一、清肺口服液在组织培养上对腺病毒3Ⅰ、3Ⅱ型致细胞病变作用研究（论文文献综述）
孟欣[1]（2017）在《汪受传治疗肺炎喘嗽用药规律及金欣口服液、黄芩素治疗RSV肺炎的代谢调控机理》文中进行了进一步梳理背景中医药治疗小儿肺炎喘嗽具有一定优势。汪受传教授治疗肺炎喘嗽,效果较显着,且安全性高、副作用少。因此,需要全面深入挖掘汪教授治疗肺炎喘嗽的用药规律。目的利用聚类和关联规则分析方法挖掘汪教授治疗儿童肺炎喘嗽的用药规律。方法以汪教授门诊治疗肺炎喘嗽的249份病案为基础,通过使用SPSS 19.0和Clementine 12.0软件对29味高频药物进行聚类和关联规则分析,探究其用药规律。结果1.聚类分析共分4个类别。C1:炙麻黄、苦杏仁、黄芩、虎杖、葶苈子、苏子及前胡;C2:桑叶、桑白皮、胆南星、枇杷叶、辛夷及重楼;C3:桔梗、枳壳、浙贝母、地龙、蝉蜕、瓜蒌、紫苑、百部、生石膏及丹参;C4:炙黄芪、白术、防风、煅龙骨、煅牡蛎。2.关联规则分析:从两药关联来看,前胡与炙麻黄、炙麻黄与杏仁、桑叶与桑白皮、前胡与杏仁、苏子与葶苈子、苏子与前胡、前胡与黄芩、虎杖与黄芩、胆南星与黄岑、胆南星与前胡、桑白皮与黄芩等两位常用药物组合;从三药关联来看,基本体现出治疗肺炎喘嗽当以宣肃肺气,清热化痰为治疗大法。宣肺类代表药物为炙麻黄、桑叶,肃降肺气类代表药物为杏仁、桑白皮、枇杷叶、前胡、葶苈子、苏子等,清肺泻热类代表药物为黄芩、虎杖等,化痰类代表药物为胆南星、杏仁等。结论运用聚类分析和关联规则分析可以初步揭示汪教授临证治疗肺炎的用药规律,即以炙麻黄、苦杏仁、桑叶、桑白皮、黄芩、虎杖、葶苈子、苏子、胆南星、前胡等为核心药物,配伍桔梗、枳壳、浙贝母、瓜萎、紫菀、百部、生石膏等清热化痰,肃肺止咳。背景肺炎是儿科常见的呼吸系统疾病,严重危害儿童健康,世界卫生组织将其列为全球3种重要儿科疾病之一。据统计,在儿童急性下呼吸道感染中,病毒性肺炎所占比例呈上升趋势,而呼吸道合胞病毒作为其中最重要的病原体之一,可以引起婴幼儿毛细支气管炎、支气管肺炎、间质性肺炎等。呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染的发病机制尚未完全明确,且目前缺乏安全有效的疫苗和药物进行针对性的预防和治疗。中医药因其辨证论治、作用柔和及副作用少等特点,在治疗儿童呼吸道病毒感染中具有一定的优势。汪教授已研究儿童病毒性肺炎二十余年,根据该病特点和关键病机,研制出金欣口服液,作为临证治疗病毒性肺炎的有效验方,具有宣肺开闭、清热化痰、止咳平喘的功用。前期大量临床和实验研究已表明其可显着抗RSV感染及调节免疫作用。黄芩素是金欣口服液组成药物黄芩的重要有效成分,研究表明具有广谱的抗病毒活性。但是,和许多中医药实验研究一样,上述研究可能存在诸多缺陷,如指标单一、独立、非同步等,难以全面反映药物的作用机制。因此,若深入探讨其治疗作用,应当引入系统化、整体化的研究技术方法以综合分析。代谢组学是系统生物学的重要组成部分,在生物体受到各种外界因素刺激时,能即时、灵敏、真实表现出生物体整体功能的应答与调节。作为一种系统的研究方法,其以机体的整体代谢为研究对象,动态研究生物体受刺激或者扰动之后,其内源性代谢物种类、数量的变化,可以从较为全面的视角发现药物真正的作用机理及其赖以发挥作用的物质基础。因此,本课题组采用代谢组学研究方法,尝试阐明金欣口服液和黄芩素治疗RSV感染的作用,以及其中的作用机制。目的研究RSV肺炎BALB/c小鼠血浆、尿液、肺泡灌洗液、脾脏组织及细胞的代谢特征,进而探讨金欣口服液以及黄芩素对RSV肺炎小鼠的干预作用以及其中可能涉及的代谢调控机制。方法RSV鼻腔吸入法感染BALB/C小鼠之后,分别予以金欣口服液以及黄芩素进行干预,并设正常对照组,分别采集小鼠血浆、尿液、肺泡灌洗液和脾脏组织,行肺部组织病理病理学分析以观察肺部病变情况。培养细胞,予RSV感染1.5-2h后,予黄芩素处理,24h后予以液氮淬灭,以水-甲醇-氯仿提取细胞内代谢物。将上述小鼠样本和细胞样本预处理后,运用气相色谱-质谱联用（Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS）分析小鼠的血浆、尿液、脾脏组织和细胞的整体代谢变化,运用超高效液相色谱-离子阱质谱联用（Ultra Performance Liquid Chromatography-LTQ/Orbitrap-Mass Spectrometer,UPLC-LTQ/Orbitrap-MS）研究小鼠肺泡灌洗液中代谢谱变化,利用主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（Orthogonalpartial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）分析所采集的数据,筛选潜在的血浆、尿液、脾脏、肺泡灌洗液和细胞内的生物标记物,分析相关代谢通路,阐释金欣口服液和黄芩素对RSV肺炎的可能的代谢调控机制。结果1.RSV感染BALB/c小鼠的肺组织病变主要位于肺间质部位,可见肺脏可见间质多灶性炎细胞浸润（++）,以单核细胞、淋巴细胞为主;肺泡壁轻度充血（+）,肺泡壁明显增厚。分别运用金欣口服液和黄芩素治疗后,肺部充血、水肿、炎性浸润均有不同程度减轻。2.金欣口服液的代谢组学研究（1）血浆:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的血浆的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.934,Q2=0.889,鉴定并筛选了 6个潜在生物标记物,分别为乳酸、尿素、谷氨酰胺、1,5-脱水山梨醇、葡萄糖、花生四烯酸。（2）尿液:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的尿液的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.85,Q2=0.746,鉴定并筛选了 4个潜在生物标记物,分别为乳酸、甘氨酸、硬脂酸、棕榈酸。（3）脾脏组织:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的脾脏样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.959,Q2=0.895,鉴定并筛选了 6个潜在生物标记物,分别为L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖,（4）肺泡灌洗液:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的肺泡灌洗液样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.972,Q2=0.924,鉴定并筛选了 6个潜在生物标记物,分别为左旋肉碱、丙酰肉碱、腺苷、二氢神经鞘氨醇、白三烯D5和葡萄糖醛酸雌素酮。3.黄芩素的代谢组学研究（1）细胞:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的肺泡灌洗液样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.974,Q2=0.917,鉴定并筛选了 6个潜在生物标记物,5种差异性代谢物,分别为丝氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸酸、柠檬酸与甘氨酸。（2）血浆:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的血浆样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.912,Q2=0.84,鉴定并筛选了 6个潜在生物标记物,乳酸、尿素、甘氨酸、谷氨酰胺、1,5-脱水山梨醇、D-葡萄糖。（3）尿液:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的尿液样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.917,Q2=0.767,鉴定并筛选了 4个潜在生物标记物,乳酸、苹果酸、棕榈酸、硬脂酸。（4）肺泡灌洗液:正常组、RSV肺炎模型组与金欣口服液治疗组小鼠的尿液样本的OPLS-DA分析显示,三组间能完全分离,无交叉和重叠,模型参数R2Y=0.954,Q2=0.828,鉴定并筛选了5种差异性代谢物,鉴定结果分别为谷氨酸、碳酰肉碱、腺苷、葡萄糖苷酰鞘氨醇、白三烯D5。结论1.运用UPLC/MS和GC-MS分析代谢组学可以从代谢网络的角度阐释金欣口服液和黄芩素治疗RSV感染的作用机制。2.RSV感染BALB/c后,血浆、尿液、肺泡灌洗液及脾脏内的内源性代谢物发生紊乱,主要为氨基酸、有机酸及脂肪酸。3.金欣口服液和黄芩素可以治疗RSV感染,减轻BALB/c小鼠的肺部炎症。4.金欣口服液和黄芩素能够部分调整RSV感染导致的代谢紊乱,其中金欣口服液涉及谷氨酰胺代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,花生四烯酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,以及丙酮酸代谢;黄芩素发挥治疗作用主要与谷氨酰胺代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢相关。
杜丽娜[2]（2015）在《基于UPLC-MS技术的呼吸道合胞病毒肺炎痰热闭肺证代谢模式及金欣口服液干预研究》文中研究表明背景：肺炎是常见的小儿肺系疾病,在综合性医院儿科住院病例单病种统计中居首位,WHO列为全球3种重要儿科疾病之一。在我国小儿急性下呼吸道感染中,病毒约占1/3,并呈上升趋势,其中以呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus; RSV）最多。RSV肺炎以热证为多见,其中痰热闭肺证是RSV肺炎最为常见和重要的一种证候。一个证候包含了多脏器多指标间的复杂联系,很难用单一指标或某几个指标的简单叠加来阐释证候物质基础。如何科学、全面地阐述中医证候的实质和内涵是现代中医学亟需解决的一个重要问题。国内外研究表明,对于小儿病毒性肺炎的治疗,西药尚缺乏理想药物,唯一被美国儿科协会推荐为“也许可以使用”的药物是利巴韦林。中医药治疗有一定的优势,且已经为大量临床和实验研究所证实。南京中医药大学汪受传教授领衔的本课题组从事中医药治疗小儿病毒性肺炎研究近20年,研制了有效中药方剂金欣口服液,具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳等功效。课题组前期已经对金欣口服液在RSV感染方面的作用进行了大量研究,然而,由于金欣口服液活性化学成分的复杂性,目前金欣口服液对RSV肺炎的整体代谢网络调控作用仍不清楚。代谢组学（Metabonomics）是关于生物体内源性代谢物种类、数量及其变化规律的一门新兴学科,是系统生物学技术的重要组成部分。由于代谢物是生物体所有基因、蛋白功能活动的终点,因而被视作生物体整体功能状态的“生化表型”,能够即时、灵敏、真实的表现在各种外界因素的刺激下生物体整体功能状态的应答与调节,避免了既往采用单一或少数几个指标来研究某种生理、病理变化的弊端。代谢组学技术在方法学上融整体、动态、综合分析于一体的特点,与中医学的整体观念相一致。因此本课题采用代谢组学方法,结合其他生化检测,全面表征RSV肺炎痰热闭肺证所导致的代谢物组变化,尝试阐明RSV肺炎痰热闭肺证的本质和金欣口服液对RSV感染小鼠的治疗作用。目的：研究RSV肺炎痰热闭肺证患儿血浆和尿液的代谢特征,探讨RSV肺炎痰热闭肺证的证候实质；研究RSV肺炎BALB/c小鼠血浆和肺组织的代谢特征,探讨金欣口服液对RSV肺炎BALB/c小鼠的干预作用及可能的代谢调控机制。方法：RSV肺炎痰热闭肺证代谢组学的临床实验：选择符合中西医诊断条件的RSV肺炎痰热闭肺证患儿30例,设为疾病组,同时设健康正常组30例。分别采集两组儿童的血浆和尿液,采用超高效液相色谱-二维线性离子阱质谱联用仪（Ultra-performance Liquid Chromatography coupled with Linear Ion Trap Quadrupole Orbitrap Mass Spectrometry, UPLC-LTQ/Orbitrap-MS）检测两组的血浆和尿液的代谢产物,建立小儿RSV肺炎痰热闭肺证的证候相关代谢谱,利用主成分分析（Principal Component Analysis, PCA）和正交偏最小二乘法（Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis, OPLS-DA）对检测的矩阵数据进行统计分析,筛选潜在的血浆、尿液生物标记物,分析相关代谢通路,探索RSV肺炎痰热闭肺证的代谢特征本质。金欣口服液干预RSV肺炎BALB/c小鼠的动物实验：RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液进行干预,并设利巴韦林为阳性对照,6天后分别采集小鼠血浆、肺组织,行肺组织病理切片形态学分析来评价肺部病变情况,基于UPLC-LTQ/Orbitrap-MS研究各组小鼠血浆和肺组织整体代谢变化,利用PCA和OPLS-DA分析检测数据,筛选潜在的血浆、肺组织生物标记物,分析相关代谢通路,评价金欣口服液的药效,阐明金欣口服液的代谢调控机制。结果：RSV肺炎痰热闭肺证代谢组学的临床实验：1.血浆代谢组学模式识别分析结果显示,RSV肺炎痰热闭肺证患儿与健康正常组儿童主成分积分值大部分集中分布于散点图的椭圆形（95%置信区）区域内,虽有一定的分离趋势,但仍存在交叉重叠,进一步构建OPLS-DA模型,模型参数分别为R2Y=0.907, Q2=0.567（血浆上层样本）和R2Y=0.816, Q2=0.619 （血浆下层样本）,正常组和RSV肺炎痰热闭肺证组沿第一主成份t[1]轴方向能完全分离,无交叉和重叠,说明两组在代谢特征方而具有明显差异：筛选了21个潜在生物标记物,并鉴定了其中的20个；其中SM（18：2/24：0）、SM（d18:2/24:1）、SM（d18:0/18:1）等鞘磷脂,TG（16:0/18:1/22:6）、TG（16:0/18:0/22:6）、 TG（16:0/20:4/22:5）、TG（18:1/18:3/20:4）、TG（16:0/20:3/22:4）等甘油三酯在RSV肺炎痰热闭肺证患儿血浆中呈上调趋势,PC（18:0/18:2）、PC（18:0/18:1）、PC（16:0/20:3）、PC（18:0/20:3）、 PC（16:0/22:5）、PC（18:2/20:0）、LysoPC（18:2）等磷脂酰胆碱,TG（14:0/16:0/18:2）、TG（14：0/16：0/16：1）等甘油三酯在RSV肺炎痰热闭肺证患儿血浆中呈下调趋势,此外,还发现了Bilirubin、Carnitine、Tryptophan等与RSV肺炎痰热闭肺证有关的物质,较正常儿显着下降。2.尿液代谢组学模式识别分析结果显示,采用PCA方法对RSV肺炎痰热闭肺证患儿与健康正常组儿童样本建模,大部分样本集中分布于散点图的椭圆形（95%置信区）区域内,虽有一定的分离趋势,但仍存在交叉重叠,进一步建立OPLS-DA模型,参数分别为R2Y=0.865, Q2=0.580 （a Q色谱柱所测尿液样本）和R2Y=0.902, Q2=0.593 （HILIC色谱柱所测尿液样本）,正常组和RSV肺炎痰热闭肺证组完全分离,说明两组在代谢物方面具有明显差异；筛选了15个差异性生物标记物,并鉴定了其中11个；Acetylcarnitine. 3-Methylglutarylcarnitine、1-Pyrroline-4-hydroxy-2-carboxylate、Kynurenine、Tryptophan、 Acetylspermidine、Cytosine、Tryptamine等在RSV肺炎痰热闭肺证患儿尿液中呈上调趋势,Methyldopa、N-Methylhydantoin等在RSV肺炎痰热闭肺证患儿尿液中呈下调趋势。金欣口服液干预RSV肺炎BALB/c小鼠的动物实验：1.RSV感染BALB/c小鼠后肺组织病理改变主要表现为间质性肺炎,肺泡壁充血增厚,间质有单核巨噬细胞及中性粒细胞浸润,支气管上皮细胞无明显变性、坏死,支气管管腔及肺泡腔无明显渗出物；金欣口服液干预后肺部充血及炎症有不同程度的减轻。病理评分结果显示治疗组较模型组显着下降。2.RSV感染6天后,BALB/c模型小鼠与正常小鼠血浆数据基于OPLS-DA模型能完全分离,模型参数分别为R2Y=0.917,Q2=0.835（血浆上层样本）和R2Y=0.967,Q2=0.936（血浆下层样本）,表明造模成功,RSV感染引起了小鼠血浆代谢特征的变化；筛选并鉴定25个生物标记物；其中PC（18:1/22:6）.PC（18:0/205）等磷脂酰胆碱和TG（18:1/18:2/18:2）、 TG（18:1/18:1/18:2）等甘油三酯在模型组小鼠血浆中较正常组显着增加,PC（18:1/18:3）、 PC（18:0/22:6）、PC（P-18:1/22:2）、PC（O-18:0/22:6）、PC（O-20:0/22:6）. PC（16:0/20:4）、 PC（P-20:0/14:0）、LysoPC（16:0）、LysoPC（18:2）、LysoPC（18:0）、LysoPC（20:4）、LysoPC（18:1）、 LysoPC（22:6）等磷脂酰胆碱,SM（d18:1/24:1）.SM（d18:0/18:1）.SM（d18:2/24:1）、 Phytosphingosine等鞘脂质和TG（16:0/18:0/14:0）.TG（16:0/16:0/18:0）等甘油三酯在模型组小鼠血浆中较正常组显着下‘降,此外,PE（18:3/19:0）、Phytanic acid等也呈下调趋势。基于所筛选出的生物标记物,我们评价了金欣口服液的药效,发现金欣口服液能不同程度的回调其中11个生物标记物,且主要通过调节甘油磷脂的代谢通路而发挥作用。3.RSV感染6天后,基于BALB/c模型小鼠与正常组小鼠肺组织数据构建OPLS-DA模型,两组完全分离,无交叉和重叠,模型参数分别为R2Y=0.879,Q2=0.789（肺组织上层样本）和R2Y=0.918,Q2=0.853（肺组织下层样本）,表明造模成功,RSV感染引起了小鼠肺组织代谢网络的变化；筛选并鉴定25个生物标记物；其中PC（18:0/18:1）、 PC（18:0/18:2）、PC（22:6/18:2）、PC（18:2/20:4）、PC（P-20:0/14:0）、LysoPC（18:0）、LysoPC（16:0）、 LysoPC（18:1）、LysoPC（20:4）、LysoPC（18:2）等磷脂酰胆碱,SM（40:1）、SM（d18:1/20:0）、 Sphinganine、Phytosphingosine等鞘脂质和TG（18：1/18：1/18：1）、TG（18:1/16:0/20:1）、 TG（18:1/18:1/18:2）、TG（18:1/18:2/18:2）、TG（16:0/18:0/22:6）、TG（18:1/18:0/20:1）等甘油三酯在RSV肺炎BALB/c小鼠中含量较正常组显着下降,此外,Phytanic acid、Leucine、 Phenylalanine、Choline、LysoPE（16:0）等亦与RSV感染有关,在模型组小鼠中呈下调趋势。基于所筛选出的生物标记物评价金欣口服液的抗病毒药效,结果发现金欣口服液能不同程度的回调肺组织中16个生物标记物,主要通过调节苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、甘油磷脂代谢、鞘脂质代谢通路而发挥作用。结论：1. UPLC-LTQ/Orbitrap-MS分析代谢组学能够初步阐释并区分RSV肺炎痰热闭肺证与健康正常儿二者不同的代谢模式。2.RSV肺炎痰热闭肺证患儿血浆和尿液中主要以色氨酸、甘油磷脂代谢紊乱为标志。3.RSV肺炎BALB/c小鼠血浆和肺组织主要表现为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、甘油磷脂代谢、鞘磷脂代谢发生紊乱。4.金欣口服液能够明显减轻RSV感染小鼠的肺部炎症。5.金欣口服液能够部分调整RSV感染引起的代谢紊乱,主要通过调节苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、甘油磷脂代谢、鞘脂质代谢通路而发挥作用。
陈争光[3]（2015）在《金欣口服液对RSV诱导的TLR3/RIG-I信号通路的调控作用的研究》文中进行了进一步梳理呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）是引起婴幼儿下呼吸感染而导致住院的首要原因,据世界卫生组织报道,RSV约占婴幼儿肺炎病原的29%。RSV感染的发病机制目前尚未完全明确,现代医学尚无特效的抗RSV病毒药,FDA仅批准利巴韦林可用于RSV感染,但因其副作用发生率较高,限制其在临床的广泛使用；在RSV病毒疫苗的研制方面,近年来未实现质的突破,目前尚未上市疫苗。目前,中医药治疗病毒性疾病具有显着优势。金欣口服液（原名清肺口服液）由南京中医药大学博士生导师、中国着名儿科专家、全国名中医汪受传教授在《伤寒论》麻黄杏仁甘草石膏汤基础上,结合其长期临床实践经验、小儿特殊生理特点和科研成果制成。金欣口服液由炙麻黄、蜜制桑白皮、炒葶苈子、杏仁、生石膏、黄芩、前胡、虎杖、前胡组成,具有宣肺开闭、止咳平喘、活血解毒之功,经长期临床应用和大量临床研究证实,在治疗小儿呼吸道疾病方面具有显着地疗效。Toll样受体3（Toll-like receptors 3,TLR3）和维甲酸诱导基因（Retinoic Acid-Inducible GeneⅠ,RIG-Ⅰ）均属于固有免疫的模式识别受体,可识别RSV病毒增殖过程中产生的dsRNA从而激活TLR3信号通路和RIG-Ⅰ信号通路,最终促进细胞因子产生,从而发挥抗RSV的效应。本研究以TLR3/RIG-Ⅰ信号通路为切入点研究金欣口服液治疗小儿RSV病毒性肺炎的分子生物学机制。研究目的：通过检测金欣口服液干预后,RSV诱导的TLR3/RIG-Ⅰ信号通路关键分子表达情况,分析金欣口服液在治疗小儿感染RSV后所致肺炎的发病及治疗机制。研究方法：1.体外实验研究：1.1 RSV感染Raw264.7细胞后间断2h连续采样, Real time RT-PCR法检测TLR3、IRF3和IRP3 mRNA表达的变化趋势；1.2 RSV感染Raw264.7细胞后,将处理后的金欣口服液加入细胞内进行干预,RSV感染12h后,裂解细胞,探针法Real time RT-PCR法检测细胞内病毒载量。1.3 RSV感染Raw264.7细胞后,金欣口服液含药血清进行干预,RSV接种12h后收集细胞上清液和细胞,Real time RT-PCR法检测TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、IRF3、 IFN-β、SOCS1m RNA的表达情况；Western blot法检测TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、 IRF3 （P-IRF3）、IFN-β、SOCS1蛋白的表达情况；激光共聚焦显微镜检测TLR3蛋白表达情况；ELISA法检测细胞培养液中IFN-β的表达情况。1.4荧光标记的siRNA转染Raw264.7细胞,流式细胞仪检测转染效率。在MyD88基因干扰条件下,RSV感染Raw264.7细胞,予处理后的金欣口服液加入细胞内进行干预,RSV感染12h后,裂解细胞,Real time RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞MyD88、IRF3（P-IRF3）、NF-κBmRNA和蛋白的表达情况。2.体内实验研究：2.1 RSV通过滴鼻接种BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液和利巴韦林进行干预,在第一次接种呼吸道合胞病毒后2d、4d、7d,取小鼠肺组织研磨匀浆后,探针法Real time RT-PCR法检测肺组织中病毒载量。2.2 RSV通过滴鼻接种BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液和利巴韦林进行干预,在第一次接种呼吸道合胞病毒后2d、4d、7d,取小鼠肺组织和肺泡灌洗液；经病理检查相关处理后,观察肺部病变情况,Real time RT-PCR法检测TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、 IRF3、IFN-β、SOCS1 mRNA表达情况,Western blot法检测各组小鼠肺组织TLR3、RIG-Ⅰ、 IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、IRF3 （P-IRF3）、IFN-β、SOCS1蛋白表达情况；ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液IFN-β表达情况。结果：1.体外实验：1.1 Raw264.7细胞在感染RSV24h内,TLR3、IRF3和IFN-β mRNA出现了先增高后降低的表达趋势,TLR3 mRNA在RSV感染12-14h表达量达到最高值,IRF3 mRNA在RSV感染后10-12h表达量达到峰值,IFN-β在RSV感染后12-16h达到峰值。1.2 RSV感染Raw264.7细胞12h后,金欣口服液能够显着降低Raw264.7细胞内病毒载量（P<0.01）。1.3 RSV感染Raw264.7细胞12h后,模型组TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、IRF3、 IFN-βmRNA表达显着增加（P<0.01）,金欣口服液均能下调TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、 IRF3、IFN-β mRNA的高表达（P<0.01）；但模型组TRAF3 mRNA表达水平与正常组相比无显着变化（P>0.05）,金欣口服液可显着上调TRAF3 mRNA的表达（P<0.01）；模型组SOCS1 mRNA表达显着降低,金欣口服液可显着上调SOCS1的低表达。1.4 RSV感染Raw264.7细胞12h后,模型组TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、P-IRF3、 IFN-β蛋白表达显着增加（P<0.01）,金欣口服液能下调TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、P-IRF3、 IFN-β的高表达（P≤0.01）。RSV感染Raw264.7细胞12后,IRF3表达无显着变化（P>0.05）,金欣口服液对其亦无明显的调控作用（P>0.05）。RSV感染Raw264.7细胞12后,TRAF3表达无显着变化（P>0.05）,金欣口服液对其有下调作用（P<0.05）；模型组SOCS1蛋白表达显着降低,金欣口服液可显着上调SOCS1的低表达。1.5 MyD88基因干扰后,在mRNA和蛋白水平上,正常组IRF3表达量无显着变化（P>0.05）,阻断模型组与模型组相比无显着变化（P>0.05）,阻断造模后的药物干预组亦无显着变化（P>0.05）；但在MyD88基因干扰后,NF-κB的表达显着降低（P＜0.01）, RSV感染后模型组与基因干扰后的模型组相比也显着降低（P<0.01）,金欣口服液干预后未能改变此种改变（P>0.05）。2.体内试验：2.1RSV感染2d后,模型组小鼠肺组织RSV病毒载量明显增高,金欣口服液不同剂量组均能降低病毒载量（P<0.01）,两者之间无显着差异（P>0.05）。 RSV感染4d后,模型组小鼠肺组织内病毒载量较感染后2d明显增高（P<0.01）,金欣口服液不同剂量均能显着降低病毒载量（P<0.01）,金欣口服液高剂量组对RSV扩增抑制效应最明显（P<0.01）。与感染后4d相比,RSV感染7d后病毒载量显着降低（P<0.01）,与模型组相比,金欣口服液不同剂量组均能降低小鼠肺组织内的病毒载量（P<0.01）,两者之间无显着差异。2.2 RSV感染2d后,模型组肺组织病理评分与正常组相比有显着差异（P<0.01）,金欣口服液不同剂量能够显着减轻肺组织病理改变（P<0.01）,金欣口服液低剂量尤显着（P＜0.01）。 RSV感染4d后,模型组肺组织病理评分较感染后2d加重（P<0.01）,金欣口服液不同剂量组均可显着减轻病理改变（P<0.01）,金欣口服液高剂量组更显着（P<0.01）。RSV感染7d后,模型组肺组织病理评分较感染后4d加剧（P<0.01）,金欣口服液不同剂量组均可显着减轻（P<0.01）,金欣口服液高剂量组在减轻肺组织病变方面更明显（P<0.01）。2.3 RSV感染BALB/c小鼠2d后,模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、IRF3. SOCS1、IFN-β mRNA和蛋白表达均明显增高（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、IRF3、SOCS1、IFN-β mRNA和蛋白的高表达均有显着下调作用（P<0.01）,但金欣口服液低剂量组对IRF3 mRNA无显着变化（P>0.05）；模型组小鼠肺组织中TRAF3、TBK1 mRNA表达无显着变化（P>0.05）：与模型组相比,金欣口服液不同剂量组对TBK1mRNA表达具有下调作用（P<0.01）。模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、 P-IRF3、SOCS1、IFN-β蛋白表达均明显增高（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、RIG-Ⅰ IPS-Ⅰ、TRAF3、P-IRF3、SOCS1、IFN-β蛋白的高表达均有显着下调作用（P<0.01）；模型组小鼠肺组织中IRF3蛋白表达无显着变化（P>0.05）,金欣口服液不同剂量组对IRF3蛋白表达亦无调控作用（P>0.05）。模型组小鼠肺组织中TBK1蛋白表达具有显着下调作用（P<0.01）,金欣口服液高剂量组对TBK1蛋白表达具有显着下调作用（P<0.01）,而金欣口服液低剂量组对TBK1蛋白表达具有显着上调作用（P<0.01）。2.4 RSV感染BALB/c小鼠4d后,模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、 IRF3、SOCS1、IFN-βmRNA表达均明显增高（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TBK1、IRF3、SOCS1、IFN-β mRNA的高表达均有显着下调作用（P<0.01）；模型组小鼠肺组织中TRAF3 mRNA表达明显降低（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TRAF3 mRNA的低表达均有显着上调作用（P<0.01）。模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、 IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、P-IRF3、SOCS1、IFN-β蛋白表达均明显增高（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、P-IRF3、SOCS1、IFN-β蛋白的高表达均有显着下调作用（P<0.01）；模型组小鼠肺组织中IRF3蛋白表达无显着变化（P>0.05）,金欣口服液不同剂量组对IRF3蛋白表达亦无调控作用（P>0.05）。2.5 RSV感染BALB/c小鼠7d后,模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、 TBK1、IRF3、IFN-β mRNA表达均明显降低（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、IPS-Ⅰ、TBK1、IRF3、IFN-β mRNA的低表达均有显着上调作用（P<0.01）；金欣口服液低剂量组对RIG-ⅠmRNA的低表达具有显着上调作用（P<0.01）,但金欣口服液高剂量对RIG-Ⅰ mRNA的低表达无显着调控作用（P>0.05）；模型组小鼠肺组织中SOCS1 mRNA表达无显着变化（P>0.05）,但金欣口服液不同剂量对SOCS1 mRNA的表达均有显着下调作用（P＜0.01）。RSV感染BALB/c小鼠7d后,模型组小鼠肺组织中TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、 P-IRF3、SOCS1、IFN-β蛋白表达均明显降低（P<0.01）,金欣口服液不同剂量对TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、P-IRF3、IFN-β蛋白的低表达均有显着上调作用（P<0.01）,但金欣口服液不同剂量对SOCS1蛋白具有下调作用（P<0.01）；模型组小鼠肺组织中TBK1、IRF3蛋白表达无显着变化（P>0.05）,金欣口服液不同剂量组对IRF3蛋白表达无调控作用（P>0.05）。结论：（1）金欣口服液能够显着降低RSV感染Raw264.7细胞和BALB/c小鼠肺组织内的病毒载量,具有直接抑制RSV增殖的。（2）金欣口服液能够明显减轻RSV感染BALB/c小鼠肺组织病理变化,能够减轻肺泡壁的充血、水肿,减轻中性粒细胞、淋巴细胞和单核巨噬细胞的浸润,减少代偿性肺气肿等。（3）RSV感染Raw264.7细胞24h内,被RSV激活的TLR3信号通路的关键分子TLR3、IRF3、IFN-β转录水平上呈现先增高后降低的趋势,在感染后10-14h是TLR3、IRF3、IFN-β表达的高峰期。（4）通过超高效液相技术分析了金欣口服液主要化学组分,主要包括芥子碱硫氰酸盐、虎杖苷、野黄芩、白藜芦醇、黄芩苷、大黄素-8-0-β-葡萄糖苷、黄芩素、汉黄芩素等。（5）RSV感染能够诱导TLR3/RIG-I信号通路的激活,其中信号通路关键分子TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、IRF3（P-IRF3）在RSV感染初期基因转录水平和蛋白水平表达均显着增高,而在感染后期又呈现显着降低,呈现先升高后降低的趋势。金欣口服液在RSV感染早期能够显着抑制TLR3/RIG-Ⅰ信号通路的激活,显着降低TLR3信号通路关键分子TLR3、RIG-Ⅰ、IPS-Ⅰ、TRAF3、TBK1、IRF3（P-IRF3）的表达,而在感染后期又能促进TLR3信号关键分子表达增高。（6）RSV能够诱导TLR3信号通路负调控因子SOCS1的表达,但随着感染时间延长,SOCS1表达逐渐降低。金欣口服液能够持续抑制SOCS1的表达,减轻SOCS1对TLR3信号通路的抑制效应。（7）RSV能够诱导IFN-β的产生,在RSV感染早期表达量显着增高,在感染后期则表达量显着降低。金欣口服液能够在感染早期抑制IFN-β的过度表达,减轻因细胞因子过度表达引起的炎症损伤；在感染后期金欣口服液又可促进IFN-β的表达,持续维持其抗病毒效应。（8）MyD88基因干扰后,RSV诱导的IRF3表达未受到明显影响,但NF-κB的表达显着降低,金欣口服液干预后未能改变此种改变,因此可认为MyD88基因干扰后对TLR3信号通路正常信号转导未产生影响,但对MyD88依赖型信号转导通路能产生明显的抑制,同时也证实了金欣口服液对MyD88依赖型信号转导通路调控的作用位点应位于MyD88分子的上游。
戴启刚[4]（2013）在《金欣口服液对RSV诱导的TLR7信号转导通路的作用研究》文中研究说明肺炎为小儿时期的常见病,多为支气管肺炎,好发于冬春季节或气候交替之际,是我国住院小儿死亡的第一原因,严重威胁儿童健康,被世界卫生组织列为全球三种重要儿科疾病之一,我国卫生部也将其列为重点防治的小儿四病之一。据统计,肺炎占目前城市医院儿科病区住院病例的25%-50%；而病毒性肺炎是小儿肺炎的常见类型,约占小儿肺炎总数的50%。在引起小儿病毒性肺炎的病原体中又以呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）为主,西医治疗小儿RSV肺炎缺乏有效的治疗手段,而中医药在治疗病毒感染性疾病方面有其独到的优势。导师汪受传教授领衔的课题组完成的临床研究表明,具有开肺化痰解毒活血功效的金欣口服液是治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效方剂。前期实验研究结果表明,金欣口服液有明显抑制RSV的作用,主要通过抑制病毒的膜融合,其作用位点可能是病毒的F蛋白或其受体；可明显减低RSV感染后Hep-2细胞病变程度,对细胞有保护作用；具有诱导单个淋巴细胞产生IL-2、IFN-γ的作用,增强机体抗病毒免疫功能。Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）是重要的模式识别受体（pattern recognition receptors, PRRs）,可以识别不同微生物的病原相关分子模式（pathogen associated molecule pattem, PAMPs）。TLRs在RSV感染过程中发挥着重要的作用,是研究RSV感染的新的方向。导师汪受传教授带领的团队承担的国家自然科学基金项目“金欣口服液对RSV活化的TLRs信号转导通路作用机制研究（81072840）”前期研究成果已表明金欣口服液能调控RSV感染活化诱导的TLR3、TLR4及下游信号分子的表达水平。RSV是单股负链RNA病毒,粘附融合宿主细胞后释放单链RNA,能被位于内体膜上的TLR7特异性识别,通过一系列信号传导途径,引起下游细胞因子的大量分泌,引起系统性炎症反应。鉴于中医药作用的多靶点性,本实验从TLR7及其介导的信号通路入手,探讨RSV感染时金欣口服液抗对TLR7信号转导通路的调控,及与其它TLRs的相关性。目的研究金欣口服液对RSV诱导的TLR7信号传导通路的调控作用,探讨其治疗RSV肺炎的可能免疫学机制。方法体外实验：RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,24h后收集细胞,real-time PCR法测定TLR7及其信号通路关键分子MyD88、NF-κB、IRF7mRNA的表达变化；Western Blot技术检测TLR7、 MyD88、NF-κB、IRF7蛋白表达,激光共聚焦技术检测TLR7在RSV感染RAW264.7细胞中的表达及分布；ELISA法检测细胞上清中TNF-α、IFN-α表达情况；并用TLR7siRNA干扰后检测上述指标,观察金欣口服液对RSV诱导的TLR7传导通路影响及与其它TLRs信号通路的相关性。体内实验：RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液进行干预,并于首次滴鼻后72、144小时,取小鼠肺组织,分别行病理组织切片评价肺部病变情况,real-time PCR法检测肺组织中TLR7、MyD88、NF-κB、IRF7mRNA表达情况,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR7、MyD88、NF-κB、IRF7蛋白表达情况；取小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）, ELISA法检测TNF-α、IFN-α表达情况。结果一、体外实验1.TLR7siRNA转染前（1）RSV感染RAW264.7细胞24h后,TLR7、NF-κB、IRF7mRNA表达明显升高（超过正常组2倍以上,与正常组比较,P<0.01）,对MyD88mRNA的表达能提高,但没超过2倍：金欣口药血清组能明显降低TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达（P<0.01）,对IRF7mRNA的表达下调作用不明显（P>0.05）。（2）RSV感染RAW264.7细胞24h后,TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达量较正常组明显升高（P<0.01）,而IRF7的蛋白表达无明显改变；金欣口服液含药血清组TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达量较RSV感染组明显降低（P<0.01）；对IRF7的蛋白表达无调控作用。（3）RSV感染RAW264.7细胞24h后,细胞培养上清中IFN-α未能检测到；TNF-α表达量明显升高（与正常组比较,P<0.01）。金欣口服液含药血清显着降低TNF-α表达（P<0.01）。2. TLR7siRNA转染后（1） TLR7siRNA转染RAW264.7细胞后,TLR7mRNA的表达量下降46.6%,再用RSV感染,可见TLR7mRNA的表达又有明显增高（超过TLR7siRNA转染组的2倍以上）,表明用筛选出的TLR7siRNA可干扰TLR7mRNA的生成。TLR7信号通路下游信号分子MyD88、NF-κB mRNA的表达也受到抑制,但其抑制率低于TLR7mRNA（分别为26.9%、27.3%）,未成平行抑制关系,表明MyD88、NF-κB mRNA的表达可能还受其它因素的调控,特别是TLRs家族的其它成员。TLR7siRNA转染后IRF7mRNA的表达未受明显影响。（2）金欣口药血清能明显降低转染及RSV感染后的TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达（P<0.01）,对IRF7mRNA的表达下调作用不明显（P>0.05）。（3）RSV感染RAW264.7细胞24h后,TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达量较正常组明显升高（P<0.01）,而IRF7的蛋白表达无明显改变；金欣口服液含药血清组能明显下调TLR7、NF-κB蛋白表达量（P<0.01）,但对MyD88的调控不明显（P>0.05）；对IRF7的蛋白表达无调控作用。（4） TLR7siRNA转染后继以RSV感染RAW264.7细胞24h后,细胞培养上清中IFN-α仍未能检出；TNF-α表达量明显升高（与正常组比较,P<0.01）,金欣口服液含药血清显着降低TNF-α表达（P<0.01）。二、体内试验（1）RSV感染BALB/c小鼠后肺部病理改变主要表现为肺间质性病变,肺泡壁血管扩张充血,水肿增厚,肺泡壁及间质炎性细胞浸润；肺泡腔无明显渗出物；支气管腔内无显着炎性渗出物,上皮细胞无显着变性、坏死。随着感染时间的延长,肺部病变程度逐渐加重。金欣口服液组小鼠肺内炎症均有不同程度减轻,病理评分结果显示治疗组各时间点与RSV感染组相比均有统计学显着性差异。（2）RSV感染BALB/c小鼠72h后,肺组织中TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达显着增高（与正常组比较,P<0.01）,而144h组随着感染时间的延长,TLR7、 MyD88、NF-κB mRNA的表达则下降。金欣口服液组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达较RSV感染组不同程度降低（P<0.01或P<0.05）。RSV感染BALB/c小鼠72、144h后,肺组织中IRF7mRNA表达量与正常组比较无统计学差异（P>0.05）,金欣口服液高剂量组在感染72h能下调IRF7mRNA表达（P<0.05）,金欣口服液高剂量组、等效剂量组在144h能上调IRF7mRNA表达,但无统计学差异（P>0.05）。（3）RSV感染BALB/c小鼠72h后肺组织内TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达量较正常组高（P<0.01或P<0.05）,144h表达下降与正常组无明显差异。金欣口服液组TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达量于72h较RSV感染组不同程度降低（P<0.01或P<0.05）,感染144h金欣口服液组TLR7、MyD88、NF-κB表达量下降较RSV组差异无统计学意义（P>0.05）。RSV感染BALB/c小鼠72h后肺组织内IRF7蛋白表达量较正常组无显着差异（P>0.05）,144h表达较正常有所上升（P>0.05）。金欣口服液组IRF7蛋白表达量于72h较RSV感染组无统计学差异,感染144h金欣口服液组能上调IRF7蛋白表达（P<0.01）。（4）RSV感染BALB/c小鼠72h后,BALF中TNF-α、IFN-α表达量均明显升高（与正常组比较,P<0.01）;144h, BALF中TNF-α、IFN-α下降。72h,金欣口服液组小鼠BALF中TNF-α、IFN-α表达较感染组显着上升,随着感染时间的延长,144h金欣组TNF-α、IFN-α表达明显下降。结论1.金欣口服液能明显减轻RSV感染小鼠的肺部炎症。2.金欣口服液对TLR7信号通路TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达有明显的调控作用,对IRF7的表达在RSV感染早期无明显调控,晚期可上调IRF7的表达。3.金欣口服液能够显着上调RSV感染初期TLR7介导的信号通路下游TNF-α、IFN-α等炎症细胞因子的表达；随着感染时间的延长,金欣口服液能适当下调TNF-α、IFN-α的表达,具有双向动态调节作用。4.金欣口服液是治疗RSV感染的有效药物,其作用是通过调节RSV诱导的TLR7信号通路实现的,主要依赖的是TLR7/MyD88/NF-κB/TNF-α途径,在我们的实验中发现TLR7/MyD88/IRF7/IFN-α途径在RSV感染早期作用不明显。5. TLR7siRNA转染后,TLR7mRNA及蛋白表达明显受抑,但MyD88、 NF-κB mRNA及蛋白的抑制率低于TLR7,表明MyD88、NF-κB的表达还受其它TLRs调控,从而说明TLR7信号通路只是RSV感染后的一个通路,而金欣口服液亦可通过其它通路调控下游信号分子生成,体现了中药复方发挥作用的多靶点效应；TLR7siRNA转染与否对IRF7的表达无明显影响。
孙寒丹[5]（2013）在《金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型相关炎症因子表达的调控作用》文中提出呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Viral, RSV）是近些年来在世界范围内能够引起婴幼儿下呼吸道感染最重要的病毒病原,其所致的肺炎临床症状较重,病死率较高,因此受到高度关注。RSV感染机体后能够使参与细胞免疫的T辅助细胞Th1/Th2的比例失衡,诱导相关细胞因子的表达,造成机体的免疫损害。RSV是Toll样受体（Toll-like receptors）重要的配体,能够诱导TLRs信号转导通路的活化,引起下游诸如IL-6、IL-8和IL-1β等细胞因子的分泌。导师汪受传教授研制的金欣口服液在前期的临床和实验研究中中被证实具有抗RSV感染和调节免疫等作用,其有效单体白藜芦醇亦有抗病毒的作用。因两者拮抗RSV感染的作用机制目前尚不明确,因此,本研究拟从RSV活化诱导的Toll样受体信号转导通路入手,探讨金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型相关炎症因子表达的调控作用,推测其在分子免疫学方面抗RSV肺炎的作用机制。目的：1观察RSV体内外感染模型IL-6、IL-8、IL-1β表达水平,探讨其在免疫学方面的作用机理。2观察金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型IL-6、IL-8、IL-1p表达水平的调控作用,探讨其在免疫学方面抗RSV感染的作用机理。方法：本实验采用实验动物学、细胞培养学、分子免疫学、ELISA法检测BALB/c小鼠肺泡灌洗液IL-1β及hep-2细胞上清IL-6和IL-8的含量变化。实验数据采用Excel和SPSS17.0软件进行统计。结果：1体内实验：RSV感染BALB/c小鼠24h后IL-1β的表达量较之于正常组显着增加（P<0.01）,金欣高预防组和等效预防组均能下调其表达且以等效预防组的下调作用更为明显（P<0.01）；当RSV感染BALB/c小鼠72h后,IL-1β的表达量较之于正常组也显着增加（P<0.05）,但较24h的表达量稍有减少。金欣治疗组下调IL-1p表达的作用,两个高剂量组IL-1β的含量较之于RSV模型组也有所下降,但无统计学意义（P>0.05）；RSV感染BALB/c小鼠144h后IL-1β的表达量较之于24h、72h显着减少,但表达量仍高于正常组,而金欣口服液的两个剂量治疗组则均能下调其表达。2体外实验：①RSV感染Raw264.7细胞24h后上清中检测到IL-1β的表达量极低；②RSV感染hep-2细胞后24h时,RSV感染模型组中IL-6和IL-8的表达量均显着增高（P<0.01）；金欣组IL-6（P>0.05）和IL-8（P<0.01）的表达均低于RSV感染组；白藜芦醇50μmol/L组均能显着下调IL-6（P<0.01）和IL-8（P<0.05）的高表达,25μmol/L组IL-6和IL-8的含量也有所降低,但无统计学意义（P>0.05）。结论：1.金欣口服液能够减轻RSV感染的BALB/c小鼠肺部及全身炎症反应。2.金欣口服液及白藜芦醇均能够下调RSV感染的体内外模型中IL-6、IL-8、IL-1p的高表达,并将其调控在接近于正常范围,由此推测两者可能为拮抗RSV感染的作用机制之一。
程淼[6]（2012）在《雄黄纳米微粒在细胞水平抑制》文中研究说明呼吸道合胞病毒和腺病毒是儿童呼吸道感染的常见病原,这两种病毒具有致病力强,发病率高的特点,常因院内感染引起爆发流行,目前仍缺乏对呼吸道合胞病毒和腺病毒治疗较好的药物。国内外有关于雄黄治疗病毒性疾病的临床报道,尚无雄黄抗病毒的实验研究。本实验选择非阶段性的单链负股RNA病毒-呼吸道合胞病毒（respiratoy syncytialvirus,RSV）和属于双链DNA病毒-腺病毒（Adenovirus,ADV）为研究对象,观察雄黄纳米微粒抗人3型腺病毒（Human Adenovirus-3, HAdV-3）和RSV的作用。同时由于在HAdV-3感染早期,病毒为了最大限度地增殖与传播,抑制感染细胞凋亡,以保证自己能够在细胞凋亡前产生足够数量的子代病毒以及逃避宿主的免疫监视系统。本研究在腺病毒感染早期,通过观察雄黄纳米微粒对PI3-K （phosphatidylinositol3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶）/AKT （v-akt murine thymoma viral oncogene homolog）通路的抑制作用,诱导腺病毒感染细胞凋亡,来探讨雄黄抗病毒的作用机制,揭示雄黄纳米微粒抗腺病毒分子靶点。目的1通过体外实验建立RSV和HAdV-3感染Hep-2的细胞模型,观察雄黄纳米微粒对细胞病变（Cytopathic effect, CPE）的抑制作用,并采用荧光定量RT-PCR和PCR的方法检测雄黄对RSV和HAdV-3病毒基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抑制RSV和HAdV-3核酸复制的作用。2研究雄黄纳米微粒在腺病毒感染早期诱导病毒感染细胞凋亡的机制。通过激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒干预腺病毒感染早期细胞凋亡情况。采用western-blot法观察雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞的AKT、p-AKT、NF-κB p65蛋白表达的影响,同时采用RT-PCR法检测雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞凋亡蛋白Fas L、Bc1-2、bax及p53mRNA基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抑制PI3-K通路诱导腺病毒感染细胞凋亡而起到抗病毒的作用。方法1雄黄纳米微粒对腺病毒及呼吸道合胞病毒复制的影响：采用CPE抑制实验,通过预防给药、治疗给药及直接灭活给药三种方式,在细胞水平上观察雄黄纳米微粒对腺病毒和呼吸道合胞病毒感染Hep-2细胞病变的抑制作用；采用荧光定量PCR和荧光定量RT-PCR的方法观察雄黄纳米微粒对腺病毒和呼吸道合胞病毒基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抗DNA病毒和RNA病毒的作用。2观察雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞活性的影响：分别在腺病毒感染Hep-2细胞的24h、48h、72h和120h时,采用MTT方法观察不同浓度雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞A值的影响。3雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞凋亡的影响：采用Annexin V/PI双染法激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组在腺病毒感染24h时诱导病毒感染早期细胞凋亡的情况。4雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞PI3-K通路的影响：采用western-blot的方法研究雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组在腺病毒感染24h时Hep-2细胞中AKT、 p-AKT、NF-κB p65蛋白表达的水平,探讨雄黄纳米微粒对PI3-K通路的影响。5雄黄纳米微粒对腺病毒感染细胞凋亡调控蛋白FasL、P53、Bc1-2、Bax基因表达的影响：采用实时荧光定量RT-PCR的方法研究雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组,在腺病毒感染24h时细胞凋亡调控蛋白FasL、P53、Bc1-2、Bax mRNA的基因表达。结果1雄黄纳米微粒在预防、治疗及直接灭活三种给药方式下,均可减轻HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞的CPE程度。其中,雄黄纳米微粒抗HAdV-3的半数有效浓度（IC50）分别为0.255μg/mL、0.142μg/mL、0.117μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.55、4.57和5.55；雄黄纳米微粒抑制RSV感染Hep-2细胞病变的半数有效浓度（IC50）分别为0.20μg/mL、0.13μg/mL、0.16μ/mL,治疗指数（TI）分别为3.18、4.99和4.11。雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞CPE抑制作用均存在着量效关系。2荧光定量PCR和RT-PCR检测雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞病毒复制量,结果显示Hep-2细胞对照组无扩增曲线,CT>35,HAdV-3和RSV病原体检测均为阴性；雄黄纳米微粒（加腺病毒）组、利巴韦林（加腺病毒）组和腺病毒模型组扩增曲线的CT值分别为29.30±0.08、33.05±1.29、26.01±0.25,腺病毒病原体检测为阳性。与腺病毒组（66699932±23.85）相比,雄黄纳米微粒（加腺病毒）组的复制量（912435.44±16.57）和利巴韦林（加腺病毒）组的复制量（459124.84±12.82）均降低,具有显着性差异（P<0.05）。雄黄纳米微粒（加呼吸道合胞病毒）组、利巴韦林组（加呼吸道合胞病毒）和呼吸道合胞病毒组扩增曲线的CT值分别为25.58±0.19、27.42±5.74、17.59±0.1,呼吸道合胞病毒病原体检测为阳性。与呼吸道合胞病毒组（70952000±46.14）相比,雄黄纳米微粒（加呼吸道合胞病毒）组的复制量（1123500±20.25）和利巴韦林（加呼吸道合胞病毒）组的复制量（426593.78±49.02）均降低,差异显着（P<O.05）。3通过MTT法和激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒诱导腺病毒感染Hep-2细胞凋亡,结果显示雄黄纳米微粒0.367μg/mL、0.184μg/mL、0.092μg/mL、0.046μg/mL剂量组在HAdV-3感染24h时可诱导HAdV-3感染Hep-2细胞凋亡,同时经激光共聚焦显微镜观察显示雄黄大剂量组的细胞凋亡较小剂量组更明显；当雄黄纳米微粒作用到48h时可减轻HAdV-3感染细胞病变,细胞存活率明显多于腺病毒对照组,其对腺病毒CPE的抑制作用可以持续至120h。4雄黄纳米微粒可通过作用于PI3-K介导的信号通路,降低磷酸化AKT和NF-κB p65蛋白表达的水平,增加促凋亡蛋白P53、FasL、Bax mRNA表达,降低抑凋亡蛋白Bcl-2mRNA表达,说明雄黄纳米微粒可能在腺病毒感染早期诱导感染细胞凋亡,发挥抗病毒的作用。结论1本研究证实了雄黄纳米微粒具有抗腺病毒和呼吸道合胞病毒的作用,填补了雄黄抗病毒实验研究的空白；2雄黄纳米微粒可在腺病毒感染早期通过抑制PI3-K通路,降低AKT的磷酸化,促染早期细胞凋亡,从而起到抑制腺病毒复制的作用。
夏晨[7]（2011）在《金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白介素6、8、12作用的实验研究》文中进行了进一步梳理人呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是婴幼儿呼吸道感染疾病的最重要的病原。RSV感染后可使机体辅助性T细胞1（Thl）和2（Th2）比例失调,释放-系列细胞因子,造成免疫病理损伤。其中IL-6、IL-8、IL-12是肺内重要的细胞因子,同时也是Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）信号转导通路的重要角色。它们参与了RSV感染的发生、发展过程,在促进炎症反应和机体免疫防御中有着重要作用。临床和实验研究表明,金欣口服液有拮抗RSV感染的作用,其作用机制尚未明确,推测金欣口服液可能通过影响细胞因子的表达来发挥其抗病毒作用。本研究在此基础上进行。目的：1.观察在RSV感染中血清IL-6、IL-8和IL-12的水平,探讨它们在RSV感染中的作用；2.观察金欣口服液对RSV感染大鼠血清IL-6、IL-8、IL-12的影响,探讨其抗RSV感染的作用机制。方法：本实验采用细胞培养学、实验动物学、分子免疫学、ELISA（酶标记免疫吸附测定）法检测大鼠体内IL-6、8、12表达量的变化。数据采用SPSS16.0软件进行统计学处理。结果：1.感染RSV后IL-6、IL-8水平均高于正常组（P<0.05）,IL-12水平明显下降（P<0.01）；2.金欣口服液干预后高、中、低剂量组及预先给药组IL-6、IL-8水平较模型组显着降低（P<0.01）,高、中剂量组及预先给药组的IL-12水平显着升高（P<0.01）。3.与利巴韦林组比,金欣口服液高剂量组、预先给药组的IL-6表达量明显降低（P<0.01）；金欣口服液高、中剂量组及预先给药组的IL-12水平明显升高（P<0.01）。4.通过预先给药,IL-6水平低于金欣口服液中、低剂量组（P<0.01）,IL-8水平比高、中、低剂量组均显着降低（P<0.01）,而IL-12含量比余给药组均增加（P<0.01）。结论：1.IL-6、IL-8、IL-12是RSV感染中重要的细胞因子。RSV感染后IL-6、IL-8水平上升,IL-12水平则降低。2.金欣口服液具有拮抗RSV的作用,可降低RSV感染大鼠血清中IL-6、IL-8的表达,上调IL-12的表达。这可能是金欣口服液抗RSV肺炎的机理之一
周娣[8]（2010）在《金欣口服液对RSV肺炎SD幼大鼠血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的影响》文中指出呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是引起婴幼儿毛细支气管炎和肺炎的主要原因,其发病机制仍不甚明确。中医药治疗病毒性肺炎（包括RSV肺炎）,在临床及实验研究中发现均有着一定优势。随着近代实验研究的发展,发现某些病毒性疾病的发生与机体细胞炎症因子之间的平衡失调有关,RSV感染与细胞促炎症因子及抗炎症因子水平的失衡关系亦密切。病毒感染早期,机体可能通过促进局部受染细胞分泌某些细胞因子来调节病毒在宿主细胞内的炎症反应,而病毒则可能通过抑制宿主细胞内某些细胞因子分泌而复制和繁殖。前期体内外实验研究均证实金欣口服液具有拮抗RSV作用,但作用机制尚未明确。推测金欣口服液在RSV感染宿主细胞早期通过调节体内炎症细胞因子水平的释放进而实现抗病毒作用。本研究在此基础上进行。通过检测RSV感染肺炎SD幼大鼠后,血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的变化情况,从分子的角度探讨金欣口服液对机体免疫的调节作用机制。并通过分析金欣口服液对RSV感染肺炎SD幼大鼠血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的影响,探讨RSV感染致肺炎的相关机制。本实验采用细胞培养、实验动物学、ABC-ELISA法等相关的实验技术和方法进行实验的研究。对于实验数据采用SPSS13.0软件进行统计学处理。病毒感染后机体的促炎症细胞因子TNF-α与正常组相比下降,抗炎症细胞因子IL-10的含量与正常组相比上升,有统计学意义（P<0.05）,TNF-α/IL-10的比值较正常值降低。金欣口服液提前用药、高、中、低剂量组,TNF-α的含量与病毒对照组相比均有不同程度的升高,差异有统计学意义（P<0.05）,其中以提前给药组增高最为明显,高剂量组次之。提前给药组、高、中剂量组IL-10含量较病毒对照组增高,差异无统计学意义,与利巴韦林组比较差异有统计学意义（P<0.05）。TNF-α/IL-10的比值与金欣口服液的浓度比例关系不明显,其中以低剂量组最高,高剂量组次之,均低于正常组。经利巴韦林治疗后,TNF-α水平升高,IL-10的含量降低,与病毒对照组之间的差异均有统计学意义（P<0.05）,TNF-α/IL-10的比值恢复正常。RSV感染SD幼大鼠后影响机体的免疫状态,金欣口服液对于免疫系统具有调节作用。TNF-α作为前炎症细胞因子,在RSV肺炎过程中可以通过上调IL-10的含量调节机体的免疫水平,维持免疫的平衡状态。金欣口服液在上调促炎症细胞因子TNF-α的含量的同时促进抗炎症细胞因子IL-10的释放,发挥抗病毒作用。
张沛[9]（2010）在《金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达调节作用的实验研究》文中研究表明病毒性肺炎是小儿肺炎的常见类型,约占小儿肺炎总数的50%。呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial viral,RSV）肺炎是小儿病毒性肺炎中最常见的类型,严重威胁着儿童的身体健康。关于RSV肺炎,现代医学并没有特异的治疗措施,临床上也没有明确有效的RSV疫苗面市。而中医药治疗病毒性肺炎包括RSV肺炎,有着一定优势。Ⅰ型干扰素（IFN）-α/β,在呼吸道病毒感染中起重要的作用,是自然免疫重要的组成部分,能在病毒感染的早期抑制病毒复制。但RSV感染难以诱生干扰素,而且大多会下调IFN的抗病毒反应。临床和实验研究表明,金欣口服液有拮抗RSV感染的作用,但其作用机制尚未明确。推测金欣口服液可能通过上调RSV感染宿主体内IFN-Ⅰ的表达来发挥其抗病毒作用。本研究在此基础上进行。目的：1.探究大鼠RSV肺炎模型的构建。2.检测金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠IFN-Ⅰ表达的调节。方法：本实验采用细胞培养学、实验动物学、分子免疫学、ELISA（酶标记免疫吸附测定）法检测大鼠体内IFN-Ⅰ表达量的变化。数据采用SPSS13软件进行统计学处理。结果：1.RSV感染大鼠渐出现体温升高、活动度下降、呼吸急促、毛乱及偶有咳嗽的临床表现,各感染组大鼠与对照组大鼠比较,体温变化无明显差别。病毒感染对大鼠的一般状况影响不大。给药组与模型组比较,体重差异有显着性意义。2.RSV感染组大鼠肺部病理学切片呈现典型的炎症表现,且肺部可分离出RSV病毒。提示本实验中采用的RSV感染大鼠模型是成功的。3.ELISA法检测：预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α表达量高于模型组（P<0.05）；金欣口服液高、中剂量组IFN-β表达量高于模型组（P<0.05）；预防组、金欣口服液中剂量组和利巴韦林组IFN-β表达量高于空白对照组（P<0.01）；预防组、金欣口服液中剂量组和利巴韦林组IFN-β表达量高于金欣口服液低剂量组（P<0.01）。结论：1.幼大鼠RSV滴鼻可复制出RSV肺炎模型。2.金欣口服液具有拮抗呼吸道合胞病毒的作用。3金欣口服液可上调RSV感染宿主体内Ⅰ型干扰素的表达,从而发挥Ⅰ型干扰素的抗病毒效应。这也是金欣口服液抗RSV感染的机理之一。
胡钰[10]（2009）在《金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒影响细胞早期凋亡的实验研究》文中提出呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus,RSV）是引起婴幼儿毛细支气管炎和肺炎的主要原因,其发病机制仍不甚明确。关于RSV肺炎,现代医学并没有特异的治疗措施,临床上也没有明确有效的RSV疫苗面市。而中医药治疗病毒性肺炎包括RSV肺炎,有着一定优势。某些病毒性疾病的发生与机体细胞凋亡的规律失常有关,RSV感染与细胞凋亡关系密切。病毒感染早期,机体可能通过促进局部受染细胞的凋亡来限制病毒在宿主细胞内的复制,而病毒则可能通过抑制宿主细胞凋亡的发生以利于子代病毒的复制和繁殖。体内外实验研究均证实金欣口服液具有拮抗RSV作用,但作用机制尚未明确。推测金欣口服液在RSV感染宿主细胞早期,通过拮抗RSV抑制细胞凋亡的进程实现抗病毒作用。本研究在此基础上进行。目的:1.检测RSV感染细胞早期（12h、24h）宿主细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达量的影响,探讨RSV感染宿主细胞早期的相关机制。2.检测金欣口服液含药血清对RSV感染早期细胞凋亡率及Bcl-2、Bax表达量的影响,探讨金欣口服液拮抗RSV的相关机制。方法:本实验采用细胞培养、血清药理学、细胞形态学观察、RealTime-PCR、AnnexinⅤ/PI法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率及Bcl-2、Bax表达量的变化。数据采用SPSS13软件进行统计学处理。结论:1.金欣口服液具有拮抗呼吸道合胞病毒作用。2.呼吸道合胞病毒在感染宿主细胞早期可能通过抑制细胞凋亡以利于自身的复制与增殖。3.金欣口服液治疗RSV肺炎,在RSV感染早期,通过逐步下调抑凋亡基因Bcl-2、上调促凋亡基因Bax的表达以拮抗RSV感染宿主细胞早期的抑制细胞凋亡作用,影响进入细胞内病毒的复制增殖过程,从而阻止病毒的扩散,减轻RSV对机体的损伤。
二、清肺口服液在组织培养上对腺病毒3Ⅰ、3Ⅱ型致细胞病变作用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、清肺口服液在组织培养上对腺病毒3Ⅰ、3Ⅱ型致细胞病变作用研究（论文提纲范文）
（1）汪受传治疗肺炎喘嗽用药规律及金欣口服液、黄芩素治疗RSV肺炎的代谢调控机理（论文提纲范文）
| 第一部分 汪受传教授治疗肺炎喘嗽用药规律分析 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1. 概述 |
| 1.1 聚类分析 |
| 1.2 关联规则 |
| 2. 研究对象与方法 |
| 2.1 处方来源于筛选 |
| 2.2 病例诊断标准 |
| 2.3 病案处方纳入及排除标准 |
| 2.4 数据录入及核对 |
| 2.5 数据分析及统计方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 药物使用频率分析 |
| 3.2 常用药物聚类分析 |
| 3.3 药物关联规则分析 |
| 4. 讨论 |
| 第二部分 金欣口服液和黄芩素治疗RSV肺炎的代谢调控机理 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一节 文献综述 |
| 1. 中医学对儿童RSV肺炎的认识 |
| 1.1 病名沿革 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 辨证论治 |
| 1.4 中医药治疗RSV肺炎研究进展 |
| 2. 现代医学对儿童RSV肺炎的认识 |
| 2.1 RSV生物学特征 |
| 2.2 RSV主要致病机理 |
| 2.3 西医对小儿RSV感染治疗的研究进展 |
| 3. 金欣口服液前期研究进展 |
| 3.1 临床研究成果 |
| 3.2 实验研究成果 |
| 4. 黄芩素抗病毒作用研究概述 |
| 4.1 RNA病毒 |
| 4.2 DNA病毒 |
| 5. 代谢组学 |
| 5.1 代谢组学的定义 |
| 5.2 代谢组学研究层次 |
| 5.3 代谢组学的特点 |
| 5.4 代谢组学与其他组学关系 |
| 5.5 代谢组学的质谱技术 |
| 5.6 代谢组学的数据处理与分析 |
| 5.7 代谢组学与肺炎 |
| 5.8 代谢组学与中医药研究 |
| 6. 本课题研究的内容与意义 |
| 6.1 本课题研究的内容 |
| 6.2 本课题研究的意义 |
| 第二节 实验研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 病毒与细胞 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验药物 |
| 1.4 试剂 |
| 1.5 主要仪器设备 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 人喉癌上皮细胞的培养方法 |
| 2.2 呼吸道合胞病毒(RSV)的扩增方法和组织半数感染量(TICD_(50))的测定 |
| 2.3 MTT法测定药物最大无毒浓度 |
| 2.4 体外实验模型的制备方法 |
| 2.5 体外实验分组、药物干预及样本采集 |
| 2.6 细胞蛋白定量(BCA法)测定细胞样本中总蛋白 |
| 2.7 体内实验模型的制备 |
| 2.8 体内实验动物分组、药物干预及样本采集 |
| 2.9 实验样本预处理 |
| 2.10 色谱-质谱联用条件 |
| 2.11 质量轴校正 |
| 2.12 数据采集与分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 RSV的组织培养半数感染量TCID_(50)测定结果 |
| 3.2 黄芩素对Hep2细胞最大无毒浓度测定结果 |
| 3.3 BCA法测定细胞内总蛋白的含量结果 |
| 3.4 金欣口服液和黄芩素对BALB/c小鼠肺组织病变的干预作用 |
| 3.5 金欣口服液对RSV感染导致的代谢紊乱的调节作用 |
| 3.6 黄芩素对RSV感染导致的代谢紊乱的调节作用 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 代谢物及代谢通路分析 |
| 4.2 生物学意义解释及金欣口服液、黄芩素干预RSV感染的作用机制 |
| 第三部分 结语 |
| 1. 结论 |
| 2. 本研究创新之处 |
| 3. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读硕士、博士期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）基于UPLC-MS技术的呼吸道合胞病毒肺炎痰热闭肺证代谢模式及金欣口服液干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1. 中医学对RSV肺炎的认识 |
| 1.1 病名沿革 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 辨证论治 |
| 1.4 中医药治疗RSV肺炎研究进展 |
| 2. 西医学对RSV肺炎的认识 |
| 2.1 RSV生物学特征 |
| 2.2 RSV肺炎致病机理 |
| 2.3 西医治疗RSV肺炎研究进展 |
| 3. 金欣口服液前期研究进展 |
| 3.1 金欣口服液组方依据 |
| 3.2 临床研究成果 |
| 3.3 实验研究成果 |
| 4. 代谢组学研究概述 |
| 4.1 代谢组学简介 |
| 4.2 代谢组学与其他组学的关系 |
| 4.3 代谢组学的分析技术 |
| 4.4 代谢组学的数据预处理与分析 |
| 4.5 代谢组学在中医药学方面的应用 |
| 4.6 代谢组学与肺炎 |
| 5. 本课题的研究内容和意义 |
| 5.1 本课题的研究内容 |
| 5.2 本课题的研究意义 |
| 第二部分 RSV肺炎痰热闭肺证代谢组学研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 诊断标准 |
| 2.2 病例采集及分组 |
| 2.3 试验仪器和试剂 |
| 2.4 样本前处理 |
| 2.5 超高效液相色谱-质谱分析条件 |
| 2.6 数据采集与分析 |
| 2.7 潜在生物标记物及代谢通路的寻找 |
| 3. 研究结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 生化结果 |
| 3.3 UPLC-LTQ/Orbitrap的方法验证 |
| 3.4 血浆代谢轮廓分析和模式识别 |
| 3.5 血浆潜在生物标记物的筛选和鉴定 |
| 3.6 尿液代谢轮廓分析和模式识别 |
| 3.7 尿液潜在生物标记物的筛选和鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 代谢通路分析 |
| 4.2 生物学意义解释 |
| 第三部分 金欣口服液干预RSV肺炎小鼠的代谢组学研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 实验材料 |
| 2.1 病毒 |
| 2.2 细胞 |
| 2.3 动物 |
| 2.4 药物 |
| 2.5 试剂 |
| 2.6 仪器设备 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 Hep-2细胞的培养、RSV的扩增和组织培养半数感染量的测定 |
| 3.2 RSV感染BALB/c小鼠模型的制备 |
| 3.3 实验分组、给药方案及样本采集 |
| 3.4 肺组织形态学分析 |
| 3.5 样本前处理 |
| 3.6 超高效液相色谱-质谱分析条件 |
| 3.7 数据采集与分析 |
| 3.8 潜在生物标记物及代谢通路的寻找 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 RSV对Hep-2细胞组织培养半数感染量的测定结果 |
| 4.2 金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织病变的干预作用 |
| 4.3 UPLC-LTQ/Orbitrap的方法验证 |
| 4.4 血浆代谢轮廓分析和模式识别 |
| 4.5 血浆潜在生物标记物的筛选和鉴定 |
| 4.6 金欣口服液干预对RSV感染小鼠血浆代谢物的影响 |
| 4.7 肺组织代谢轮廓分析和模式识别 |
| 4.8 肺组织潜在生物标记物的筛选和鉴定 |
| 4.9 金欣口服液干预对RSV感染小鼠肺组织代谢物的影响 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 代谢通路分析 |
| 5.2 生物学意义解释及金欣口服液干预机制 |
| 第四部分 结语 |
| 1. 结论 |
| 2. 本研究创新之处 |
| 3. 问题与展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）金欣口服液对RSV诱导的TLR3/RIG-I信号通路的调控作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1. 祖国医学对小儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的认识与研究 |
| 1.1 古代文献对小儿RSV肺炎的认识 |
| 1.2 现代中医药对小儿RSV肺炎的认识与研究 |
| 2. 现代医学对小儿RSV肺炎的研究进展 |
| 2.1 现代医学对小儿RSV感染发病机制的研究进展 |
| 2.2 现代医学对小儿RSV防治的研究进展 |
| 3. 汪受传教授在辨治小儿RSV肺炎的经验 |
| 3.1 小儿RSV肺炎的病因病机认识 |
| 3.2 小儿RSV肺炎的辨治经验 |
| 3.3 金欣口服液的方义 |
| 3.4 金欣口服液前期研究成果 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 病毒 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 动物 |
| 1.4 药物 |
| 1.5 试剂与常用溶液配制 |
| 1.6 仪器与设备 |
| 2. 方法 |
| 2.1 含药血清的制备方法与醇沉处理方法 |
| 2.2 金欣口服液成分分析 |
| 2.3 细胞培养方法 |
| 2.4 呼吸道合胞病毒(RSV)的扩增方法和组织半数感染量(TICD50)的测定 |
| 2.5 体外实验模型的制备方法 |
| 2.6 体内实验模型的制备方法 |
| 2.7 体外实验分组、药物干预方案及样本采集 |
| 2.8 体内实验分组、药物干预方案及标本采集方法 |
| 2.9 MTT法测定药物最大无毒浓度 |
| 2.10 RNA干扰(RNAi)技术方法 |
| 2.11 实时荧光定量PCR法 |
| 2.12 Western blot法 |
| 2.13 细胞免疫荧光染色方法 |
| 2.14 ELISA法 |
| 2.15 肺组织病理 |
| 2.16 数据统计 |
| 3. 结果 |
| 3.1 体外研究 |
| 3.2 体内研究 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. TLR3/RGI-I信号转导通路与本研究的关系 |
| 2. 实验研究内容的讨论 |
| 2.1 金欣口服液抗病毒作用的评价 |
| 2.2 金欣口服液抗炎作用的评价 |
| 2.3 RSV感染Raw264.7细胞后TLR3信号通路关键分子表达趋势 |
| 2.4 金欣口服液对RIG-I信号通路的调控作用 |
| 2.5 金欣口服液对TLR3信号通路的调控作用 |
| 2.6 金欣口服液对TLR3信号通路负调控因子的影响 |
| 2.7 金欣口服液对IFN-β的调控作用 |
| 2.8 MyD88基因干扰的研究 |
| 第四部分 结语 |
| 1. 全文结论 |
| 2. 本研究的创新之处 |
| 3. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）金欣口服液对RSV诱导的TLR7信号转导通路的作用研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1. 中医学对RSV肺炎的认识 |
| 1.1 病名沿革 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 辨证论治 |
| 1.4 导师汪受传教授对肺炎喘嗽的理论创新 |
| 2. 西医学对RSV肺炎的认识 |
| 2.1 RSV的生物学特征 |
| 2.2 RSV感染发病的免疫学机制 |
| 3 研究思路 |
| 第二部分 金欣口服液对RSV感染RAW264.7诱导的TLR7传导通路影响体外实验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 病毒 |
| 1.3 动物 |
| 1.4 药物 |
| 1.5 试剂 |
| 1.6 仪器及设备 |
| 1.7 溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 金欣口服液及其含药血清的制备 |
| 2.2 Hep-2细胞及RAW264.7细胞的培养 |
| 2.3 RSV的扩增、组织培养半数感染量(TCID_(50))及药物最大无毒浓度的测定 |
| 2.4 RSV感染RAW264.7细胞模型的制备 |
| 2.5 实验分组、给药方案及标本的采集 |
| 2.6 实时荧光定量PCR法检测金欣口服液干预后RSV感染RAW264.7细胞TLR7、MyD88、IRF7、NF-KB mRNA的转录水平 |
| 2.7 细胞化学免疫荧光法及免疫印迹法测定金欣口服液干预后RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠肺组织TLR7蛋白表达水平 |
| 2.8 ELISA法检测金欣口服液干预后RSV感染RAW264.7细胞上清TNF-α、IFN-α的表达水平 |
| 2.9 数据统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 RSV对RAW264.7细胞TCID50测定结果 |
| 3.2 金欣口服液含药血清、利巴韦林对RAW264.7细胞最大无毒浓度测定结果 |
| 3.3 金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞TLR7、MyD88、IRF7、NF-κB mRNA的转录水平的调控作用 |
| 3.4 细胞化学免疫荧光法检测金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞TLR7蛋白表达水平的影响 |
| 3.5 金欣口服液对RAW264.7细胞TLR7、MyD88、NF-KB、IRF7蛋白表达的影响 |
| 3.6 金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞上清液中TNF-a、IFN-a含量的影响 |
| 3.7 转染后金欣口服液对RAW264.7细胞TLR7、MyD88、NF-K8、IRF7 mRNA表达的影响 |
| 3.8 转染后金欣口服液对RAW264.7细胞TLR7、MyD88、NF-KB、IRF7蛋白表达的影响 |
| 3.9 转染后金欣口服液对RAW264.7细胞上清液中TNF-α、IFN-α含量的影响 |
| 第三部分 金欣口服液对RSV诱导的TLR7传导通路影响的体内实验研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞、病毒 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 金欣口服液的提取 |
| 1.4 试剂 |
| 1.5 仪器及设备 |
| 1.6 溶液的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组、给药方案及标本的采集 |
| 2.2 指标检测方法 |
| 2.3 数据统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 RSV感染BALB/c小鼠模型的制备及病理评价 |
| 3.2 金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR7、MyD88、IRF7、NF-KB mRNA的转录水平的调控作用 |
| 3.3 金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR7、MyD88、NF-KB、IRF7蛋白表达的调控作用 |
| 3.4 金欣口服液干预后RSV感染BALB/c小鼠BALF中TNF-α、IFN-α的表达水平的变化 |
| 肺组织切片附图 |
| 第四部分 讨论 |
| 第五部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 本文创新处 |
| 3 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型相关炎症因子表达的调控作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 中医学对RSV肺炎的认识 |
| 1.1 病名溯源 |
| 1.2 病因 |
| 1.3 病机 |
| 1.4 现代辨证分型研究 |
| 1.5 治则治法 |
| 1.6 现代中医药抗RSV感染的研究进展 |
| 2 西医学对RSV肺炎的研究进展 |
| 2.1 RSV的生物学特性 |
| 2.2 关于RSV的病原学研究 |
| 2.3 RSV的流行病学研究 |
| 2.4 抗RSV感染的药物 |
| 3 金欣口服液及白藜芦醇抗RSV的研究 |
| 3.1 临床研究及成果 |
| 3.2 实验研究及成果 |
| 3.3 白藜芦醇抗RSV的作用研究 |
| 第二部分 研究思路 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 病毒 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 动物 |
| 1.4 药物 |
| 1.5 试剂及溶液 |
| 1.6 仪器与设备 |
| 2 实验方法与步骤 |
| 2.1 金欣口服液、利巴韦林含药血清制备及白藜芦醇、利巴韦林溶液配制 |
| 2.2 含药血清及药物的最大无毒浓度测定 |
| 2.3 RSV的体外扩增与滴度测定 |
| 2.4 体外实验 |
| 2.5 体内实验 |
| 2.6 hep-2细胞TLR3免疫荧光细胞标本的制备 |
| 2.7 金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型相关炎症因子表达的影响 |
| 3 实验结果 |
| 3.0 金欣口服液对RSV感染Raw264.7细胞IL-1β表达的影响 |
| 3.1 金欣口服液对RSV感染的BALB/c小鼠IL-1β表达的调控作用 |
| 3.2 金欣口服液及白藜芦醇对RSV感染hep-2细胞IL-6和IL-8的调控作用 |
| 3.3 金欣口服液对RSV感染的hep-2细胞TLR3蛋白表达的比较 |
| 3.4 RSV感染后24h、72h及144h时的肺组织病理切片结果 |
| 第四部分 讨论与总结 |
| 1 讨论 |
| 2 总结 |
| 2.1 动物模型的选择 |
| 2.2 金欣口服液及白藜芦醇抗RSV感染的可能的作用机制 |
| 2.3 实验的创新性 |
| 3 不足与展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）雄黄纳米微粒在细胞水平抑制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 雄黄的制备和现代药理作用研究概况 |
| 1 雄黄的制备、表征 |
| 2 雄黄的粒度分析方法 |
| 3 雄黄复方的药代动力学研究 |
| 4 雄黄现代药理作用的研究 |
| 5 雄黄临床治疗病毒感染性疾病 |
| 6 雄黄毒副作用 |
| 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中西医治疗呼吸道合胞病毒和腺病毒感染性疾病的研究进展 |
| 1 中医病毒感染性疾病的认识 |
| 2. 中药抗病毒的实验研究 |
| 3 西药抗腺病毒和呼吸道合胞病毒的研究进展 |
| 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 第一部分 雄黄纳米微粒抗呼吸道合胞病毒和腺病毒的研究 |
| 前言 |
| 实验一 雄黄纳米微粒体外抗HAdV-3和RSV的增殖作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV基因表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 雄黄纳米微粒抑制PI3-K/AKT途径诱导腺病毒感染早期细胞凋亡的研究 |
| 前言 |
| 实验三 雄黄纳米微粒在HAdV-3感染不同时间对Hep-2细胞生存率的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 雄黄纳米微粒对腺病毒感染早期细胞凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白介素6、8、12作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 研究背景 |
| 1. 中医学对肺炎喘嗽的研究进展 |
| 1.1 肺炎喘嗽的病名 |
| 1.2 肺炎喘嗽的病因病机 |
| 1.3 肺炎喘嗽的辨证分型 |
| 1.4 肺炎喘嗽的治疗 |
| 2. 现代医学对RSV肺炎的研究进展 |
| 2.1 病原学研究 |
| 2.2 流行病学研究 |
| 2.3 临床治疗 |
| 3. RSV的实验研究进展 |
| 3.1 IL-6、IL-8和IL-12与RSV肺炎的相关性研究 |
| 3.2 Toll样受体在RSV肺炎中的作用 |
| 3.3 中医药抗RSV的实验研究 |
| 4. 总结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 实验思路 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 实验方法与步骤 |
| 3.1 人喉癌上皮细胞的培养 |
| 3.2 呼吸道合胞病毒的扩增 |
| 3.3 呼吸道合胞病毒组织培养半数感染量 (TCID_50) 的测定 |
| 3.4 RSV感染大鼠造模病毒剂量实验 |
| 3.5 RSV肺炎大鼠造模肺组织病变程度实验 |
| 3.6 金欣口服液对RSV肺炎大鼠血清IL-6、IL-8和IL-12的影响 |
| 4. 统计学方法 |
| 5. 实验结果 |
| 5.1 呼吸道合胞病毒组织培养半数感染量的测定结果 |
| 5.2 各组大鼠一般情况 |
| 5.3 各组大鼠体温、体重及摄食量 |
| 5.4 各组大鼠病理结果 |
| 5.5 各组大鼠血清中IL-6、IL-8、IL-12的水平 |
| 第三部分 总结与讨论 |
| 1. RSV肺炎动物造模 |
| 1.1 动物模型的选择 |
| 1.2 RSV造模方法的选择 |
| 1.3 造模结果分析 |
| 2. 金欣口服液对RSV肺炎的作用分析 |
| 2.1 金欣口服液抗RSV的研究 |
| 2.2 金欣口服液对大鼠一般情况的影响 ) |
| 2.3 金欣口服液对大鼠体重、体温及摄食量的影响 |
| 2.4 金欣口服液作用后的大鼠病理结果分析 ) |
| 2.5 各组大鼠血清IL-6、IL-8、IL-12的表达变化分析 |
| 3. 创新与意义 |
| 4. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 学术成果 |
| 致谢 |
（8）金欣口服液对RSV肺炎SD幼大鼠血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 中医药治疗小儿病毒性肺炎研究现状 |
| 1. 中医文献的研究概述 |
| 1.1 病因病机 |
| 1.2 辨证论治 |
| 1.3 基本方加减治疗 |
| 2. 中医药抗RSV的实验研究进展 |
| 2.1 中医药抗RSV的体外抑制作用 |
| 2.2 体内试验对细胞因子影响 |
| 第二部分 肺炎的现代医学研究 |
| 1. 肺炎的病原学简介 |
| 2. RSV简介 |
| 3. 细胞因子的概述 |
| 4. 机体炎症反应与细胞因子的关系 |
| 4.1 病毒入侵对机体细胞因子的影响 |
| 4.2 促炎症反应细胞因子——肿瘤坏死因子-α的研究进展 |
| 4.3 抗炎症反应细胞因子——白细胞介素-10的研究进展 |
| 5. 展望 |
| 第三部分 金欣口服液治疗RSV肺炎的动物实验研究 |
| 1. 实验思路 |
| 2. 实验材料 |
| 2.1 实验生物 |
| 2.2 实验药物 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 主要药品制备 |
| 3. 具体实验步骤 |
| 3.1 人喉癌上皮细胞的培养 |
| 3.2 RSV的扩增 |
| 3.3 RSV组织培养半数感染量(50percent Tissue Culture Infective Dose)TCID_(50)的测定 |
| 3.4 金欣口服液对RSV肺炎幼大鼠血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的免疫调节作用 |
| 4. 结果 |
| 4.1 TCID50的测定 |
| 4.2 实验观察结果 |
| 4.3 ELISA法检测血清中细胞因子IL-10和TNF-α |
| 讨论 |
| 1. 金欣口服液简介 |
| 2. 金欣口服液试验研究 |
| 2.1 抗病毒作用 |
| 2.2 调节机体免疫功能的作用 |
| 2.3 解热、止咳、化痰作用 |
| 2.4 抑菌作用 |
| 2.5 病理研究 |
| 3. 实验结果分析 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 学术成果 |
| 致谢 |
（9）金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达调节作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 中医文献研究 |
| 1.肺炎喘嗽中医医史文献研究 |
| 1.1 病因病机 |
| 1.2 治则治法 |
| 1.3 选方用药 |
| 2.肺炎喘嗽之现代中医研究 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.2 治疗 |
| 第二部分 现代医学研究 |
| 1.现代医学对RSV肺炎的研究进展 |
| 1.1 病原学研究 |
| 1.2 流行病学研究 |
| 1.3 病理及发病机制 |
| 1.4 对因及对症治疗 |
| 2.中医药抗RSV病毒性的实验研究进展 |
| 2.1 体外实验研究 |
| 2.2 体内实验研究 |
| 3.构建RSV肺炎模型的实验研究进展 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1.实验思路 |
| 2.材料和方法 |
| 3.具体实验步骤 |
| 第四部分 讨论 |
| 1.金欣口服液抗病毒性肺炎研究 |
| 1.1 金欣口服液抗病毒性肺炎研究成果与进展 |
| 1.2 金欣口服液组方药物研究 |
| 2.RSV肺炎动物造模 |
| 3.金欣口服液对RSV肺炎大鼠体内Ⅰ型干扰素的免疫调节 |
| 3.1 实验过程与造模结果分析 |
| 3.2 ELISA检测实验各组大鼠体内Ⅰ型干扰素的表达 |
| 4. 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 学术成果 |
| 致谢 |
（10）金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒影响细胞早期凋亡的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 中医文献研究 |
| 1. 肺炎喘嗽之古代文献记载 |
| 1.1 相关症状记载 |
| 1.2 相关病因病机记载 |
| 1.3 治法方药 |
| 2. 肺炎喘嗽之现代中医研究 |
| 2.1 病因病机及辨证 |
| 2.2 治疗 |
| 第二部分 现代医学研究 |
| 1. 呼吸道合胞病毒入侵机体与细胞凋亡的关系 |
| 1.1 呼吸道合胞病毒入侵机体的原理及途径 |
| 1.2 呼吸道合胞病毒与细胞凋亡 |
| 2. 现代医学对 RSV肺炎的研究进展 |
| 2.1 病原学研究 |
| 2.2 病理改变 |
| 2.3 治疗 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1. 实验思路 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 金欣口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清对细胞最大无毒浓度测定 |
| 3.2 呼吸道合胞病毒组织培养半数感染量的测定 |
| 3.3 倒置显微镜观察各组细胞受病毒攻击后形态改变 |
| 3.4 流式细胞术检测细胞凋亡率 |
| 3.5 流式细胞术检测宿主细胞Bcl-2、Bax表达 |
| 3.6 RealTime-PCR法检测宿主细胞Bcl-2、Bax mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 1. 金欣口服液组方药物研究 |
| 2. 实验方法的选择 |
| 2.1 HELF、HEP-2细胞的使用依据 |
| 2.2 血清药理学研究 |
| 2.3 流式细胞术 |
| 2.4 RealTime-PCR |
| 3. 结论 |
| 4. 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、清肺口服液在组织培养上对腺病毒3Ⅰ、3Ⅱ型致细胞病变作用研究（论文参考文献）
- [1]汪受传治疗肺炎喘嗽用药规律及金欣口服液、黄芩素治疗RSV肺炎的代谢调控机理[D]. 孟欣. 南京中医药大学, 2017(08)
- [2]基于UPLC-MS技术的呼吸道合胞病毒肺炎痰热闭肺证代谢模式及金欣口服液干预研究[D]. 杜丽娜. 南京中医药大学, 2015(11)
- [3]金欣口服液对RSV诱导的TLR3/RIG-I信号通路的调控作用的研究[D]. 陈争光. 南京中医药大学, 2015(11)
- [4]金欣口服液对RSV诱导的TLR7信号转导通路的作用研究[D]. 戴启刚. 南京中医药大学, 2013(05)
- [5]金欣口服液及白藜芦醇对RSV体内外感染模型相关炎症因子表达的调控作用[D]. 孙寒丹. 南京中医药大学, 2013(05)
- [6]雄黄纳米微粒在细胞水平抑制[D]. 程淼. 北京中医药大学, 2012(12)
- [7]金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白介素6、8、12作用的实验研究[D]. 夏晨. 南京中医药大学, 2011(07)
- [8]金欣口服液对RSV肺炎SD幼大鼠血清肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10的影响[D]. 周娣. 南京中医药大学, 2010(04)
- [9]金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达调节作用的实验研究[D]. 张沛. 南京中医药大学, 2010(04)
- [10]金欣口服液拮抗呼吸道合胞病毒影响细胞早期凋亡的实验研究[D]. 胡钰. 南京中医药大学, 2009(05)