一、TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用（论文文献综述）
孙维强[1]（2021）在《脓毒症小鼠miR-146a与巨噬细胞自噬的变化研究》文中提出目的:观察研究miRNA-146a于LPS小鼠脓毒症模型中巨噬细胞的功能变化,探讨脓毒症miR-146a和免疫功能紊乱及自噬的关系;为进一步探索miR-146a对脓毒症巨噬细胞活化、自噬机能的调控作用与分子机制提供初步的实验依据。方法:选择健康雄性BALB/C 6-8周龄小鼠120只,按随机数字表法分为空白对照组、脓毒症实验组,实验前禁食12小时,自由饮水,体内构建LPS脓毒症动物模型小鼠20只（剂量为10mg/KG）,正常对照小鼠20只,观察动物一般情况,绘制7天生存曲线。另取正常小鼠12只为control组,LPS脓毒症动物模型小鼠60只（剂量为10mg/KG）为LPS组,分别于6、12、24、36、48 h处死动物眼眶取血,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-q PCR）检测miR-146a表达;用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定瘤坏死因子-α（TNF-α）,IL-1β水平;通过Western blot检测各组小鼠巨噬细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达自噬水平及NF-κB相关通路蛋白表达水平变化;测定肺组织湿/干质量（W/D）比值,在HE染色光镜下观察各组小鼠肺组织器官的病理学改变,并行病理学损伤评估以及透射电镜下观察各组肺组织自噬小体数目。结果:1.脓毒症组与对照组相比7天生存率明显降低（P<0.05）,24h生存率最低为40%,24h后生存率无明显变化;2.LPS组各时间点肺病理组织学均出现肺组织的损伤。肺泡腔内大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增宽,大量肺泡萎陷结构消失,部分肺泡内可见出血,以LPS组6h、12h及24h时间点的肺组织损伤明显;与对照组比较,LPS组各时间点肺W/D比值均升高（均P<0.05）,24h升高最明显;3.LPS组各时间点IL-1β与对照组相比较均升高,24h升高最明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。LPS组各时间点TNF-α与对照组比较均升高明显,12h最高,差异均有统计学意义（P<0.05）;4.与对照组相比,LPS组miR-146a表达量均明显上调（P<0.05）;在6h、12h及24h呈升高趋势,之后回落,24h表达量最高;LPS组miR-146a表达量与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。5.通过Western blot检测发现,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ结果,LPS组各时间点中随时间逐渐升高而后逐渐降低,24h最高。LPS组小鼠腹腔巨噬细胞中的TRAF蛋白表达水平在6h、12h逐渐增高,之后逐渐降低,LPS组小鼠腹腔巨噬细胞中的NFκB相关蛋白P65在各时间点逐渐升高,24h最高。与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。6.透射电镜观察发现LPS组各时间点肺组织内自噬小体数量明显高于对照组,24h最高,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）.LPS小鼠脓毒症模型中早期出现炎症变化,与NF-κB信号通路的关键蛋白表达一致;（2）.自噬相关蛋白及miR-146a的表达在相应时间点呈升高趋势。结果表明脓毒症自噬的发生与miR-146a的表达可能存在相关性;（3）.LPS脓毒症模型中巨噬细胞可能通过上调miR-146a抑制NF-κB信号通路介导的炎症表达而激活巨噬细胞自噬,对机体产生保护作用。
王佳丽[2]（2020）在《脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应》文中研究指明研究背景和目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种严重危害人类健康的慢性炎症性疾病,其发病率和死亡率呈明显上升趋势,尽管AS形成过程非常复杂,但目前普遍认为从内皮细胞损伤、AS斑块的破裂到血栓形成,炎症反应贯穿了 AS发生发展的全部阶段。血管壁在AS早期表现为急性渗出性炎症,在AS进展期表现为慢性增生性炎症。既往的研究证明,促炎因子白细胞介素（Interleukin,IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和核转录因子-kappa B（Nuclear factor kappa B,NF-κB）在AS的发生发展及其转归中发挥关键作用。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,是细菌死亡溶解后,从细菌胞壁中释放出来的重要免疫调节分子,所以又称内毒素（Endotoxin）。吸收外源性脂多糖导致血管内皮细胞损伤,引起促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和核转录因子NF-κB的表达升高,从而诱导机体的炎症反应。尽管众多研究表明LPS可诱导IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的表达,但其具体机制仍不清楚,还有待进一步研究。干扰素刺激基因（IFN stimulated genes,ISGs）共有 4 个成员:IFIT1/ISG56,IFIT2/ISG54,IFIT3/ISG60 和 IFIT5/ISG5,其中 ISG56 又称为 IFIT1（Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1）基因,人类 IFIT1 基因定位于10q23.31,IFIT1诱导蛋白为胞浆蛋白,正常生理状态时,绝大多数细胞不表达IFIT1,但干扰素、病毒感染或LPS可以诱导其转录。研究发现IFIT1 mRNA水平在M1极化的巨噬细胞中明显上调,IFIT1在AS小鼠主动脉窦和头臂动脉切片的巨噬细胞亚群中高表达,说明IFIT1可能与炎症反应有关。但是IFIT1是否参与内皮细胞炎症反应,及其相关机制仍需要进一步探索。研究材料与方法:1.LPS对人脐静脉内皮细胞IFIT1的影响使用0,250,500,1000ng/mL四个浓度梯度的LPS处理人脐静脉内皮细胞,24h后,提取mRNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）和 western blotting（WB）检测IFIT1 mRNA和蛋白的表达水平。此外,为研究LPS处理人脐静脉内皮细胞不同时间对IFIT1表达的影响,分别使用1000ng/mL的LPS处理内皮细胞0,6,12,24h后,提取mRNA和总蛋白,采用qRT-PCR和WB检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平。2.构建IFIT1过表达的人脐静脉内皮细胞模型构建过表达IFIT1的质粒以及阴性对照质粒载体,转染人脐静脉内皮细胞后,分别通过qRT-PCR技术和WB检测IFIT1的表达情况,验证IFIT1过表达效率;加或不加LPS处理24h后,用qRT-PCR和WB检测IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。3.构建IFIT1敲减的人脐静脉内皮细胞模型构建特异靶向IFIT1的siRNA以及阴性对照siRNA载体,转染人脐静脉内皮细胞后,分别通过qRT-PCR技术和WB检测IFIT1的表达情况,验证IFIT1干扰效率;加或不加LPS处理24h后,用qRT-PCR和WB检测IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。研究结果:1.使用0,250,500,1000ng/mL四个浓度梯度的LPS处理人脐静脉内皮细胞24h后,通过qRT-PCR和western blotting检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平,结果发现LPS可浓度依赖性上调IFIT1的表达,且1000ng/mL时效果较明显。此外,用1000ng/mL的LPS分别处理人脐静脉内皮细胞0,6,12,24h后,通过qRT-PCR和WB检测IFIT1的mRNA和蛋白表达水平,结果发现LPS可呈时间依赖性上调人脐静脉内皮细胞中IFIT1 mRNA和蛋白的表达水平。2.对转染IFIT1过表达的质粒以及阴性对照质粒载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量进行qRT-PCR和WB检测,结果发现转染IFIT1过表达质粒载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量明显高于对照细胞株（P<0.05）;使用LPS处理已成功构建的过表达IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型,通过qRT-PCR 和 WB 检测 IFIT1、IL-1β、IL-6、TNF-α 和 NF-κB 的 mRNA 和蛋白表达水平,结果发现过表达IFIT1可上调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白的表达水平,且发现LPS处理过表达IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型可进一步上调上述炎性因子和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平。3.对转染IFIT1小干扰RNA载体以及阴性对照载体的人脐静脉内皮细胞中IFIT1的表达量进行qRT-PCR和WB检测,结果发现干扰细胞株中IFIT1的表达量明显低于对照细胞株（P<0.05）,表明敲减IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型已成功构建。使用LPS处理已成功构建的敲减IFIT1的人脐静脉内皮细胞模型,通过qRT-PCR和WB检测IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平,结果发现敲减IFIT1可下调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的mRNA和蛋白的表达水平,且可抑制LPS诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的高表达。结论:IFIT1在动脉粥样斑块组织中的表达明显升高;LPS可以上调IFIT1的表达,并诱导人脐静脉内皮细胞IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的表达;IFIT1通过上调IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB的水平调节细胞的炎症反应,进而促进AS的发生发展。因此,针对IFIT1的干预措施可能有助于减轻与AS相关的炎症反应。
张颢[3]（2020）在《调节转录抑制因子BCL6的分子功能对内毒素血症的干预作用及机制研究》文中进行了进一步梳理背景:体外循环下心内直视术可导致循环内毒素水平升高,引起内毒素血症,极易诱发机体产生全身性炎症应答综合症,严重威胁患者的预后。原癌基因B细胞淋巴瘤因子6（B cell lymphoma factor 6,BCL6）同时也是一种转录抑制因子,分布广泛,功能多样。在弥漫大B淋巴瘤中,BCL6的分子功能以及其BTB结构域抑制剂FX1的作用和机制已经得到较为详尽的阐释,但是在内毒素血症中,未见相关报道。目的:探讨在小鼠内毒素血症模型中BCL6的分子功能以及其抑制剂的作用和分子机制,为体外循环下心内直视术后内毒素血症的防治寻找可能的用药参考。方法:一、体内动物实验1.分组构建LPS诱导的小鼠内毒素血症模型*DMSO组:10只C57小鼠作为阴性对照,接受单纯DMSO腹腔注射后再进行单纯PBS缓冲液腹腔注射;*DMSO+LPS组:10只C57小鼠作为阳性对照,制作C57小鼠内毒素血症模型之前接受单纯DMSO腹腔注射;*FX1+LPS组:10只C57小鼠作为实验组,制作C57小鼠内毒素血症模型之前接受DMSO+FX1（FX1溶解于DMSO）腹腔注射。2.观察FX1干预后对小鼠内毒素血症模型生存状态的影响记录所有组别小鼠的存活时间,绘制生存曲线,用石蜡切片和染色评估局部组织损伤情况。3.FX1干预后对小鼠内毒素血症模型中促炎因子表达的影响酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中促炎因子的表达水平。4.FX1干预后对小鼠内毒素血症模型中巨噬细胞状态的影响免疫组化检测重要脏器中巨噬细胞浸润程度,流式细胞术检测巨噬细胞的趋化状态二、体外细胞实验1.FX1干预后对巨噬细胞炎症反应的影响通过实时定量PCR和ELISA检测体外环境下FX1作用后对巨噬细胞炎症应答的影响。2.敲低BCL6对于FX1干预后的巨噬细胞炎症反应的影响通过腺病毒转染敲低BCL6,再使用实时定量PCR检测FX1干预后的巨噬细胞炎症应答的程度。3.FX1干预后对NF-κB转录活性的影响通过双荧光素酶报告基因试验检测FX1作用后的巨噬细胞NF-κB转录活性的变化。4.FX1干预后对巨噬细胞活化后MAPK和NF-κB信号通路的影响。通过western blot检测FX1干预后的巨噬细胞中MAPK和NF-κB信号通路的变化。5.FX1干预后对BCL6与促炎靶基因启动子结合的影响通过染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP）检测BCL6与促炎靶基因启动子结合程度。结果:体内实验:1.BCL6抑制剂FX1的干预可以显着提高小鼠内毒素血症模型的生存率,单独应用不会对C57小鼠产生明显毒性;2.FX1的干预能够明显降低小鼠内毒素血症模型外周血中IL-1β、IL-6、MCP-1三种促炎因子的水平;3.FX1的干预可以有效减轻小鼠内毒素血症模型肺和肝脏中的巨噬细胞浸润以及带来的免疫损伤;4.FX1虽然没有明显改变小鼠内毒素血症模型中腹腔巨噬细胞的分群,但是能够有效抑制部分腹腔巨噬细胞的活化。体外实验:1.巨噬细胞的炎症反应启动后,BCL6的表达逐渐增加,BCL6抑制剂FX1并不改变BCL6及其共抑制因子的表达,也不影响巨噬细胞的活性;2.以FX1为代表BCL6 BTB结构域抑制剂能够明显抑制巨噬细胞的炎症反应,且其抑炎作用依赖于BCL6的表达;3.FX1能够明显增强巨噬细胞中BCL6对于NF-κB转录活性的直接抑制作用。4.FX1能够抑制巨噬细胞活化后MAPK和NF-κB信号通路的激活。5.FX1能够促进BCL6对促炎靶基因启动子的结合。结论:1.应用BCL6 BTB结构域抑制剂FX1能够显着提高内毒素血症模型小鼠的生存率,并有效抑制巨噬细胞的炎症反应。2.BCL6参与巨噬细胞的炎症反应,FX1对巨噬细胞的作用靶点确实是BCL6的BTB结构域。3.FX1在不影响BCL6及其转录共抑制因子的正常表达的情况下,通过调节BCL6的分子功能:（1）增强了BCL6对于MAPK信号通路和NF-κB的信号通路的抑制作用;（2）促进BCL6对NF-κB的转录活性的直接抑制效果;（3）提高了C末端锌指结构与促炎靶基因启动子的结合力,实现对巨噬细胞的炎症反应的抑制作用。
胡育铭[4]（2020）在《TLR4/NF-κB通路促进大鼠脊髓小胶质细胞活化和炎症反应参与神经根性疼痛的作用及机制》文中指出腰椎间盘突出症（lumbar disc herniation,LDH）是临床常见疾病,也是神经根性疼痛（radicular pain,RP）的主要病因。主要表现为长期的痛觉过敏（hyperalgesia）,痛觉超敏（allodynia）和自发性疼痛。此病发病率极高、覆盖人群广泛、患者易忽视病情导致长期慢性的神经根性疼痛,对人类正常的生产生活将产生巨大的不良影响,并形成相应的经济压力,影响身心健康,因此成为一个需要立即谨慎对待的社会经济问题。进一步分析且探究LDH诱导的神经根性疼痛的缘由与体系拥有推广的巨大临床价值。多年来,尽管国内外已经进行了大量研究,但RP的机制仍然有待明晰。Toll样受体（TLRs）是模式识别受体家族中（PRR）极为关键的组成部分。近些年来的免疫学文献报道发现TLRs不仅在先天性免疫中发挥着极其关键的作用,TLRs还可较好地协调获得性免疫。激活后的TLR4能够利用MAPK/NF-κB和NF-κB/IRF3等信号转导方式,表达各种炎性细胞组织从而出现炎症。TLR4在中枢神经系统（central nervous system,CNS）中的神经元、小胶质细胞（microglia,MG）等相关细胞中都有较多的表达,而表达最显着的是在MG中。参与先天免疫应答的TLR4是一种跨膜蛋白富含亮氨酸的重复结构域和细胞质信号结构域。与内源性或外源性配体结合,TLR4可能通过激活NF-κB或p38诱导促炎性细胞因子释放。据报道,TLR4拮抗剂可减轻神经损伤引起的痛觉过敏或其辅助因子CD14导致的遗传缺陷胶质细胞活化和炎性疼痛。然而,TLR4在LDH引起的神经根性疼痛尚不清楚。本研究的目的是明确TLR4/NF-κB通路在神经根性疼痛中的作用,大鼠LDH模型的建立及脊髓小胶质细胞活化机制和随后的炎症反应的探讨。小胶质细胞作为CNS固有的免疫效应细胞,数量在CNS中尽管只占了大概十个百分点,然而其在生理或病理情况下调节CNS,免疫反应中拥有巨大的效果。当前的分析证实了,在普通人CNS内TLR4在脑与脊髓的血管内皮细胞、平滑肌细胞等各种组织中都比较活跃,同时在MG中的表现最为活跃。TLR4/NF-κB信号路径在CNS损伤中起到了十分巨大的效果,而MG为损伤介质的重要出处。在组织损伤时放出的内源性配体导致的过度炎症反应对神经系统的恢复将产生极大的不良影响。不仅会生成促炎症细胞组织与趋化组织,被激活的MG也能生成各种自由基,包括氧自由基,进而对神经细胞带来不良影响。小胶质细胞中的TLR4在内毒素的影响下将带来活性氧,使得上皮细胞与内皮细胞开始死亡。LDH引起的慢性疼痛模型中,MG是如何激活的?激活的MG又如何引起慢性疼痛?具体机制如何?还值得进行深入研究。本研究的目的是:1.证实TLR4/NF-κB（P65）通路在大鼠腰椎间盘突出诱导的神经根性疼痛中的作用;2.探求TLR4/NF-κB介导的小胶质细胞的激活与脊髓炎症反应在神经根性疼痛中的关联及机制。第一章脊髓TLR4/NF-κB通路的活化是LDH模型大鼠慢性疼痛产生的重要原因本研究用自体髓核（nucleus pulposus,NP）移植方法复制大鼠LDH模型。术后3-21d分别检测手术同侧和对侧后肢机械性撤足阈值（Paw withdraw threshold,PWT）和热撤足潜伏期（Paw withdraw latency,PWL）。发现:⑴与假手术组相比,NP植入大鼠表现为爪子退缩阈值（PWT）和爪子退缩潜伏期阈值（PWL）明显降低,而对侧后肢的PWT和PWL均无明显差异。这表明NP移植可引起单侧的机械性痛觉过敏和热痛觉超敏。运用western blotting方法和免疫荧光方法检测假手术组和NP移植（3d,7d,14d,21d）组大鼠同侧和对侧脊髓背角TLR4和p-p65的表达和细胞学定位。⑴western blotting检测发现,与假手术组相比,NP移植后3-21d同侧脊髓背角TLR4和p-p65的表达明显增加,但是对侧脊髓背角TLR4和p-p65的表达无明显差异。⑵免疫荧光双染结果发现脊髓背角TLR4主要存在于小胶质细胞,而不是在星形胶质细胞和神经元中。为了进一步证实TLR4/NF-κB通路的激活是慢性疼痛产生的原因,我们检测TLR4拮抗剂TAK242对脊髓p-p65表达的影响。结果表明:TLR4拮抗剂TAK242明显降低脊髓p-p65的表达,但对TLR4表达无影响。TLR4抑制剂TAK242和NF-κB抑制剂PDTC能有效减轻疼痛行为,抑制脊髓小胶质细胞的激活,减少脊髓炎性反应。以上结果提示脊髓TLR4/NF-κB通路的活化是LDH模型大鼠慢性疼痛产生的重要原因。第二章TLR4/NF-κB通路通过激活脊髓小胶质细胞并促进致炎细胞因子的表达引起RP由于TLR4主要存在于脊髓背角小胶质细胞,因此我们推断TLR4/NF-κB通路可能通过影响小胶质细胞的激活和功能,如致炎细胞因子的释放,从而引起慢性疼痛。结果表明:⑴ELISA检测发现,与假手术组相比,LDH大鼠脊髓中IL-1β、IL-6、TNF-α表达增加,IL-10表达降低。与LDH组相比,TAK242和PDTC组大鼠脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达下降,IL-10表达上升。大量文献已经证实IL-1β、IL-6、TNF-α均可引起中枢敏感化和慢性疼痛。因此我们认为:NP移植后,脊髓背角TLR4/NF-κB通路的激活引起慢性疼痛的机制与促进小胶质细胞活化和致炎细胞因子释放有关。结论:1.NP移植引起大鼠同侧后肢机械性痛觉过敏和热痛觉超敏。2.脊髓背角TLR4/NF-κB通路活化是慢性疼痛产生的重要原因。3.脊髓TLR4/NF-κB通路通过促进脊髓小胶质细胞的激活和炎症反应参与神经根性疼痛,靶向这一途径可能有助于缓解神经根性疼痛。
贺香勤[5]（2019）在《高迁移率家族蛋白新成员HMGXB4对小鼠全身性炎症的影响及机制研究》文中研究说明研究背景与研究目的:败血症,又称脓毒症,是一种严重的可能危及生命的全身性炎症反应,其致病原因主要由感染或者组织损伤引起的全身性炎症应答综合征,可导致多器官组织损伤,甚至可因器官衰竭而导致死亡。败血症目前仍然是医院重症监护病房中最常见的死亡原因,败血症的预防与治疗依然是当前社会的巨大公共卫生负担。高迁移率（HMG-Box）蛋白家族是一类细胞核蛋白,具有独特的DNA结合域HMG-Box,与非B型DNA结构的亲和力高,通过弯曲,扭结和展开来扭曲DNA,具有维持染色质结构,DNA修复,转录调控,或者促进核糖体的生物合成等作用。然而,1999年研究者意外的发现HMGB1在全身性炎症反应中可以从细胞核中分泌到细胞外,并作为一种促炎细胞因子介导炎症反应。在败血症期间,阻止HMGB1的分泌或者用HMGB1特异性抗体靶向血液中HMGB1,可以显着提高致死性败血症的生存率。现有文献表明,高迁移率蛋白家族中的多个成员参与多种因素介导的炎症反应。HMGXB4是我们首次在哺乳动物中克隆的该家族的新成员,其是否参与炎症反应尚不清楚。本文旨在探讨Hmgxb4基因在全身性炎症诱导的败血症中的作用及其分子机制,从而为寻找治疗炎症性败血症的新靶点提供实验依据。实验方法:1.LPS刺激对小鼠巨噬细胞Hmgxb4表达的影响:1)提取WT小鼠的腹腔巨噬细胞,用不同剂量的LPS刺激巨噬细胞或者用100 ng/ml LPS刺激巨噬细胞不同的时间点,提取总RNA和总蛋白通过q RT-PCR和Western blot实验检测LPS刺激巨噬细胞对Hmgxb4表达的影响;2)用免疫荧光染色法检测LPS刺激巨噬细胞诱导HMGXB4蛋白表达的细胞定位;3)细胞质与细胞核蛋白分离法进一步分析HMGXB4蛋白的细胞定位。2.全身性敲除Hmgxb4基因小鼠及其炎症性败血症模型的建立与表型分析:1)构建全身性Hmgxb4基因敲除小鼠及其特征分析;2)利用野生型或全身性Hmgxb4基因敲除鼠制备内毒素（LPS）或多微生物感染（CLP）诱导的小鼠败血症模型,检测下述指标:a.检测小鼠的生存曲线;b.HE染色分析小鼠肺和肾组织的损伤程度;c.ELISA法分析小鼠血清促炎症细胞因子的含量;d.TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡;e.肺组织免疫荧光染色检测肺组织中的巨噬细胞浸润情况;f.尾静脉注射EBD检测小鼠肺血管的通透性。3.全身性敲除Hmgxb4基因对炎症所致小鼠败血症的保护作用及其机制分析:1)RNAseq鉴定LPS刺激诱导Hmgxb4基因缺失巨噬细胞的基因差异性表达;2)结合RNAseq和ENCODE数据库中HMGXB4 Ch IP-seq数据鉴定HMGXB4直接调控的潜在靶基因;3)采用q RT-PCR和Western blot技术验证巨噬细胞缺失HMGXB4对潜在的靶基因Nos2的转录调控及其生物学功能分析;4)利用双荧光素酶报告质粒分析HMGXB4对靶基因Nos2启动子的转录调控作用;5)利用腹腔注射高剂量LPS（20 mg/kg）诱导WT和Hmgxb4基因缺失小鼠的急性肺损伤模型,并用q RT-PCR和Western blot验证HMGXB4对靶基因Nos2的转录调控;6)在WT和Hmgxb4基因缺失小鼠中腹腔注射LPS诱导全身性炎症反应,用NOS2抑制剂1400W抑制NOS2活性,尾静脉注射EBD检测小鼠肺血管的通透性。实验结果:1.LPS介导的巨噬细胞激活可诱导核蛋白HMGXB4的转录与表达:1)q RT-PCR和Western blot结果显示,LPS以时间与剂量依赖性方式诱导腹腔巨噬细胞Hmgxb4的转录与表达;2)免疫荧光染色及细胞质与细胞核蛋白分离结果显示,HMGXB4是腹腔巨噬细胞的一个核蛋白,LPS可诱导其表达,且定位在核内。2.敲除Hmgxb4基因显着改善系统性炎症反应导致的小鼠组织损伤和致死率:1)我们首先构建了Hmgxb4基因全身性敲除小鼠,结果显示敲除Hmgxb4基因对小鼠的发育与繁殖没有明显的影响;2)敲除Hmgxb4基因可以显着延长LPS或多微生物感染（CLP）诱导的致死性败血症的小鼠生存时间;3)HE染色结果显示,敲除Hmgxb4基因可以明显保护LPS诱导的急性肺和肾组织损伤;4)ELISA结果显示,敲除Hmgxb4基因对经典的促炎细胞因子分泌没有影响;5)TUNEL染色结果显示,敲除Hmgxb4基因可明显减少LPS诱导小鼠急性肺损伤的细胞凋亡;6)LGALS3（Mac2）免疫荧光染色显示,敲除Hmgxb4基因显着减少LPS诱导小鼠急性肺损伤时的巨噬细胞浸润;7)EBD结果显示,敲除Hmgxb4基因可以明显保护全身性炎症诱导的肺血管通透性。3.敲除Hmgxb4基因通过抑制LPS诱导的NOS2表达及NO产生保护LPS诱导的全身性炎症引起的肺组织损伤:1)RNA-seq结果分析显示,HMGXB4缺失可改变LPS诱导的巨噬细胞的基因表达;2)结合RNA-seq和ENCODE数据库中HMGXB4 Ch IP-seq数据鉴定Nos2基因是HMGXB4直接调控的一个潜在靶基因;3)q RT-PCR和Western blot结果显示,在体外巨噬细胞中Hmgxb4基因缺失可抑制LPS诱导的Nos2基因的转录与表达,同时减少NO的产生;4)双荧光素酶报告实验结果显示HMGXB4可以反式激活Nos2基因启动子上的增强子活性,从而调控Nos2基因的转录与表达;5)q RT-PCR和Western blot结果显示,在LPS诱导的急性肺损伤组织中,Hmgxb4基因缺失可抑制LPS诱导的Nos2基因的表达,改善肺部组织炎症;6)在LPS诱导的全身性炎症反应中,注射NOS2抑制剂1400W,与Hmgxb4基因缺失类似,可以改善全身性炎症诱导的肺血管通透性。结论:1.LPS刺激可促进小鼠腹腔巨噬细胞的HMGXB4表达,且定位在细胞核中;HMGXB4可明显调节LPS诱导的小鼠巨噬细胞的基因表达谱;HMGXB4可与Nos2基因启动子上的增强子区域结合,并以反式激活方式调控Nos2基因的转录表达;2.全身性敲除Hmgxb4基因对全身性炎症诱导的器官损伤及生存率具有明显的保护作用,其机制与Hmgxb4缺失抑制LPS诱导的巨噬细胞NOS2表达和NO产生有关。
顾海燕[6]（2019）在《tmTNF-α正向信号在内毒素休克中的作用及其机制》文中进行了进一步梳理脓毒症是由机体感染引起的全身炎症性反应综合征（systemic inflammation response syndrome,SIRS）。过度的炎症反应被认为在脓毒症的发生发展中起着至关重要的作用。TNF-α是一种重要的炎性因子,它以两种形式存在:跨膜TNF-α（tmTNF-α）和分泌型TNF-α（sTNF-α）。越来越多的证据表明sTNF-α在内毒素休克中发挥重要作用,tmTNF-α在内毒素休克中可能与sTNF-α发挥不同的作用。tmTNF-α既可以作为配体通过正向信号介导靶细胞的生物学效应,也可作为受体通过反向信号介导tmTNF-α表达细胞的生物学功能。本研究旨在探讨tmTNF-α正向信号对内毒素休克的影响及其分子机制,为tmTNF-α抗体在临床休克中的应用提供理论依据。主要结果如下:一、tmTNF-α Ab对不同LPS致死率的保护作用1.tmTNF-α抗体对100%LPS致死剂量的保护作用:100%LPS致死剂量时,tmTNF-α抗体可以明显提高C57BL/6小鼠LPS所致内毒素休克的生存率（45%）,延迟死亡时间,商品化TNF-α中和抗体Infliximab无明显作用。2.tmTNF-α抗体对50%LPS致死剂量的保护作用:50%LPS致死剂量时,商品化TNF-α中和抗体Infliximab可以提高LPS所致内毒素休克的生存率达66.6%,tmTNF-α抗体也可以明显提高C57BL/6小鼠LPS所致内毒素休克的生存率达80%。二、tmTNF-α正向信号诱导RAW264.7巨噬细胞抵抗LPS1.构建稳定转染NIH3T3-vector和NIH3T3-wtTNF-α稳转细胞株用小鼠wtTNF-α的逆转录病毒感染NIH3T3细胞,流式结果显示:NIH3T3-wtTNF-α细胞膜表面tmTNF-α表达率高达70%以上,该细胞膜表面tmTNF-α作为外源性tmTNF-α的来源,用以研究其正向信号。2.tmTNF-α正向信号对LPS诱导炎症因子产生的影响2.1.tmTNF-α正向信号抑制LPS诱导Raw264.7产生IL-1β和IL-6:用4%多聚甲醛固定的NIH3T3-wtTNF-α和NIH3T3-vector细胞分别与Raw264.7以10:1 比例预先培养 30 min 后加入 100 ng/ml LPS 刺激,Real-time PCR 和 ELISA结果显示tmTNF-α正向信号可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β和IL-6的基因转录,同时减少IL-1 β和IL-6分泌。2.2.tmTNF-α正向信号抑制LPS诱导Raw264.7产生NO:用4%多聚甲醛固定的NIH3T3-wtTNF-α和NIH3T3-vector细胞分别与Raw264.7以10:1比例预先培养30 min后加入100 ng/ml LPS刺激,结果显示外源性tmTNF-α可以明显抑制LPS诱导的iNOS的基因转录及NO的产生。2.3.tmTNF-α正向信号对LPS诱导Raw264.7产生抑炎细胞因子IL-10无影响:用4%多聚甲醛固定的NIH3T3-wtTNF-α和NIH3T3-vector细胞分别与Raw264.7以10:1比例预先培养30 min后加入100 ng/ml LPS刺激,结果显示外源性tmTNF-α对LPS诱导的IL-10的基因转录及蛋白分泌均无影响。3.tmTNF-α正向信号对LPS/TLR4信号通路的影响3.1.tmTNF-α正向信号抑制LPS活化NF-κB:LPS刺激Raw264.7细胞30 min后导致IκB-α显着减少。预先给予外源性tmTNF-α可以显着的抑制LPS诱导的IκB-α降解。3.2.tmTNF-α正向信号抑制LPS活化MAPK:LPS刺激Raw264.7细胞30 min后导致ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化,预先给予外源性tmTNF-α可以显着降低LPS诱导上述MAPK的磷酸化水平。三、TNFR2介导tmTNF-α的抑炎作用1.缺失TNFR2可完全阻断tmTNF-α正向信号抑制LPS诱导BMDM炎性因子基因转录:用LPS分别刺激来自野生型、TNFR1KO和TNFR2KO小鼠的BMDM 4 h,Real-time PCR结果显示,预先30 min给予外源性tmTNF-α可抑制LPS诱导野生型和TNFR1KO BMDM细胞的IL-1β、IL-6和iNOS的基因转录;但是,对于LPS诱导TNFR2KO BMDM细胞的IL-1β、IL-6和iNOS的基因转录则无影响,提示缺失TNFR2可解除tmTNF-α的抑制作用。2.缺失TNFR2可完全阻断tmTNF-α正向信号抑制LPS诱导BMDM炎性因子分泌:用LPS分别刺激来自野生型、TNFR1KO和TNFR2KO小鼠的BMDM 10 h,结果显示,预先30 min给予外源性tmTNF-α可抑制LPS诱导野生型和TNFR1KO BMDM细胞的IL-1β、IL-6和NO的分泌;但是,对于LPS诱导TNFR2KO BMDM细胞的IL-1β、IL-6和NO的产生则无影响,提示缺失TNFR2可完全封闭tmTNF-α的抑制作用。3.缺失TNFR2可完全阻断tmTNF-α正向信号抑制LPS诱导BMDM的NF-κB和MAPK的活化:用LPS分别刺激来自野生型、TNFR1KO和TNFR2KO小鼠的BMDM 30 min,结果显示,预先30 min给予外源性tmTNF-α可抑制LPS诱导野生型和TNFR1KO BMDM细胞的IκB-α降解和ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化,但是,对LPS诱导TNFR2KO BMDM细胞的NF-κB和MAPK的活化则无影响,提示缺失TNFR2可完全消除tmTNF-α的抑制作用。四、tmTNF-α正向信号对LPS/TLR4通路负性调控分子的影响1.tmTNF-α正向信号对LPS/TLR4通路负性调控分子mRNA水平的影响:LPS刺激Raw264.7细胞4 h后可诱导A20和MCPIP1 mRNA的转录,却明显降低Triad3A mRNA的水平;预先给予外源性tmTNF-α可显着促进LPS诱导的A20和MCPIP1基因转录,解除LPS对Triad3A的抑制作用,并使之基因转录增强。2.tmTNF-α正向信号对MCPIP1蛋白水平的影响:Western blot显示LPS刺激3 h后MCPIP1表达明显升高,给予外源性tmTNF-α干预后MCPIP1的表达进一步升高。3.siRNA阻断MCPIP1的表达可以完全解除tmTNF-α正向信号的抑制炎症作用:Realtime PCR结果显示用siRNA沉默MCPIP1可完全阻断外源性tmTNF-α对LPS诱导Raw264.7细胞IL-1β、IL-6和iNOS mRNA转录的抑制作用。五、TNFR2基因敲除对tmTNF-α抗体抵抗LPS诱导内毒素休克的影响上述结果证实外源性tmTNF-α通过TNFR2发挥抑炎作用,而tmTNF-α抗体可促进tmTNF-α表达,TNFR2基因敲除是否会影响该抗体对内毒素休克的保护作用?1.tmTNF-α抗体对WT和TNFR2基因敲除小鼠LPS诱导内毒素休克生存率的影响:腹腔注射LPS（30mg/kg）,提前30 min给予30mg/kg tmTNF-α抗体腹腔注射,连续观察72 h。令人吃惊的是:这个剂量的LPS导致90%BALB/c小鼠死亡,tmTNF-α抗体可提高生存率达20%;TNFR2KO小鼠LPS的存活率为23%,tmTNF-α抗体则提高生存率达77%。2.tmTNF-α抗体对WT和TNFR2基因敲除小鼠LPS诱导内毒素休克细胞因子的影响:进一步检测细胞因子,结果显示tmTNF-α抗体可提高2种基因型小鼠LPS模型中腹腔巨噬细胞表面tmTNF-α的表达,明显降低血清sTNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的水平。结论:tmTNF-α通过TNFR2介导的正向信号作用于巨噬细胞,抑制NF-κB和MAPK的活化,诱导巨噬细胞对LPS的抵抗;tmTNF-α可通过上调MCPIP1等负性调控分子抑制LPS诱导的炎症反应,进而在内毒素休克中发挥保护作用。
李明花[7]（2019）在《二甲双胍对脓毒症性心肌病保护作用的分子机制研究》文中进行了进一步梳理脓毒血症是由细菌感染或者细菌感染释放的内毒素导致的多器官功能障碍和全身性系统反应综合征,在脓毒性休克期间,心脏是最容易受累的器官之一。脓毒症性心肌病（sepsis-induced cardiomyopathy,SIC）是一种与感染相关的心血管疾病。研究表明,临床上至少有50%的脓毒性休克患者被诊断为脓毒症性心肌病,这是由心肌功能障碍引起的,预示着脓毒症性心肌病的预后不良。目前对大肠杆菌和LPS（脂多糖Lipopolysaccharide）诱导的心肌功能障碍的具体机制知之甚少,而且由于其与脓毒症自身的因素混杂在一起,导致临床上对脓毒症性心肌病患者的治疗效果甚微。为了更好地研究脓毒血症心肌损伤病程发展过程中免疫细胞的作用机制,课题组进行了大量药物筛选,发现二甲双胍能有效抑制小鼠及斑马鱼脓毒症性心肌病模型的心肌损伤情况。本课题通过研究脓毒症性心肌病中,小鼠及斑马鱼心脏的病理变化、心肌细胞的种类和形态变化、以及心肌细胞内关键蛋白转位后产生相关细胞因子等变化,初步探讨二甲双胍对脓毒症性心肌病的保护作用机制,为后续脓毒症性心肌病的预防和治疗提供新的思绪。（1）脓毒血症模型组:选择8周龄雌性C57BL/6J小鼠,在小鼠右下腹部腹腔缓慢注射1m L（1.3×108 CFUs/m L）致死剂量菌;（2）二甲双胍预适应保护组（In P）:在小鼠右下腹部腹腔缓慢注射1μg/100μL二甲双胍,间隔2h进行腹腔缓慢注射1m L（1.3×108 CFUs/m L）致死剂量菌;（3）二甲双胍单独作用组:在小鼠右下腹部腹腔缓慢注射1μg/100μL二甲双胍2h;（4）斑马鱼采用LPS浸泡法,其它步骤同上。结论,二甲双胍刺激心肌细胞时,细胞浆内PKC?通过转位至细胞膜并结合Caveolin-3,抑制MAPK/JNK信号通路,通过降低凋亡信号Bcl-2/Bax蛋白比例,抑制细胞凋亡,保护心肌细胞。同时,在线粒体中,通过调节PKC?与IRF4形成复合物,并可能通过释放抗炎因子IL-10,TGF-β,发挥抑制炎症反应作用,从而抑制脓毒症性心肌病的发生发展。
王翠芳[8]（2019）在《沙葱黄酮类化合物的抗炎作用及其机制研究》文中研究指明沙葱黄酮类化合物是沙葱的主要生物活性成分之一,本课题组前期研究结果表明,沙葱黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌、促进绵羊外周血淋巴细胞增殖、提高机体特异性免疫、改善羊肉风味等功能,但是有关其抗炎活性的研究报道较少,所以本论文应用体内和体外炎症模型,系统研究了沙葱黄酮类化合物的抗炎活性及其分子作用机制,主要研究内容和结果如下:1.沙葱总黄酮不同洗脱组分抗炎活性的初步评价本试验以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,应用CCK8法检测沙葱总黄酮水洗组分、35%、55%、75%乙醇洗脱组分（简称 AMFⅠ、AMFⅡ、AMFⅢ、AMFⅣ 组分）对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活性的影响,筛选出沙葱总黄酮4种洗脱组分应用于后续试验的最佳添加浓度;应用LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立炎症模型,检测沙葱总黄酮4种洗脱组分对炎症模型中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的影响,评价并比较沙葱总黄酮4种洗脱组分的抗炎活性,筛选最佳抗炎活性组分。结果显示:与对照组相比,AMF 1在50～800μg/mL添加浓度范围内对小鼠腹腔巨噬细胞无毒性作用（P>0.05）,A.MFⅡ、AMFⅢ、AMFⅣ 在 25～100μg/mL 添加浓度范围内可极显着提高小鼠腹腔巨噬细胞的增殖活性（P<0.01）,所以在后续试验的添加浓度选择时 AMFⅠ 组为 100、200、400 μg/mL;AMFⅡ、AMFⅢ 与 AMFⅣ 3 个组均为25、50、100 μg/mL。沙葱总黄酮4种洗脱组分均可不同程度的降低炎症模型中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的过度分泌,提高抑炎性细胞因子IL-10的含量,且AMFⅢ组的抗炎活性优于其它3种洗脱组分,表明沙葱总黄酮4种不同洗脱组分通过抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中促炎症介质的分泌体现其抗炎和免疫抑制的特性。2.AMFⅢ组分对炎症反应的抑制作用及其机理本试验探究了抗炎活性最强的AMFⅢ组分对炎症模型中iNOS、TNTF-α、IL-1β、IL-6、IL-10等炎症介质mRNA的表达量及MyD88介导的下游NF-κB和MAPK信号通路的影响,以期揭示AMFⅢ抑制炎症反应的作用机制。结果表明:AMFⅢ呈剂量依赖的方式极显着的抑制由LPS诱导的促炎介质相关基因的过度表达（P<0.001）,缓解LPS引发的炎症反应,其机制为AMFⅢ可显着或极显着的抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中MyD88在基因及蛋白水平的表达（P<0.05或P<0.01）.有效抑制IκB-α的磷酸化（P<0.01）,减少NF-κB/IκB-α复合物的解离,进而抑制p65的磷酸化及核移位,同时AMFⅢ还可显着抑制由LPS诱导的MAPK家族蛋白ERKI/2、JNK、p38的磷酸化水平。3.AMFⅢ对LPS引起的小鼠内毒素血症的保护作用本试验选用64只雄性C57BL/6小鼠,随机分为4个组,分别为正常对照组、内毒素血症小鼠模型组、AMFⅢ低剂量组、AMFⅢ高剂量组。AMFⅢ低、高剂量组分别以60、120mg/kg体重剂量的AMFⅢ对小鼠灌胃7d,腹腔注射LPS（10 rmg/kg）建立小鼠内毒素血症模型。检测各试验组小鼠血清中ALT、AST的活性,血清或肝脏组织中iNOS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10等炎症介质的分泌及相关基因的表达水平,通过组织病理学检测肝脏组织的变化,探讨AMFⅢ对LPS诱导的内毒素血症小鼠的保护作用。结果显示:灌胃120 mg/kg体重剂量的AMFⅢ可极显着降低内毒素血症小鼠血清中ALT、AST的活性（P0.001）,显着抑制促炎症介质（iNOS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6）的过度分泌及相关基因的表达水平,提高IL-10的含量及基因表达量（P<0.05）,并可明显改善LPS对小鼠肝脏的损伤。4.TLR4-MyD88-NF-κB/MAPK信号转导通路在AMFⅢ保护内毒素血症小鼠中的作用本试验以内毒素血症小鼠为模型,通过研究AMFⅢ对模型小鼠肝脏中MyD88-NF-κB/MAPK信号转导通路的影响,揭示了 AMFⅢ对模型小鼠的保护作用及其机制。结果显示,AMFⅢ可显着抑制由LPS诱导的内毒素血症小鼠肝脏组织中MyD88的表达量（P<0.05）,呈剂量依赖性抑制IκB-α p65的磷酸化水平（P<0.05）,不同剂量的AMFⅢ保护组可呈剂量依赖性显着或极显着的抑制信号分子 p-ERK1/2、p-JNK、p-p38 的水平（P<0.05 或 P<0.01）。综上所述,沙葱总黄酮4种洗脱组分均具有抗炎活性,且AMFⅢ的抗炎效果优于其它3种洗脱组分,并且AMFⅢ可以抑制由LPS诱导引起的促炎介质iNOS、NO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量的升高,降低ALT、AST的活性、提高IL-10的分泌水平,从而抑制炎症反应,改善LPS对小鼠肝脏的损伤,同时发现该过程是通过抑制TLR4调控的MyD88-NF-κB/MAPK信号转导通路的激活而实现。
刘倩[9]（2019）在《雾化吸入溶血磷脂酸对脓毒症大鼠肺损伤修复及肺内源性MSCs数量的影响》文中研究指明目标:本课题通过LPS脓毒症大鼠急性肺损伤（acute lung injury ALI）模型,研究体内炎症因子TLR4信号转导通路与间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的变化,了解ALI的发病相关机制。探讨雾化吸入溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对LPS引发的大鼠急性肺损伤是通过增高MSCs数量并抑制TLR4信号转导通路的炎症反应而促进肺损伤的修复。方法:60只SD大鼠随机分为5组:大鼠尾静脉分别注射PBS和LPS设为正常组（NC组）、脓毒症急性肺损伤组（LPS组）,LPS组中一部分肺损伤大鼠静脉注射LPA拮抗剂Ki 16425（LPS+KI组）,其中一部分LPS组及LPS+KI组大鼠分别雾化设为肺损伤大鼠雾化LPA治疗组（LPS+LPA组）、LPA治疗组（LPS+LPA+KI组）。在雾化LPA第一天（d1）及第七天（d7）分别麻醉大鼠,解剖后收集肺组织选用病理HE染色、湿/干重测定;收集外周血,ELISA检测大鼠外周血血清中TLR4、NFk B、IL-6及IL-21浓度;RT-PCR检测TLR4 m RNA及LPA受体m RNA的表达;western bolt检测NFk B/p-NFk B、ERK/p-ERK蛋白的表达,流式细胞术检测MSCs表面标志的相关抗体,计算各组MSCs百分比,研究LPA对MSCs数量的影响。结果:HE染色结果显示,LPS组d1镜下可见肺泡和肺间质炎细胞浸润及出血,间隔增厚,d7镜下可见肺泡和肺间质炎细胞浸润及出血,间隔增厚,肺泡上皮部分坏死及透明膜形成。LPS+LPA组镜下可见少数肺泡及肺间质炎细胞浸润和轻度出血,间隔轻度增厚,大部分透明膜修复,同时,LPS组较正常组大鼠肺组织湿/干重比增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组肺组织湿/干重比降低（p<0.01）,证明各组造模成功;ELISA实验显示,LPS组大鼠较正常组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均增高（p<0.001）,LPS+LPA组较LPS组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均降低（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4、NFk B、IL-6、IL-21的表达均增高（p<0.01）;RT-PCR实验显示,LPS组大鼠肺组织较正常组TLR4 m RNA的表达明显增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组TLR4 m RNA的表达均降低（p<0.001）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4 m RNA的表达均增高（p<0.01）,且作为LPA受体LPAR1/2,实验发现LPS+LPA组分别较NC组、LPS组中LAPR1/2m RNA的表达增高（p<0.01,p<0.001）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组TLR4 m RNA的表达降低（p<0.01）。western bolt检测LPS组大鼠肺组织p-NFk B的蛋白表达明显增高（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组p-NFk B的蛋白表达降低（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组p-NFk B的蛋白表达增高（p<0.05）,而LPS组p-ERK的蛋白表达降低（p<0.01）,LPS+LPA组较LPS组p-ERK的蛋白表达增高（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组p-ERK的蛋白表达降低（p<0.01）,并具有显着性。且流式细胞术检测MSCs表面标志的相关抗体,得LPS+LPA组较LPS组、正常组MSCs%增高（p<0.01）,LPS+LPA+KI组较LPS+LPA组MSCs%降低（p<0.05）,并具有显着性。结论:1、ALI模型病理镜下可见肺内炎细胞浸润及出血,间隔增厚,同时肺组织湿/干重比较正常组明显增高,证明ALI大鼠造模成功,且LPS引发ALI大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达增高,肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达增高,表明ALI中LPS通过TLR4途径参与炎症反应。2、雾化LPA能降低LPS引发ALI大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达、肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达,同时提高了肺内p-ERK蛋白表达和增加MSCs数量,病理可见肺内炎细胞浸润、出血减轻,透明膜修复,表明LPA通过抑制TLR4信号通路激活及增加MSCs数量对脓毒症肺损伤进行修复,为脓毒症肺损伤改善预后提供了思路。3、LPA抑制剂KI模型病理肺内炎细胞浸润、出血加重,且大鼠血清中炎症因子（TLR4、NFk B、IL-6、IL-21）的表达较LPS组增高,肺组织TLR4 m RNA及p-NFk B的蛋白表达较LPS组增高,同时使p-ERK蛋白表达和MSCs LPS组数量较LPS组下降。反向说明LPA通过抑制TLR4信号通路激活及增加MSCs数量对脓毒症肺损伤进行修复。
李宁娅[10]（2018）在《TLR4信号通路在内毒素诱导的雏鸡脾损伤中的作用研究》文中指出脾脏是鸡体内最大的外周免疫器官,微生物感染时,很容易发生损伤,继而导致免疫抑制。出壳初期是鸡存活的关键时期,此时雏鸡的获得性免疫不足,主要是天然免疫发挥重要作用。Toll样受体家族（Toll-like receptors,TLRs）作为天然免疫中最主要的模式识别受体,能够特异识别病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,从而激活体内天然免疫。其中,TLR4能够特异性地识别革兰氏阴性菌细胞壁成分脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,构成天然免疫的第一道防线。TLR4广泛表达于脾脏的多种细胞内,并参与介导机体组织器官损伤,但此类研究大多集中于人和鼠,有关TLR4信号通路与雏鸡脾损伤关系的研究却鲜有报道。为此,本试验采用鼠伤寒沙门氏菌来源的LPS刺激诱导雏鸡脾损伤,运用HE染色、免疫组织化学染色、荧光定量PCR及Western Blot技术探究LPS刺激对雏鸡脾脏形态结构、脾脏细胞凋亡、炎症因子表达的影响,同时探讨TLR4信号通路在雏鸡脾损伤作用中的分子机制。主要的研究内容和结果如下:1.LPS刺激诱导雏鸡脾损伤LPS腹腔注射1日龄科宝肉鸡12h、36h和72h时,雏鸡体重极显着低于对照组（p<0.01）,脾脏重量在LPS刺激36h和72h时呈下降趋势。LPS刺激12h时,脾脏椭球结构细胞发生核固缩、核溶解现象,36h时病变加深,72h核固缩、核溶解现象消失,椭球结构不明显。以上结果说明,LPS刺激可诱导雏鸡脾脏的急性损伤。2.LPS刺激对雏鸡脾脏细胞凋亡和细胞增殖的影响本试验采用免疫组织化学染色技术检测了ssDNA和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）在脾脏中的表达变化;采用Q-PCR技术检测细胞凋亡通路相关因子P53、BCL2、BAK、BAX、caspase-3以及caspase-8的mRNA水平表达变化;采用Western Blot技术检测了caspase-3的蛋白水平表达变化。结果显示:LPS刺激12h和36h时,细胞凋亡显着增多（p<0.05）,72h时与对照组无显着差异。LPS刺激12h和72h时,凋亡通路相关因子P53、BCL2、BAK和BAX的表达显着上调（p<0.05）,36h时表达下调,caspase-3和caspase-8的表达变化无显着差异。LPS刺激12h和36h时,细胞增殖显着减少（p<0.05）,72h表达接近对照组。以上结果说明:LPS刺激能够促进脾脏细胞凋亡,抑制脾脏细胞增殖,脾脏细胞凋亡主要通过活化的凋亡通路相关基因P53、BCL2、BAK、BAX介导。3.LPS刺激对雏鸡脾脏内炎性因子表达的影响本试验采用免疫组织化学染色技术研究了炎症因子IL-6在脾脏中的表达变化;采用Q-PCR技术检测了炎症因子IL-6和TNF-a的表达变化。结果显示:LPS刺激12h时,炎症因子IL-6和TNF-a的表达极显着高于对照组（p<0.01）,36h时表达下调,72h时表达上调并高于对照组。以上结果表明:LPS刺激能够导致雏鸡脾脏内炎症因子的过表达,进而导致雏鸡脾损伤。4.LPS刺激对雏鸡脾脏内LEP100表达的影响本试验采用免疫组织化学染色检测了脾脏内LEP100的表达变化。结果显示:LPS刺激12h时,LEP100的表达上调并极显着高于对照组（p<0.01）,36h时LEP100的表达持续升高,72h时表达下调。以上结果表明:LPS刺激能够诱导雏鸡脾脏内LEP100的过表达,从而导致雏鸡脾损伤。5.LPS刺激对雏鸡脾脏内TLR4信号通路相关分子表达的影响本试验采用免疫组织化学染色及Western Blot技术检测了脾脏内TLR4的表达变化;通过Q-PCR技术检测了TLR4及其信号通路下游分子MyD88和NF-KB的表达变化。免疫组化结果显示:LPS刺激36h时,TLR4的表达显着升高（p<0.05）,72h时缓慢下降并接近对照组的表达水平;Western Blot结果与免疫组化染色结果相似,在LPS刺激36h时,TLR4的表达上调并显着高于对照组（p<0.05）,72h时TLR4的表达水平接近对照组;Q-PCR结果显示,LPS刺激12h时TLR4表达下调,36h和72h时表达上调并高于对照组,LPS刺激后脾脏内MyD88及NF-KB表达呈现波浪变化,表现为12h时表达上升并高于对照组,36h时下降,72h时表达上升高于对照组。以上结果说明:LPS刺激能够激活TLR4信号通路。综合以上研究结果表明:鼠伤寒沙门氏菌来源的LPS通过激活TLR4信号通路诱导雏鸡脾脏内炎性细胞浸润、炎性因子的过表达以及细胞凋亡导致脾损伤的发生。
二、TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用（论文提纲范文）
（1）脓毒症小鼠miR-146a与巨噬细胞自噬的变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及处理 |
| 1.2 标本的取材和制备 |
| 1.3 立即取出完整的肺,用滤纸吸干血污,分别用 4% 多聚甲醛固定,留做病理学检查。测定左侧肺的重量,并进行湿干比计算。 |
| 1.4 肺组织HE染色 |
| 1.5 根据肺组织损伤病理积分对各实验组肺组织进行损伤评估 |
| 1.6 ELISA分析 |
| 1.7 rt-PCR检测miR-146a表达水平 |
| 1.8 Western blot法分析 |
| 1.9 透射电镜观察肺组织自噬小体 |
| 2 样本检测 |
| 2.1 IL-Iβ检测 |
| 2.2 TNF-α检测 |
| 2.3 血浆miR-146a检测 |
| 2.4 Western blot检测 |
| 2.5 透射电镜观测自噬小体 |
| 3 统计学处理 |
| 技术路线图 |
| 结果 |
| 4.1 观察对照组与脓毒症模型组小鼠一般情况,并绘制7天生存曲线 |
| 4.2 HE染色光镜下肺组织的病理变化、肺组织的湿干比及肺损伤评分 |
| 4.3 对照组与LPS组各时间点IL-1β与TNF-α变化 |
| 4.4 rt-PCR检测miR146-a表达水平 |
| 4.5 腹腔巨噬细胞 LC3-Ⅱ/Ⅰ和NFκB通路相关蛋白表达水平检测 |
| 4.6 对LPS小鼠脓毒症中血浆miR-146a与自噬相关蛋白表达的关系 |
| 4.7 透射电镜观察肺组织巨噬细胞自噬变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 miR-146a及巨噬细胞自噬在脓毒症研究中的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师评阅表 |
（2）脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 实验结果 |
| 1. LPS处理人脐静脉内皮细胞后,IFIT1的表达上调 |
| 2. pcDNA-IFIT1上调LPS诱导的NF-κB和炎症因子的表达 |
| 3. siRNA-IFIT1下调LPS诱导的NF-κB和炎症因子的表达 |
| 讨论 |
| 1. 炎症在动脉粥样硬化病理形成中发挥重要作用 |
| 2. IFIT1介导LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎症反应 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 缩写词简表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（3）调节转录抑制因子BCL6的分子功能对内毒素血症的干预作用及机制研究（论文提纲范文）
| 主要中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 BCL6抑制剂FX1对小鼠内毒素血症模型的保护作用 |
| 引言 |
| 实验仪器和材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 第二部分 BCL6抑制剂FX1抑制巨噬细胞炎症反应的机制研究 |
| 引言 |
| 实验仪器和材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 体外循环下心内直视术后的内毒素血症与机体免疫应答 |
| 参考文献 |
| 附录:攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（4）TLR4/NF-κB通路促进大鼠脊髓小胶质细胞活化和炎症反应参与神经根性疼痛的作用及机制（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 脊髓TLR4/NF-ΚB通路的活化是LDH模型大鼠慢性疼痛产生的重要原因 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 TLR4/NF-ΚB通路通过激活脊髓小胶质细胞并促进致炎细胞因子的表达引起RP |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间所取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）高迁移率家族蛋白新成员HMGXB4对小鼠全身性炎症的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写一览表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 LPS刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGXB4 表达的影响 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 实验小鼠 |
| 2.1.2 试剂耗材 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR |
| 2.2.3 Western blot免疫印迹检测 |
| 2.2.4 巨噬细胞的免疫荧光 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 LPS刺激可诱导小鼠巨噬细胞HMGXB4 的表达 |
| 2.4.2 证实HMGXB4是一细胞核蛋白 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 LPS刺激引起的先天性固有免疫应答反应 |
| 2.5.2 HMGB1蛋白与先天性固有免疫应答 |
| 第3章 Hmgxb4基因敲除小鼠的构建及其特征 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.1.1 Hmgxb4基因缺失小鼠的构建 |
| 3.1.2 试剂耗材 |
| 3.1.3 试剂配制 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 小鼠基因型鉴定 |
| 3.2.2 小鼠体重监测 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Hmgxb4~(neo/neo)敲除小鼠的鉴定及特征 |
| 3.4.2 Hmgxb4-CMV-Cre敲除小鼠的鉴定及特征 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 HMGBs蛋白家族基因缺失的表型 |
| 第4章 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的败血症死亡率和组织损伤 |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.1.1 实验小鼠 |
| 4.1.2 试剂耗材 |
| 4.1.3 试剂配制 |
| 4.1.4 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 小鼠败血症模型制备及生存曲线 |
| 4.2.1.1 内毒素(LPS)诱导小鼠败血症模型的制备 |
| 4.2.1.2 多微生物(CLP)诱导小鼠败血症模型的制备 |
| 4.2.2 全身性炎症反应综合症(SIRS)的诱导 |
| 4.2.3 血清炎症因子的ELISA分析 |
| 4.2.4 组织包埋切片 |
| 4.2.5 苏木素-伊红(HE)染色 |
| 4.2.6 TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡 |
| 4.2.7 LGALS3(Mac2)免疫荧光鉴定肺组织巨噬细胞的浸润 |
| 4.2.8 肺组织通透性检测 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 Hmgxb4基因缺失延缓全身性炎症反应诱导的小鼠败血症死亡率 |
| 4.4.2 Hmgxb4 基因缺失减轻LPS诱导的多器官损伤 |
| 4.4.3 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的肺组织细胞凋亡,免疫细胞浸润与肺血管通透性 |
| 4.4.4 Hmgxb4基因缺失对经典的促炎细胞因子没有影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 全身性炎症反应综合症(SIRS) |
| 4.5.2 血管内皮系统紊乱与多器官损伤 |
| 第5章 Hmgxb4 基因缺失通过抑制NOS2 的表达减少NO的产生改善LPS诱导的急性肺损伤 |
| 5.1 实验材料与方法 |
| 5.1.1 实验小鼠 |
| 5.1.2 实验细胞 |
| 5.1.3 试剂与耗材 |
| 5.1.4 试剂配制 |
| 5.1.5 主要仪器设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 RNA测序 |
| 5.2.2 qRT-PCR |
| 5.2.3 Western blot |
| 5.2.4 NO测定 |
| 5.2.5 10T1/2细胞的培养 |
| 5.2.6 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒构建 |
| 5.2.7 NOS2 enhancer双荧光素酶报告截短质粒构建 |
| 5.2.8 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒的活性检测 |
| 5.2.9 肺组织通透性的检测 |
| 5.3 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 HMGXB4 缺失显着改变LPS诱导的巨噬细胞基因表达谱 |
| 5.4.2 Nos2 基因是HMGXB4 调控的潜在靶基因 |
| 5.4.3 HMGXB4 过表达促进LPS介导的巨噬细胞NOS2 表达和NO产生 |
| 5.4.4 HMGXB4 反式激活Nos2 基因 |
| 5.4.5 HMGXB4 缺失明显减轻LPS诱导的肺组织损伤和NOS2 表达 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 一氧化氮合成酶 |
| 5.5.2 诱导型NOS(NOS2)产生的NO和血管内皮系统紊乱 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 工作总结示意图 |
| 6.3 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）tmTNF-α正向信号在内毒素休克中的作用及其机制（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 全文小结 |
| 本研究主要创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）二甲双胍对脓毒症性心肌病保护作用的分子机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 脓毒症 |
| 1.1.1 脓毒症的致病菌 |
| 1.1.2 脓毒症的发病机制 |
| 1.1.3 脓毒症的特征 |
| 1.1.4 脓毒症的治疗 |
| 1.2 中性粒细胞 |
| 1.2.1 中性粒细胞的基本特征 |
| 1.2.2 中性粒细胞的迁移及活化 |
| 1.2.3 中性粒细胞的功能 |
| 1.3 脓毒症与心肌损伤 |
| 1.3.1 脓毒症性心肌病 |
| 1.3.2 脓毒症性心肌病的特征 |
| 1.3.3 心肌细胞 |
| 1.3.4 脓毒性心肌损伤的机制 |
| 1.4 Toll样受体家族 |
| 1.4.1 Toll样受体 |
| 1.4.2 TLR2 |
| 1.4.3 TLR4 |
| 1.5 干扰素调控因子家族 |
| 1.5.1 干扰素调控因子 |
| 1.5.2 IRF4 |
| 1.5.3 IRF5 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与设备 |
| 2.1.1 菌种 |
| 2.1.2 试剂与材料 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 细胞培养 |
| 2.1.5 细胞转染 |
| 2.1.6 原代心肌细胞的分离与培养 |
| 2.1.7 细胞膜分离 |
| 2.1.8 线粒体分离 |
| 2.1.9 主要实验设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 二甲双胍介导的脓毒症性心肌病保护模型 |
| 2.2.2 大肠杆菌JM109菌种的制备 |
| 2.2.3 大肠杆菌相对应菌液浓度的测定 |
| 2.2.4 大肠杆菌工作菌液的制备 |
| 2.2.5 小鼠心脏病理损伤 |
| 2.2.6 定量PCR |
| 2.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 2.2.8 免疫共沉淀 |
| 2.2.9 ELISA检测细胞因子IL-10/TNF-α含量 |
| 2.2.10 免疫荧光检测IRF4/与PKC定位表达 |
| 2.2.11 斑马鱼实验相关步骤 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 离体模型建立及细胞实验结果 |
| 3.1.1 Metformin对LPS诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤模型的保护作用 |
| 3.1.2 MTT法检测LPS对H9c2细胞活性的影响 |
| 3.1.3 ELISA检测LPS对H9c2细胞分泌细胞因子的影响 |
| 3.1.4 Metformin不同浓度对H9c2细胞生存率的影响 |
| 3.1.5 Metformin对H9c2细胞中MAPK信号转导的影响 |
| 3.1.6 Metformin对H9c2细胞中MAPK蛋白荧光的影响 |
| 3.1.7 Metformin对大鼠心肌细胞中MAPK信号转导的影响 |
| 3.2 脓毒症性心肌病体内模型实验及机制探讨 |
| 3.2.1 Metformin对LPS造模斑马鱼生存期的影响 |
| 3.2.2 Metformin对斑马鱼脓毒症性心肌病体内模型的影响 |
| 3.2.3 Metformin对斑马鱼脓毒症性心肌病心脏体积的影响 |
| 3.2.4 Metformin对斑马鱼脓毒症性心肌病模型体内细胞因子的影响 |
| 3.2.5 Metformin对脓毒血症小鼠生存率的影响 |
| 3.2.6 Metformin对小鼠外周血中细胞因子的影响 |
| 3.2.7 Metformin对小鼠心肌组织的保护作用 |
| 3.2.8 Metformin对小鼠心肌组织IRF4蛋白表达的影响 |
| 3.2.9 Metformin对心肌细胞中Cav-3 与PKCε蛋白共定位的影响 |
| 3.2.10 荧光共振能量转移实验检测Metformin对心肌细胞中PKCε由细胞浆转位至线粒体的影响 |
| 3.2.11 Metformin对心肌细胞中PKCε由细胞浆转位的影响 |
| 3.2.12 Metformin对心肌细胞中IRF4由细胞浆转位至线粒体的影响 |
| 3.2.13 Metformin对心肌细胞线粒体内IRF4与PKCε蛋白偶联的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）沙葱黄酮类化合物的抗炎作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 沙葱的研究进展 |
| 1.1.1 沙葱的化学成分 |
| 1.1.2 沙葱的生物学功能 |
| 1.2 黄酮类化合物及其药理活性研究进展 |
| 1.2.1 黄酮类化合物简介 |
| 1.2.2 黄酮类化合物的药理活性 |
| 1.3 炎症相关研究背景概述 |
| 1.3.1 炎症简介 |
| 1.3.2 LPS对炎症反应的过度诱导 |
| 1.3.3 LPS诱导内毒素血症 |
| 1.3.4 LPS通过TLR4介导的信号转导通路 |
| 1.3.5 巨噬细胞在炎症反应中的作用 |
| 1.4 黄酮类化合物抗炎作用机制的研究概况 |
| 1.4.1 对炎性细胞因子表达的影响 |
| 1.4.2 对转录因子、蛋白激酶表达的影响 |
| 1.4.3 对花生四烯酸代谢途径的影响 |
| 1.4.4 对iNOS、NO含量的影响 |
| 1.4.5 对炎症相关细胞功能的调节 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 1.6 技术路线 |
| 2 试验研究 |
| 2.1 沙葱总黄酮不同洗脱组分抗炎活性的初步评价 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.2 结果与分析 |
| 2.1.3 讨论 |
| 2.1.4 小结 |
| 2.2 AMF Ⅲ对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中炎症反应的抑制作用 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.2 结果与分析 |
| 2.2.3 讨论 |
| 2.2.4 小结 |
| 2.3 AMF Ⅲ对LPS致小鼠内毒素血症的保护作用 |
| 2.3.1 材料与方法 |
| 2.3.2 结果与分析 |
| 2.3.3 讨论 |
| 2.3.4 小结 |
| 2.4 TLR4-MyD88-NF-κB/MAPK信号转导通路在AMF Ⅲ保护内毒素血症小鼠中的作用 |
| 2.4.1 材料与方法 |
| 2.4.2 结果与分析 |
| 2.4.3 讨论 |
| 2.4.4 小结 |
| 3 总体讨论与结论 |
| 3.1 总体讨论 |
| 3.2 总体结论 |
| 3.3 创新点 |
| 3.4 有待进一步解决的问题 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）雾化吸入溶血磷脂酸对脓毒症大鼠肺损伤修复及肺内源性MSCs数量的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）TLR4信号通路在内毒素诱导的雏鸡脾损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 1 前言 |
| 1.1 立题背景 |
| 1.2 文献综述 |
| 1.2.1 脾脏的组织学结构 |
| 1.2.2 脾脏的血液循环 |
| 1.2.3 脾脏的免疫功能 |
| 1.2.4 沙门氏菌感染与脾损伤 |
| 1.2.5 TLR4信号通路在内毒素诱导的脾损伤中的作用 |
| 1.2.5.1 TLRs与脾脏免疫 |
| 1.2.5.2 TLR4的发现 |
| 1.2.5.3 TLR4的配体 |
| 1.2.5.4 TLR4信号转导 |
| 1.2.5.5 TLR4信号通路与脾损伤 |
| 1.3 选题目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物及处理 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要溶液和试剂的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 样品采集与处理 |
| 2.2.2 石蜡切片制作 |
| 2.2.3 苏木精-伊红(HE)染色 |
| 2.2.4 免疫组织化学染色 |
| 2.2.5 细胞凋亡检测 |
| 2.2.6 荧光定量PCR |
| 2.2.6.1 组织样总RNA的提取 |
| 2.2.6.2 逆转录合成cDNA |
| 2.2.6.3 荧光定量PCR引物的设计 |
| 2.2.6.4 荧光定量PCR分析 |
| 2.2.7 WesternBlot |
| 2.2.7.1 蛋白样品的提取 |
| 2.2.7.2 蛋白浓度的测定 |
| 2.2.7.3 蛋白变性 |
| 2.2.7.4 电泳 |
| 2.2.7.5 电转移 |
| 2.2.7.6 免疫印迹显色 |
| 2.2.8 数据统计分析 |
| 2.2.8.1 显微镜下观察组织切片的结构并进行显微摄影 |
| 2.2.8.2 荧光定量检测结果 |
| 2.2.8.3 WesternBlot检测结果 |
| 3 结果 |
| 3.1 LPS刺激对雏鸡体重的影响 |
| 3.2 LPS刺激诱导雏鸡脾损伤 |
| 3.2.1 LPS刺激时雏鸡脾体重下降 |
| 3.2.2 LPS刺激导致雏鸡脾形态结构改变 |
| 3.2.3 LPS刺激促进雏鸡脾内细胞凋亡、抑制细胞增殖 |
| 3.3 TLR4信号通路参与了LPS诱导的雏鸡脾损伤 |
| 3.3.1 LPS刺激时雏鸡脾内TLR4及其信号通路相关基因表达变化 |
| 3.3.2 TLR4信号通路介导的炎性细胞的表达变化 |
| 3.3.3 TLR4信号通路介导的炎性因子的表达变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 LPS刺激对雏鸡脾体重及组织结构的影响 |
| 4.2 TLR4信号通路对LPS刺激后脾脏内炎性因子表达的影响 |
| 4.3 TLR4信号通路对LPS刺激后脾脏细胞凋亡和增殖的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 CDNA模版与引物检测结果 |
| 附录2 个人简历 |
| 附录3 论文发表情况 |
| 附录4 学术交流及获奖情况 |
四、TLR4在内毒素导致组织损伤过程中的信号转导作用（论文参考文献）
- [1]脓毒症小鼠miR-146a与巨噬细胞自噬的变化研究[D]. 孙维强. 石河子大学, 2021(02)
- [2]脂多糖通过诱导IFIT1表达促进人脐静脉内皮细胞炎症反应[D]. 王佳丽. 南方医科大学, 2020
- [3]调节转录抑制因子BCL6的分子功能对内毒素血症的干预作用及机制研究[D]. 张颢. 华中科技大学, 2020(01)
- [4]TLR4/NF-κB通路促进大鼠脊髓小胶质细胞活化和炎症反应参与神经根性疼痛的作用及机制[D]. 胡育铭. 广州医科大学, 2020(01)
- [5]高迁移率家族蛋白新成员HMGXB4对小鼠全身性炎症的影响及机制研究[D]. 贺香勤. 南昌大学, 2019(01)
- [6]tmTNF-α正向信号在内毒素休克中的作用及其机制[D]. 顾海燕. 华中科技大学, 2019(01)
- [7]二甲双胍对脓毒症性心肌病保护作用的分子机制研究[D]. 李明花. 吉林大学, 2019(02)
- [8]沙葱黄酮类化合物的抗炎作用及其机制研究[D]. 王翠芳. 内蒙古农业大学, 2019
- [9]雾化吸入溶血磷脂酸对脓毒症大鼠肺损伤修复及肺内源性MSCs数量的影响[D]. 刘倩. 内蒙古医科大学, 2019(03)
- [10]TLR4信号通路在内毒素诱导的雏鸡脾损伤中的作用研究[D]. 李宁娅. 华中农业大学, 2018(01)