质粒提取论文资料

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问:真核生物(如小鼠)的质粒如何提取,请写下详细步骤,谢谢
  1. 答:质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌)、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。
    小鼠没有叶绿体,你可以直接参照小鼠线粒体的提取方法进行提取。
  2. 答:老大 老鼠没有质粒 质粒是有遗传效应的环状DNA 存在于大肠杆菌等细菌中
  3. 答:小鼠有质粒么?我记得好像没有吧.
问:质粒提取的原理和步骤
  1. 答:看这个,我们都用这个方法
问:质粒的提取方法
  1. 答:不知道楼主你说的对照组,做的是阳性对照,还是阴性对照呢?如果这个不说清楚,是没法回答你的问题。
    假设,你说的对照是阴性对照的话,首先第一个,
    1,这个结果就是不对的,对照组出现菌落,说明你的抗生素失效了,实验无效。
    2.的话说明你的转化没有成功,实验操作跟试剂没问题
    3.实验成功,可以挑取单克隆摇菌
    假设你说的对照组做的阳性对照
    那么
    1.实验成功,可以进入下一步
    2.试剂或者操作有问题,导致阳性对照都做不出来
    3.这个实验结果没法接受,不合常理,重新再转化
    另外,一般做转化,会正反对照都做,阳性对照+阴性对照。
  2. 答:传统的质粒提取方法前面人已经回答挺全了,现在实验室讲究效率,很多都直接使用试剂盒的,例如BIOG的质粒提取试剂盒,有小量、中量的、高纯的,还有专门去内毒素的等等,可以满足大部分实验需求。
问:质粒提取的注意事项
  1. 答:是用什么方法提取的?一般如果是试剂盒的话直接按说明书进行即可
    需注意的是第一步收集菌体的时候需把离心的上清尽量去处,可以用吸水纸弄一下,这一点大家平常都没注意。
  2. 答:1.菌体收集不应过量,过量会导致裂解不完全,菌体太少时,提取质粒浓度可能不高。
    2.加入溶液2后不要剧烈振荡,只需轻轻颠倒几次离心管,过于剧烈会导致基因组断裂。
    3.加入溶液3立即上下颠倒几次混匀,时间不宜过长。
    4.溶解时溶解液体积不要太少,太少洗脱效率低,产量低。
问:质粒提取过程中,应注意哪些操作,为什么?
  1. 答:1.提取过程应尽量保持低温。
    2.提取质粒DNA过程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好,要将蛋白尽量除干净需多次抽提。
    3.沉淀DNA通常使用冰乙醇,在低温条件下放置时间稍长可使DNA沉淀完全。沉淀DNA也可用异丙醇(一般使用等体积),且沉淀完全,速度快,但常把盐沉淀下来,所以多数还是用乙醇。
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