D]. 吴冬. 中国中医科学院, 2020
- [8]痛泻要方调控脑肠肽5-HT、SP、NPY治疗IBS肝郁脾虚证的疏肝止泻机制研究[D]. 臧希. 山西中医药大学, 2020(07)
- [9]功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究[D]. 戴宁. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究[D]. 桑小普. 北京中医药大学, 2020(04)