一、新生兔颅骨改良组织块移行法成骨细胞的体外培养（论文文献综述）
吴王喜[1]（2017）在《猴上颌窦黏膜成骨潜能影像与组织学研究》文中进行了进一步梳理研究背景上颌后牙区骨量不足是限制种植体植入最常见的原因之一。包括经侧壁入路或经牙槽嵴入路的上颌窦提升术是通过手术,将上颌窦底黏膜与骨壁分开,在手术形成的窦膜和窦底骨壁之间的空隙内植入人工骨材料,进行窦底垂直骨增量,允许同期或延期植入牙种植体。目前对于利用人工骨材料进行颌骨骨增量的机理已经清楚,形成了引导骨再生的理论。但上颌窦底植入人工骨材料,进行骨增量的机理尚不清楚。提升后是否需要使用屏障膜材料屏蔽窦底粘膜?甚至是否需要植入人工骨材料尚存在争议。近期有临床研究显示,仅通过简单的上颌窦黏膜提升,不植入移植材料同样获得骨增量,在上颌窦囊肿摘除及患牙拔除后,未植入任何骨移植材料,同样促进骨增量。上颌窦黏膜具备成骨潜能的观点被提出。诸多学者对这一观点进行深入研究,成为目前该领域研究的热点课题之一。研究目的（1）探明上颌窦提升后上颌窦黏膜是否具备成骨潜能,该成骨潜能与颌骨骨膜有无差异?（2）探索上颌窦提升空间的成骨机理研究方法（1）首先运用锥形束计算机断层扫描收集10只食蟹猴三维影像信息,熟悉该物种上颌窦的应用解剖条件。（2）根据动物局部解剖数据,设计新型屏障装置及操作工具,并利用计算机设计与制作技术生产,克服以往屏障装置植入稳定性不足的缺点,在4枚离体实验动物头颅骨上模拟建型。（3）6只动物随机分成两组,6周及16周各3只,双侧下颌骨骨膜提升,每侧下颌骨植入4种屏障装置各一枚,利用影像数据及硬组织切片分析不同区域的成骨情况,分析下颌骨骨膜提升后局部成骨表现及骨膜在局部的成骨能力。（4）6只动物随机分成两组,6周及16周各3只,侧壁入路提升上颌窦,每只动物窦底骨壁植入两种屏障装置,每侧植入一颗屏障,0.5mm孔及1.0孔两种类型在左右侧按随机原则植入,维持窦黏膜的提升状态,利用影像数据及硬组织切片采集不同区域的成骨情况,分析上颌窦提升成骨表现及窦黏膜局部的成骨作用。结果（1）明确食蟹猴上颌窦的解剖条件,制定出准确的手术程序,初步定位及量化上颌窦侧壁开窗的边界。（2）制备出理想的植入装置,成功建模。（3）下颌骨骨膜提升空间围绕屏障装置的不同区域成骨,随孔径增大屏障内部成骨显着,提示来着外部骨膜的成骨因素促进成骨,颌骨骨膜具备成骨潜能。（4）上颌窦提升空间屏障装置不同区域成骨,随孔径增大屏障内部成骨显着,在血供来源丰富的提升空间中窦膜下少量成骨。结论（1）上颌窦黏膜在引导骨再生的体内环境中具备成骨潜能,与颌骨骨膜成骨特点相似。（2）上颌窦提升成骨机理类似于引导骨再生成骨原理。
杨禾丰[2]（2016）在《牙本质基质颗粒联合牙囊细胞膜片再生牙周组织的实验研究》文中研究说明[目的]组织工程为解决人体组织器官的缺损提供了新的思路和策略。实现组织和器官的修复和再生,必然涉及种子细胞、信息以及生物材料这三大要素。目前,牙周组织工程依靠单一支架或几种生长因子的非生理性诱导方式存在局限性,再生效果呈现出不可预测性,并未解决该复杂结构的再生问题。如何选择更具针对性的三要素是实现组织再生的关键。牙周再生修复与正常牙周组织发育的相似性提示我们,可通过模拟牙周早期发育微环境来调控牙周前体细胞再现牙周组织发育,进而获得牙周组织的再生。牙周组织发育时,当根部牙本质形成以后,上皮根鞘发生断裂,牙囊细胞穿过断裂的上皮根鞘,潜行于上皮细胞与牙本质层之间。牙囊细胞构成牙周组织发育的前体细胞,牙本质成为成牙周组织微环境的重要构成成分。同时,牙本质还具有与骨相似的理化性质和构成成分。本课题以牙周组织缺损为模型,尝试从发育生物学的角度提出新的组织工程构建方案,利用牙囊细胞、牙本质基质来再生复杂的牙周组织,旨在探寻合适的、临床可行的种子细胞及其相适应的运载形式以及合适的支架材料,提高牙周复杂结构的再生效果。[方法]1.利用冻存的牙囊组织提取牙囊细胞（cells from cryopreserved dental follicle,C-cdf）,并将其与冻存牙囊细胞（cryopreserved dental follicle cells,cDFCs）进行增殖、细胞周期、克隆形成率、诱导分化能力等生物学特性的比较;2.采用含抗坏血酸的膜片培养基培养牙囊细胞膜片,免疫荧光、HE染色等观察牙囊细胞膜片的结构特点,RT-PCR检测比较牙囊细胞膜片与牙囊细胞成牙周相关基因的表达情况;3.采用研磨法制备牙本质基质颗粒并进行梯度脱矿,使用激光粒度仪、SEM、XRD、XPS、FI-IR、ELISA等技术检测处理的牙本质基质颗粒（treated dentin matrix particles,TDMP）的形态与表征;使用CCK8、RT-PCR、WB等技术检测TDMP浸提液对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响;并采用SD大鼠颅骨临界骨缺损模型验证TDMP的骨缺损修复能力;4.采用RT-PCR、WB等技术检测TDMP浸提液对牙囊细胞膜片生物学特性的影响;5.采用Beagle犬牙周一壁缺损模型验证牙囊细胞膜片联合TDMP修复牙周组织缺损的效果。[结果]1.冻存的牙囊组织可以提取培养牙囊细胞,C-cdf具有与cDFCs相似的增殖能力,相似的成骨、成脂向诱导分化能力,但是其成骨相关基因ALP、OSX,及成牙周膜相关基因PLAP-1、Periostin的mRNA表达水平较cDFCs降低（P<0.05）;2.牙囊细胞在膜片培养基的诱导培养下可以形成由单层到多层细胞及细胞外基质构成的膜片样结构,牙囊细胞及牙囊细胞膜片均表达PLAP-1、Periostin、Scleraxis、cp-23、CAP、Runx2、ALP、OSX等成牙周组织相关基因,相较于牙囊细胞,牙囊细胞膜片的PLAP-1、Periostin、Scleraxis的表达长期维持和增高;3.TDMP的基本成分是低结晶度的羟基磷灰石,含有大量如CO32-等有机基团,在含有大量钙磷等元素的同时还含有镁、铜、钠等元素,并能持续释放TGF-β,VEGF,BMP2,以及PDGF-BB等生长因子;TDMP浸提液能促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化;TDMP具有修复SD大鼠颅骨临界骨缺损的能力,其修复骨组织缺损的能力与HA/β-TCP没有明显的差异（P<0.05）;4.TDMP浸提液可以促进牙囊膜片Fibronectin、collagen I、osteopontin、PLAP-1、Periostin、collagen III mRNA表达及蛋白合成的增加（P<0.05）,维持CAP、cp-23的mRNA表达和蛋白合成,抑制ALP、OSX、Runx2的mRNA表达与蛋白合成（P<0.05）;5.DFC膜片的使用能够在缺损区再生形成新的牙周组织样结构,骨移植材料的使用使得骨缺损区有新生骨组织的形成,牙囊膜片与TDM颗粒联合使用能获得更佳的修复“三明治样”牙周组织的效果。[结论]冻存的牙囊组织可以用于获取自体牙囊细胞;牙囊细胞和牙囊细胞膜片具备成牙周向分化的能力,其中牙周膜向分化是牙囊细胞膜片中细胞分化的优势方向,提示牙囊细胞膜片能够成为牙周膜复合体再生的合适种子细胞及输送形式;TDMP具有良好的生物相容性,并具备修复骨组织缺损的能力;TDMP浸提液能够有效诱导牙囊细胞膜片成牙周膜向分化;牙囊膜片联合TDMP能够有效地再生牙周组织缺损,验证了该策略的有效性。
毛丽霞[3]（2016）在《牙髓干细胞复合微纳结构HA修复牙槽骨缺损的实验研究》文中指出目的本研究的目的在于探讨表面微纳结构形貌修饰的羟基磷灰石（micro-nano structured hydroxyapatite,mnHA）生物陶瓷复合牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）修复牙槽骨缺损的效果。首先,分离培养牙髓干细胞并探讨其干细胞特性及成骨向分化能力;其次,体外研究mnHA对DPSCs的生物学作用;最后,在大鼠牙槽骨缺损动物模型中探讨mnHA复合DPSCs的体内成骨效果。材料和方法1.采用改良组织块法原代培养人牙髓细胞,免疫磁珠法分选Stro-1+人牙髓干细胞。通过CCK8检测人DPSCs的增殖活性;免疫荧光染色检测细胞表面波形丝蛋白（Vimentin）、细胞角蛋白（cytokeratin,CK）、S-100 和 Stro-1 的表达;流式细胞术检测其干细胞表面特征性标志物CD29、CD44、CD90、CD105、CD34、CD45 的表达。2.体外诱导人DPSCs成脂向分化,油红染色观察成脂诱导后脂滴的形成情况。成骨诱导液诱导人DPSCs向成骨细胞分化,通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色观察成骨诱导后细胞的成骨活性;茜素红染色观察矿化结节形成情况;Real-time PCR检测成骨相关基因ALP、I型胶原（collagen I,Col I）、runt 相关转录因子 2（runt-related transcription factor 2,Runx2）和骨钙素（osteocalcin,OCN）mRNA 的表达。3.体外分离培养大鼠DPSCs后分别接种到mnHA生物陶瓷和表面光滑致密的传统HA生物陶瓷上。通过细胞骨架蛋白染色、扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）、MTT、ALP 染色和活性检测以及 Real-time PCR 检测mnHA生物陶瓷对DPSCs的粘附、增殖以及促进成骨/成血管相关因子表达的作用。4.建立大鼠牙槽骨缺损动物模型并植入材料进行修复。实验分为五组:（1）传统表面光滑致密的HA生物陶瓷（HA）;（2）表面微纳结构形貌修饰HA生物陶瓷（mnHA）;（3）传统表面光滑致密的HA生物陶瓷复合大鼠DPSCs（HA+DPSCs）;（4）表面微纳结构形貌修饰HA生物陶瓷复合大鼠DPSCs（mnHA+DPSCs）;（5）空白对照组（Control）。通过 Micro-CT、四环素/茜素红/钙黄绿素三色序列荧光染色以及组织学观察并检测新骨的形成和矿化情况。结果1.通过改良组织块结合免疫磁珠法成功分离并纯化人DPSCs。人DPSCs形态多呈长梭形,具有较强的增殖能力,表达间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD105、CD29和Stro-1,而造血干细胞表面标志物CD34和CD45阴性表达。2.人DPSCs成脂向诱导后,油红染色可见脂滴形成。成骨向诱导后,人DPSCs具有较强的成骨向分化潜能。在成骨诱导过程中,人DPSCs ALP染色呈阳性,同时ALP mRNA表达水平升高;成骨相关基因Col I和Runx2 mRNA的表达呈先升高后下降的趋势;而OCN mRNA的表达随着时间的推移呈不断升高的趋势;诱导21天茜素红染色可见矿化结节形成。3.与传统表面光滑致密的HA生物陶瓷相比,表面微纳结构形貌修饰的HA生物陶瓷可明显促进大鼠DPSCs的早期粘附、增殖、成骨向分化以及血管生长因子的表达,ALP活性明显增加,成骨相关基因Runx2、OCN、牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）和牙本质基质蛋白 1（dentin matrix protein-1,DMP-1）以及成血管相关基因血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）mRNA的表达增高。4.大鼠牙槽骨缺损修复体内实验发现,材料修复组骨体积和组织体积的比值（bone volume relative to tissue volume,BV/TV）、骨小梁厚度（trabecular thickness,Tb.Th）、骨小梁数量（trabecular number,Tb.N）、序列荧光染色和新骨形成量均高于空白对照组。其中mnHA组BV/TV、Tb.Th、Tb.N、序列荧光染色和新骨形成较HA组高,而mnHA生物陶瓷复合DPSCs后可进一步增强其在体内的成骨效果。结论1.通过改良组织块联合免疫磁珠分选法可成功培养并获得纯度较高的人DPSCs,所获得的细胞具备了间充质来源干细胞的生物学表型和特性,具有较强的成骨向分化潜能,在成骨、成脂诱导液作用下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。2.与传统表面致密、光滑的HA生物陶瓷相比较,表面微纳结构形貌修饰的HA生物陶瓷具有促进DPSCs早期粘附、增殖、成骨向分化和成血管相关因子表达的作用,这种作用可能与其微米棒/纳米棒组合结构的表面形貌接近于正常骨组织结构密切相关。3.在大鼠牙槽骨缺损动物模型中,mnHA生物陶瓷复合大鼠DPSCs可以在体内明显促进新骨形成和矿化,mnHA陶瓷材料可以作为潜在的仿生生物活性材料用于牙槽骨修复。
范连霞[4]（2015）在《骨质疏松不同证型下左归丸、右归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路的研究》文中提出目的:（1）明确骨质疏松（OP）不同证型下左归丸、右归丸含药血清对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）表达的作用。（2）明确OP不同证型下左归丸、右归丸含药血清对成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin、ERK1、ERK2mRNA及蛋白表达的作用。方法:（1）采用手术去卵巢法造成大鼠骨质疏松（OP）模型,用于OP证型下成骨细胞培养及左、右归丸含药血清制备;并在手术10周后,分别注射氢化可的松、灌胃甲状腺素造成大鼠OP肾阳虚及OP肾阴虚模型,用于OP肾阳虚、OP肾阴虚证型下成骨细胞培养及左、右归丸含药血清的制备。（2）分别用OP、OP肾阳虚、OP肾阴虚、两周龄大鼠股骨及新生24h乳鼠颅骨,进行体外成骨细胞培养,根据细胞状态及活性,筛选出符合实验要求的成骨细胞。（3）新生24h乳鼠颅骨体外培养所得的成骨细胞,以碱性磷酸酶和茜素红染色进行鉴定,测定生长曲线,考察96孔板中每孔细胞接种量,采用MTS法筛选左、右归丸含药血清对成骨细胞作用的最佳浓度及作用时间。（4）确定实验所用成骨细胞来源及含药血清作用浓度和时间后,分别用正常、OP不同证型所得的左、右归丸含药血清、空白血清干预成骨细胞,采用MTS法检测细胞增殖情况,ELISA法检测碱性磷酸酶表达,RT-PCR法检测ERK1、ERK2、β-catenin mRNA的表达,Western Blot 法检测 ERK1、ERK2、β-catenin 蛋白表达。结果:（1）实施双侧去卵巢手术10周后,组织病理学及骨密度检测结果表明骨质疏松模型成立;注射氢化可的松和灌胃甲状腺素10天后,组织病理学、外观体征及cAMP/cGMP检测表明OP肾阳虚、OP肾阴虚模型成立;（2）OP、OP肾阳虚、OP肾阴虚、两周龄大鼠股骨及新生24h乳鼠颅骨体外成骨细胞培养,虽均能得到原代细胞,但状态及活性存在明显差异。新生24h乳鼠颅骨培养所得成骨细胞的活性最强,两周龄大鼠股骨培养所得成骨细胞次之;OP、OP肾阳虚、OP肾阴虚大鼠股骨体外分离培养成骨细胞,耗时较久,细胞活力差,较易污染,且在培养9天左右死亡,无法传代。故本实验选择用24h新生乳鼠颅骨进行体外成骨细胞分离培养。（3）体外培养的大鼠成骨细胞经碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定后,证实为成骨细胞,且活性较好。根据生长曲线测定结果,取处于对数期的细胞,并以3000个/孔接种于96孔板中进行实验;MTS结果表明:20%左归丸含药血清及20%右归丸含药血清在作用72h后,对成骨细胞的促增殖作用最明显。（4）四种不同证型下（OP、OP兼肾阳虚、OP兼肾阴虚、正常状态）的左、右归丸含药血清干预成骨细胞的结果表明:四种证型下的左、右归丸含药血清均能促进成骨细胞增殖及ALP表达,且存在差异。对于左归丸而言,OP肾阴虚左归丸含药血清对成骨细胞增殖及ALP表达的促进作用最强,与正常、OP、OP肾阳虚左归丸含药血清相比,具有显着性差异（p<0.05）。对于右归丸而言,OP肾阳虚右归丸含药血清对成骨细胞增殖及ALP表达的促进作用最强,与正常、OP、OP肾阴虚左归丸含药血清相比,具有显着性差异（p<0.05）。（5）分别用四种不同证候下（OP、OP肾阳虚、OP肾阴虚、正常状态）的左、右归丸含药血清和空白血清干预成骨细胞,发现四种不同证候下的左、右归丸含药血清在调节成骨细胞β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA和蛋白的表达方面存在差异。对mRNA表达的调节具体表现为:对于左归丸而言,正常、OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚左归丸含药血清均能上调β-catenin、ERK1 mRNA的表达,其中OP、OP肾阴虚左归丸含药血清,与相应证型下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）;正常、OP、OP肾阴左归丸含药血清能上调ERK2mRNA的表达,与相应证型下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）;OP肾阳虚左归丸含药血清,与相应证型下的空白血清比较,反而抑制ERK2 mRNA的表达。与OP肾阳虚左归丸含药血清比较,OP肾阴虚左归丸含药血清组能够显着上调β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA的表达（p<0.05）。与正常、OP左归丸含药血清比较,OP肾阴虚左归丸含药血清能够显着上调ERK1、ERK2 mRNA的表达（p<0.05）,但对β-catenin的作用无明显差异。对于右归丸而言,正常、OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚右归丸含药血清均能上调β-catenin、ERK2mRNA的表达,其中OP、OP肾阳虚右归丸含药血清在上调β-catenin、ERK2 mRNA表达方面,与相应证候下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）,OP肾阴虚右归丸含药血清在上调ERK2 mRNA表达方面,与相应证候空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）;正常右归丸含药血清与空白血清之间则无显着性差异。OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚右归丸含药血清能够上调ERK1 mRNA表达,与相应证型下空白血清比较,具有显着性差异;与OP、OP肾阴虚右归丸含药血清比较,OP肾阳虚右归丸含药血清能够显着上调β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA表达（p<0.05）;与正常右归丸含药血清比较,OP肾阳虚右归丸含药血清能够显着上调β-catenin、ERK1 mRNA表达（p<0.05）。对蛋白表达调节的具体表现为:对于左归丸而言,正常、OP、OP肾阴虚、OP兼肾阳虚左归丸含药血清均能上调β-catenin、ERK1、ERK2蛋白的表达,其中正常、OP、OP肾阴虚左归丸含药血清在上调β-catenin蛋白表达方面,与相应证候下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）,OP肾阳虚左归丸含药血清在上调ERK2蛋白表达方面,与相应证候下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）。与OP肾阳虚左归丸含药血清比较,OP肾阴虚左归丸含药血清能显着上调β-catenin蛋白的表达（p<0.05）,亦能上调ERK1、ERK2蛋白的表达,但无显着性差异。对于右归丸而言,正常、OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚右归丸含药血清均能上调β-catenin、ERK1、ERK2蛋白的表达,其中OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚右归丸含药血清在上调β-catenin、ERK2蛋白表达方面,与相应证候下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）,OP右归丸含药血清在上调ERK1蛋白表达方面,与相应证候下的空白血清比较,具有显着性差异（p<0.05）。与OP肾阴虚右归丸含药血清比较,OP肾阳虚右归丸含药血清能显着上调β-catenin、ERK2蛋白的表达（p<0.05）。结论:（1）本文首次研究了骨质疏松（OP）不同证型左归丸、右归丸含药血清对成骨细胞增殖分化以及ERK、Wnt信号通路相关因子mRNA及蛋白表达的影响,明确了不同骨质疏松证型下左、右归丸含药血清对成骨细胞的作用存在差异,从细胞信号通路和血清药理学层面为中医对骨质疏松症“辨证论治”、“同病异治”治则提供实验依据。（2）本文首次研究表明右归丸在OP肾阳虚证型下的含药血清对成骨细胞增殖、ALP表达、β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA及蛋白表达的促进作用最强,而左归丸在OP肾阴虚证型下的含药血清对成骨细胞增殖、ALP表达、β-catenin、ERK1、ERK2 mRNA及蛋白表达的促进作用最强,这与“右归丸补肾阳、左归丸滋肾阴”的中医理论相吻合,为临床辩证治疗骨质疏松症提供科学依据。（3）左归丸、右归丸通过ERK1/2和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞的增殖与分化,可能是左、右归丸防治骨质疏松肾阴虚、肾阳虚证的机制之一。
张惜燕,田丙坤,陈传贞,邢玉瑞,乔文彪,李翠娟,李涛,孙耀光[5]（2014）在《大鼠成骨细胞的体外培养研究》文中提出目的:改良大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法。方法:采用改良的胰蛋白酶和I型胶原酶联合的二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养、扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过成骨细胞形态学、茜素红矿化结节染色法观测,确定其增殖与成骨活性。结果:改良的二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。形态学、茜素红染色均呈阳性结果。结论:改良的二次酶消化法能够在更短时间内获得大量的高纯度的成骨细胞,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究模型。
孙太存,邓展生[6]（2012）在《两种方法分离新生大鼠颅骨成骨细胞纯度和活性的比较》文中研究指明目的比较预消化组织块培养法与传统组织块培养法分离的新生大鼠颅骨成骨细胞纯度和活性的差异。方法无菌条件下取新生大鼠颅骨骨片,分传统法和预消化法进行培养。预消化法先以0.25%胰蛋白酶/0.02%EDTA预先消化,再按传统组织块培养法培养,观察细胞移出时间,采用Gomori钙钴法对原代细胞及纯化后细胞进行鉴定,对比两种方法获得的成骨细胞纯度。并测定第1、2代成骨细胞培养第10d胞浆内碱性磷酸酶活性。结果预消化法约第3d开始细胞自骨片移出,传统法约第5d开始细胞移出。两种方法分离的原代细胞碱性磷酸酶染色阳性率分别为（87.83±2.34）%以及（82.88±3.14）%,差异有统计学意义（P<0.05）。纯化后成骨细胞染色阳性率分别为（90.71±3.15）%以及（90.17±2.97）%,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。两种方法获得的第1、2代成骨细胞培养第10d碱性磷酸酶活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论预消化组织块培养法细胞移出时间早,且所分离的原代细胞中成骨细胞纯度高。经纯化后成骨细胞纯度和活性与传统组织块培养法相似。
王勇平,廖燚,蒋垚[7]（2011）在《成骨细胞的体外培养与鉴定》文中提出背景:成骨细胞的体外培养方法均存在一定的局限性。目的:对体外培养成骨细胞的来源,成骨细胞的培养方法及培养条件,鉴定成骨细胞的标志进行总结。方法:以"Osteoblast,cell culture,identification"为检索词,检索PubMed数据库（2000/2010）,以"成骨细胞、细胞培养、鉴定"为检索词,检索万方数据库（2000/2010）,文献检索语种限制为英文和中文。纳入与成骨细胞的体外培养及鉴定密切相关的研究,排除重复性研究和Meta分析后对文献进行综述。结果与结论:随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的骨、骨膜、骨髓及骨外组织中成功培养了成骨细胞,经鉴定具有典型成骨细胞的特征及良好的生物学特性,目前体外培养成骨细胞为常用的体外实验模型,成为研究骨生理、病理及修复的重要手段,也成为研究成骨细胞生长代谢及骨组织工程的基础。
徐宗[8]（2011）在《血当归粗提物体外成骨活性研究》文中提出促进骨损伤修复药物的开发一直是当前生物医学界热门研究方向之一。从中药中提取毒副作用小的相关药物并研究其机理具有十分重要的理论意义和临床应用前景。血当归为我国土家族民间常用的药材,具有活血通经等功效。特别是血当归在治疗骨折、跌打损伤等有显着疗效。但其有效成分是什么,有效成分作用的机理是什么?目前知之甚少。本研究以传统中药血当归粗提物为材料,用小鼠成骨细胞为细胞模型,研究其对体外培养的成骨细胞活性的影响,以期为鉴定其活性成分及了解作用机理提供实验依据。将血当归用甲醇、乙酸乙酯等抽提,分别获得其甲醇提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物,用各提取物处理体外培养的小鼠成骨细胞,研究这些药物对成骨细胞生长及成骨活性的影响。从新生的昆明小鼠颅盖骨分离原代小鼠成骨细胞,用含10%新生小牛血清的DMEM培养基培养。分别用1.0×10-2、10-3、10-4、10-5 mg/ml血当归甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物处理成骨细胞。研究血当归甲醇提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物各个浓度对成骨细胞增殖活性、细胞周期以及其碱性磷酸酶活性的影响。用CCK-8法研究血当归粗提物对成骨细胞增殖活性的影响。结果显示,1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的血当归甲醇提取物,1.0×10-3、1.0×10-4、、1.0×10-5mg/ml乙酸乙酯提取物和1.0×10-3、1.0×10-4、1.0×10-5mg/ml水提取物能够促进成骨细胞的增殖（p<0.05）。用流式细胞术研究血当归粗提物对成骨细胞细胞周期的影响。结果表明,1.0×10-4mg/ml的血当归甲醇提取物,1.0×10-3、1.0×10-4和1.0×10-5mg/ml的乙酸乙酯提取物,以及1.0x10-2、1.0x10-3、1.0x10-4mg/ml的水提取物能促进成骨细胞的进入细胞周期的S期,细胞增殖指数较高。其他实验组无显着的差别。用碱性磷酸酶试剂盒检测受到血当归1.0×10-3、10-4 mg/ml甲醇提取物,1.0×10-3、10-4、10-5 mg/ml乙酸乙酯提取物,1.0×10-3 mg/ml水提取物处理均有促进成骨细胞碱性磷酸酶的活性。其他实验组无促进效应。结论:血当归的甲醇,乙酸乙酯,水提取物均能促进成骨细胞的增殖和分化。
李国臣,王林,桑宏勋,李祥,王成焘,黄鑫,雷伟,姥伟[9]（2009）在《可控微结构EBM钛合金支架与成骨细胞的体外三维复合培养》文中进行了进一步梳理[目的]探讨可控微结构EBM钛合金支架作为成骨细胞体外培养载体的可行性,并观察载体类蜂巢状孔结构在成骨细胞培养中的作用。[方法]应用直接金属快速成形技术—电子束熔化成形（electron beam melting,EBM）过程直接构建和制备可控性微结构钛合金支架。分离培养1d龄胎兔颅骨成骨细胞,以兔颅骨源性成骨细胞复合支架作为实验组,以单独培养的兔颅骨源性成骨细胞作为对照组。将成骨细胞与支架复合培养1、7、14d后,进行倒置相差显微镜、扫描电镜及组织切片染色观察细胞与材料复合情况,以MTT比色法及碱性磷酸酶的定量检测研究材料结构对细胞增殖、分化的影响。[结果]成骨细胞/支架复合培养7d后,大量细胞通过伸出多个伪足粘附在支架表面以及孔周围并与支架牢固结合;培养14d后支架表面及孔隙内有大量细胞分布,细胞伸出数个突起沿着孔隙壁逐渐向孔隙内延伸、汇集。支架上的细胞增殖、分化以及转移明显增加,与对照组比较有明显统计学差异（P<0.05）。[结论]EBM钛合金支架有利于细胞的贴附、生长及增殖,并对细胞的功能无不良的影响。支架类蜂巢状孔结构能够调节成骨细胞在支架内的分布。
卓丽玲[10]（2009）在《钙、磷对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化影响的研究》文中研究指明随着人们对骨代谢疾病的重视,研究不同因子对成骨细胞（osteoblast,OB）的影响已成为当今热点。OB有形成骨骼、调节细胞外骨基质成分的构成以及骨基质矿化的功能。因此,OB功能状态与骨骼生长塑造、再造及骨质疏松的发展有着极其密切的联系。有些疾病可以通过增加OB的数量或增强OB的活性而引起骨量的增加。钙和磷是骨骼的重要物质成分,骨代谢过程必然涉及动物机体对钙、磷的吸收和代谢。摄入充足的钙、磷对保持动物的骨骼完好至关重要。体内钙、磷代谢的平衡和钙磷在细胞内、外液中浓度的稳定对维持正常骨代谢有重要作用。因此,建立一种快速获得OB的培养方法,研究钙、磷对OB体外增殖、分化及矿化的影响,对骨质疏松症的研究有重要的理论和指导意义。本试验选用5 d SD大鼠头盖骨作为试验用OB的来源,通过胰蛋白酶预消化后,剪碎,经Ⅱ型胶原酶消化获得细胞,采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、钙化结节染色鉴定,经台盼蓝染色、“反复贴壁法”纯化后,进行了成活率和纯度分析,用MTT法检测了一个生长周期内OB的活性分布,成功建立了SD大鼠头盖骨OB体外培养模型;在体外培养的基础上,在培养液中添加不同浓度的钙、磷及其比例,共分9组,分别为不添加任何成分的对照组、添加1、2、4 mmol/L钙组、添加1、2、4 mmol/L磷组、钙磷比1∶2（添加1 mmol/L钙+2 mmol/L磷）组和钙磷比2∶1（添加2 mmol/L钙+1 mmol/L磷）组。分别从OB的形态学、OB分泌ALP活性、OB分泌蛋白、Ⅰ型胶原（collagen type I,Col-I）)、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的含量、OB表达ALP、Col-I、OPN、骨钙素（bone glaprotein,BGP）mRNA的含量及OB内Ca2+沉积及体外钙化等指标进行了分析,详细的研究了钙、磷及其比例对乳鼠头盖骨OB增殖、分化及矿化的影响。结果表明,①本试验培养的头盖骨OB,经ALP染色鉴定,并计数,OB纯度高达98.06%,台盼蓝染色计数分析,原代OB成活率为88.69%,传代的OB成活率高达94.12%,且在一个生长周期内,在第3、4 d进入对数生长期,细胞融合并开始重叠生长,在第7 d达到峰值,并进入钙化期,随后细胞进入衰减期。因此,本试验将选择在细胞融合时定为钙、磷处理OB的时间点,检测处理后第2、5、8 d的各种指标;②与对照组比较,添加钙各组均促进OB增殖,且有剂量效应,钙4 mmol/L从第2 d开始差异显着（P<0.05）,钙1、2 mmol/L从第5 d开始差异显着（P<0.05）,而钙磷比（2:1、1:2）只在第8 d差异显着（P<0.05）。而添加磷对OB增殖作用影响不明显。③与对照组比较,添加钙使OB胞体饱满,表面针状突起增多,形态结构无破损,细胞膜、核膜完整,线粒体轻度肿胀,添加磷及不同钙磷比使OB胞体扁平,针状突起减少,但形态结构无破损,细胞膜、核膜完整。④与对照组比较,添加钙、磷及其比例在第2、5、8 d均抑制细胞内ALP活性（P<0.05）,在第5 d抑制其mRNA的表达（P<0.01）,但在第2、8 d却促进其mRNA的表达（P<0.05）。⑤与对照组比较,添加钙、磷及其比例各试验组除1 mmol/L钙外,在第2 d均促进Col-I分泌（P<0.01）,钙各组和1 mmol/L磷在第5 d和钙各组和1、2 mmol/L磷和钙磷比（2:1）在第8 d均抑制其分泌（P<0.05或P<0.01）,在第2、8 d均促进其mRNA表达（P<0.01）,在第5 d除钙磷比（1:2）外均抑制其mRNA表达（P<0.01）。⑥与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均促进OPN mRNA的表达（P<0.01）,除第2 d钙1、2 mmol/L组外,均促进其分泌（P<0.05）。⑦与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均促进BGP mRNA的表达（P<0.01）。⑧与对照组比较,添加钙、磷及其比例作用后,各试验组均能促进OB内Ca2+的沉积及体外钙化。表明,钙（1、2、4 mmol/L）及钙磷比（1∶2 ,2∶1 ）能促进OB增殖、分化及体外钙化,利于新骨的形成。磷（1、2、4 mmol/L）能促进OB的分化及体外钙化,但对增殖作用不明显。
二、新生兔颅骨改良组织块移行法成骨细胞的体外培养（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、新生兔颅骨改良组织块移行法成骨细胞的体外培养（论文提纲范文）
（1）猴上颌窦黏膜成骨潜能影像与组织学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 食蟹猴上颌窦应用解剖的影像学研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 小结 |
| 第二章 新型上颌窦黏膜提升装置食蟹猴实验模型的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 食蟹猴下颌骨骨增量实验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 食蟹猴经侧壁入路上颌窦提升骨增量实验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 缩写词简表 |
| 致谢 |
| 博士研究生期间发表论文情况 |
（2）牙本质基质颗粒联合牙囊细胞膜片再生牙周组织的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 冻存牙囊组织提取细胞与冻存牙囊细胞的生物学特性比较研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 牙囊细胞膜片的构建和生物学特性检测 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 牙本质基质颗粒修复SD大鼠颅骨临界缺损的实验研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 牙本质基质颗粒对牙囊细胞膜片生物学特性的影响 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 第五部分 牙本质基质颗粒联合牙囊细胞膜片再生牙周组织的动物实验 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）牙髓干细胞复合微纳结构HA修复牙槽骨缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 人牙髓干细胞的分离、纯化和生物学特性检测 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 人牙髓干细胞多向分化潜能评价 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三部分 微纳结构形貌修饰HA陶瓷作用牙髓干细胞的体外研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四部分 微纳结构形貌修饰HA陶瓷复合牙髓干细胞修复牙槽骨缺损的实验研究 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 全文总结 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论?和科研成果目录 |
| 临床病例报告 |
（4）骨质疏松不同证型下左归丸、右归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 OP、OP肾阴虚、OP肾阳虚模型的建立与评价 |
| (一) 实验材料与方法 |
| (二) 结果 |
| (三) 分析与讨论 |
| (四) 小结 |
| 第二部分、实验用成骨细胞的筛选——不同证型下成骨细胞的培养与鉴定 |
| (一) 实验材料与方法 |
| (二) 结果 |
| (三) 分析与讨论 |
| (四) 小结 |
| 第三部分 左归丸、右归丸含药血清有效作用浓度及时间的筛选 |
| (一) 实验材料与方法 |
| (二) 结果 |
| (三) 分析与讨论 |
| (四) 小结 |
| 第四部分 OP不同证型左、右归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路的研究 |
| (一) 实验材料与方法 |
| (二) 结果 |
| (三) 分析与讨论 |
| (四) 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
（6）两种方法分离新生大鼠颅骨成骨细胞纯度和活性的比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 成骨细胞分离培养 |
| 1.2 形态学观察 |
| 1.3 细胞内碱性磷酸酶 (ALP) 染色 |
| 1.4 胞浆内ALP测定 |
| 1.5 统计学分析方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 倒置相差显微镜下细胞生长形态的观察 |
| 2.2 ALP染色 |
| 2.3 胞浆内ALP测定 |
| 3 讨论 |
（7）成骨细胞的体外培养与鉴定（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 资料和方法 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 资料的纳入与排除标准 |
| 1.3 对纳入文献的评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 纳入文献基本情况 |
| 2.2 文献证据综合提炼 |
| 2.2.1 成骨细胞的演变 |
| 2.2.2 成骨细胞的来源 |
| 2.2.3 成骨细胞培养方法 |
| 2.2.4 成骨细胞鉴定 |
| 3 讨论 |
（8）血当归粗提物体外成骨活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 前言 |
| 参考文献 |
| 第2章 原代小鼠颅盖骨成骨细胞的分离、培养和鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 主要试剂、仪器和溶液配制 |
| 2.2.1.1.主要试剂及材料 |
| 2.2.1.2. 实验仪器 |
| 2.2.1.3.溶液配制 |
| 2.2.1.4. 溶液以及器皿的灭菌 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 小鼠颅盖骨原代细胞培养 |
| 2.2.2.2 小鼠颅盖骨原代细胞特性研究 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 原代细胞及传代细胞形态观察 |
| 2.3.2 GIEMSA 染色 |
| 2.3.3 CCK-8 测定细胞增殖 |
| 2.3.4 成骨细胞碱性磷酸酶活性 |
| 2.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第3章 血当归提取物对成骨细胞增殖的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.2.2.1.血当归提取物的配制 |
| 3.2.2.2 CCK-8 法线性关系考察 |
| 3.2.2.3 血当归提取物对成骨细胞增殖活性的影响测定 |
| 3.2.2.4 统计方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 CCK-8 法线性关系考察 |
| 3.3.2 提取物对成骨细胞增殖的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第4章 血当归粗提物对体外培养成骨细胞细胞周期的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 细胞培养及细胞前处理 |
| 4.2.2.2 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 甲醇提取物对细胞周期的影响 |
| 4.3.2 乙酸乙酯提取物对细胞周期的影响 |
| 4.3.3 水提取物对细胞周期的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第5章 血当归粗提物对成骨细胞碱性磷酸酶活性影响的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.2.2.1 碱性磷酸酶试剂盒有效性考察 |
| 5.2.2.2 成骨细胞碱性磷酸酶活性测定 |
| 5.2.2.3 统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 ALP 试剂盒法有效性考察 |
| 5.3.2 血当归提取物对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录：攻读学位期间发表论文 |
（9）可控微结构EBM钛合金支架与成骨细胞的体外三维复合培养（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及主要试剂和仪器 |
| 1.2 可控性微结构EBM钛合金支架的设计与制备 |
| 1.3 细胞的分离与扩增 |
| 1.4 细胞接种与培养 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.5.1 形态学观察 |
| 1.5.2 兔颅骨成骨细胞的鉴定 |
| 1.5.3 MTT法检测细胞增殖活性 |
| 1.5.4 扫描电子显微镜 (SEM) 观察 |
| 1.5.5 细胞碱性磷酸酶 (alkaline phosphate, ALP) 活性定量检测 |
| 1.5.6 组织学染色和观察 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 成骨细胞形态学观察及鉴定 |
| 2.2 细胞活力测定 |
| 2.3 SEM观察 |
| 2.4 ALP活性检测 |
| 2.5 组织学观察 |
| 3 讨 论 |
（10）钙、磷对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 钙、磷与骨代谢 |
| 1 骨代谢 |
| 1.1 破骨细胞与骨吸收 |
| 1.2 成骨细胞与骨形成 |
| 2 钙代谢 |
| 3 磷代谢 |
| 4 钙、磷与骨代谢 |
| 第二章 成骨细胞的体外培养及应用 |
| 1 成骨细胞的生物学特性 |
| 2 成骨细胞的原代培养 |
| 2.1 酶消化法 |
| 2.2 组织块移行生长法 |
| 2.3 骨内成骨细胞培养法 |
| 2.4 骨膜内成骨细胞培养 |
| 2.6 不同种属成骨细胞的培养 |
| 3 成骨细胞的鉴定 |
| 3.1 形态观察 |
| 3.2 生物学鉴定 |
| 4 成骨细胞的应用 |
| 5 成骨细胞的应用前景 |
| 第三章 体外成骨细胞的表型分化及其蛋白表达 |
| 1 成骨细胞的起源及体内生长发育 |
| 2 体外成骨细胞的分化及蛋白表达 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 成骨细胞原代培养方法的建立及鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 溶液的配制 |
| 2.2 成骨细胞的分离 |
| 2.2.1 成骨细胞的取材 |
| 2.2.2 消化传代 |
| 2.2.3 成骨细胞的纯化 |
| 2.3 活细胞的观察检测 |
| 2.3.1 台盼蓝染色 |
| 2.3.2 形态学观察 |
| 2.4 成骨细胞的鉴定 |
| 2.4.1 碱性磷酸酶（ALP）染色 |
| 2.4.2 矿化结节染色 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞成活率 |
| 3.2 成骨细胞原代及传代培养的生物学特征 |
| 3.3 碱性磷酸酶染色光镜观察 |
| 3.4 矿化结节光镜观察 |
| 4 讨论 |
| 第二章 钙、磷对成骨细胞形态及细胞增殖的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 溶液的配制 |
| 2.2 成骨细胞的培养 |
| 2.3 实验设计 |
| 2.4 成骨细胞表面结构的观察 |
| 2.5 成骨细胞超微结构的观察 |
| 2.6 成骨细胞增殖的检测（MTT 法） |
| 2.7 成骨细胞细胞周期的检测 |
| 2.8 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 成骨细胞表面结构变化 |
| 3.2 成骨细胞超微结构的变化 |
| 3.3 成骨细胞的增殖 |
| 3.4 成骨细胞细胞周期的变化 |
| 4 讨论 |
| 第三章 钙、磷对成骨细胞体外表型分化功能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 成骨细胞的培养 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 细胞内碱性磷酸酶活性的检测（PNPP） |
| 2.4 细胞内总蛋白质的检测（BCA 法） |
| 2.5 Ⅰ型胶原的检测（酶联免疫吸附法） |
| 2.6 骨桥蛋白的检测（免疫组化法） |
| 2.7 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 碱性磷酸酶活性变化 |
| 3.2 蛋白质含量的变化 |
| 3.3 Ⅰ型胶原含量的变化 |
| 3.4 骨桥蛋白含量的变化 |
| 4 讨论 |
| 第四章 钙、磷对成骨细胞Ca~(2+)、GJIC 和矿化功能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 成骨细胞的培养 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 细胞内Ca~(2+)测定 |
| 2.4 成骨细胞间隙连接通讯（GJIC）测定 |
| 2.5 钙化功能检测 |
| 2.6 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞内Ca~(2+)沉积的变化 |
| 3.2 细胞间隙连接通讯的变化 |
| 3.3 体外钙化功能的变化 |
| 4 讨论 |
| 第五章 钙、磷对成骨细胞标志性蛋白mRNA 表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 成骨细胞的培养 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 采样前准备 |
| 2.4 RNA 的提取 |
| 2.5 引物设计 |
| 2.6 cDNA 的制备 |
| 2.7 荧光定量PCR 反应 |
| 2.8 Ct 值与△△ct 计算方法及结果分析 |
| 2.9 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 总RNA 的检测 |
| 3.2 钙、磷对ALP、Col-Ⅰ、OPN 和BGP mRNA 的表达的影响 |
| 3.2.1 熔解曲线分析 |
| 3.2.2 ALP、Col-Ⅰ、OPN 和BGP mRNA 表达实时荧光定量结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
四、新生兔颅骨改良组织块移行法成骨细胞的体外培养（论文参考文献）
- [1]猴上颌窦黏膜成骨潜能影像与组织学研究[D]. 吴王喜. 南方医科大学, 2017
- [2]牙本质基质颗粒联合牙囊细胞膜片再生牙周组织的实验研究[D]. 杨禾丰. 昆明医科大学, 2016(01)
- [3]牙髓干细胞复合微纳结构HA修复牙槽骨缺损的实验研究[D]. 毛丽霞. 上海交通大学, 2016
- [4]骨质疏松不同证型下左归丸、右归丸含药血清干预成骨细胞ERK1/2、Wnt/β-catenin信号通路的研究[D]. 范连霞. 浙江中医药大学, 2015(01)
- [5]大鼠成骨细胞的体外培养研究[J]. 张惜燕,田丙坤,陈传贞,邢玉瑞,乔文彪,李翠娟,李涛,孙耀光. 陕西中医, 2014(08)
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