一、用荧光分光光度法测定PBGD酶活性（论文文献综述）
管维良[1]（2021）在《南美白对虾无水保活及其生化和肉质的应激响应》文中进行了进一步梳理鲜活的南美白对虾（Litopenaeus vannamei,以下简称对虾）口味鲜美且营养丰富,主要养殖于我国东南沿海地区并向全国供应。目前主要以有水运输的方式实现活虾的调运,该方式以水作为载体,但水的载重消耗了大量的运力并且水质的恶化造成了运输途中对虾的大量死亡。本文针对对虾在有水运输中调运成本高且存活率低的问题,开发了低成本高效率的无水保活运输技术,进一步研究了对虾在无水运输过程中的抗胁迫机制和肉质变化规律,得到了以下结果:（1）对虾经过低温驯化（20°C,1 h）再冷击（8°C,3 min）处理后进入休眠状态,将休眠的对虾装入聚氯乙烯（PVC）塑料袋中并充入纯氧,然后在13°C条件下进行10 h的模拟无水保活运输,其存活率可达96%。对虾经过上述条件（8°C冷击诱导休眠和13°C充氧运输）处理以及使用“控温暂养与冷击装置”、“捕捉运输通用虾笼”和“鱼虾无水保活运输箱”作为运输设备,再经过中长途保活运输（距离>300 km,时间>5 h）后,存活率可达90%以上。（2）通过构建“HSP70沉默-外源重组HSP70（rHSP70）”实验模型,冷击处理可诱导对虾中血淋巴细胞的热休克蛋白70（HSP70）基因和蛋白的表达上调。注射rHSP70的对虾与冷击处理的对虾相比,经过空气暴露（模拟无水运输）10h后,其存活率无显着差异（80%vs 90%,p>0.05）,然而HSP70沉默处理的对虾存活率显着低于冷击处理的对虾（62%vs 90%,p<0.05）。血淋巴细胞内HSP70含量较高的对虾（即冷击对照组和rHSP70注射组）,其胞内的活性氧（ROS）含量、细胞色素c的基因表达量、caspase-3活性和细胞凋亡率均显着低于HSP70沉默的对虾（p<0.05）。上述结果表明对虾血淋巴细胞内的HSP70可以通过冷击处理被诱导表达,并通过清除细胞内ROS、抑制细胞色素c的基因表达和抑制caspase-3激活,阻断了血淋巴细胞凋亡途径,从而提高了对虾对空气暴露胁迫的耐受能力。（3）空气暴露胁迫造成对虾肌肉中活性氮自由基（RNS）含量显着增高（p<0.05）。在RNS的氧化作用下,对虾肌肉中脂质的过氧化值（PV）、肌原纤维蛋白（MP）的羰基（CO）浓度、内源荧光强度（IFI）和表面疏水性明显增高。上述结果说明对虾肌肉中脂质和蛋白在模拟无水运输过程中发生了氧化损伤。但MP的巯基（SH）由于只对活性氧自由基（ROS）敏感,因此未发生由RNS引发的氧化反应。结果还发现MP的氧化损伤还导致了对虾的肌球蛋白重链（MHC）和肌动蛋白降解。模拟有水运输的对虾肌肉脂质和蛋白也发生了类似的氧化反应,但比模拟无水运输的氧化程度略微降低。（4）在模拟无水运输过程中,对虾经受空气暴露胁迫后,其肌细胞内的Ca2+浓度升高,代谢速率加快,ATP消耗加速并逐步降解为AMP和IMP等代谢产物。上述变化最终促使虾肉的鲜味得到了显着的提升。AMP/ATP值的增大和Ca2+浓度的升高使肌细胞内AMP激活蛋白激酶（AMPK）代谢途径激活,以及AMPKα基因表达量上调。同时,AMPK促进了胞内糖酵解和甘油三酯分解。其中在糖酵解途径和甘油三酯分解途径中的己糖激酶（HK）、6-磷酸果糖-2-激酶（PK）、乳酸脱氢酶（LDH）和甘油三酯酶（ATGL）活性在AMPK的调控下显着增高。对虾肌肉中的肌糖原在HK、PK和LDH的作用下产生乳酸。同时甘油三脂在ATGL的作用下分解为游离脂肪酸,其含量与运输前的对虾相比变化较小。上述结果表明了糖酵解是对虾在模拟无水运输过程中的主要供能途径。（5）对虾肌肉内源蛋白酶的总活性在模拟无水运输后显着升高（p<0.05）。其中钙蛋白酶（calpain）和明胶蛋白酶（gelatinolytic protease）由于胞内Ca2+过载而被激活,组织蛋白酶（cathepsin）活性因为乳酸等酸性物质积累而增高。但Ca2+浓度的升高并未使凋亡执行酶（caspase-3）的活性增高,也没有使肌细胞发生凋亡。相应的在有水运输过程中,对虾内源蛋白酶的总活性因组织蛋白酶L活性升高也发生显着升高（p<0.05）,但其他的蛋白酶活性与运输前相比变化不明显。（6）在模拟无水运输过程中,对虾肌肉中MP的氧化使其疏水性增大,同时由于明胶蛋白酶活性增高,肌间结缔组织发生降解从而使肌纤维间隙增大,并且p H值的降低也削弱了肌肉中蛋白与水分子的结合能力。在上述三个因素的共同作用下,肌肉中的固定水转变为自由水,从而使肌肉的持水力下降以及汁液损失增加。另外,肌纤维中的MP在钙蛋白酶和组织蛋白酶的双重作用下发生降解,从而使肌纤维碎片化指数显着升高（p<0.05）,说明对虾肌纤维在模拟无水运输过程中发生断裂。肌纤维的断裂和肌间结缔组织的降解最终导致对虾在模拟无水运输后肌肉变软。然而MP的SH在模拟无水运输过程中未发生明显的氧化,使肌肉的弹性略微增加。虽然对虾经过模拟无水运输后,肌肉的硬度和弹性发生了轻微的改变,但与运输前相比并没有显着性变化（p>0.05）。上述结果说明了模拟无水运输不会使对虾的肉质发生明显的劣变。相应的在模拟有水运输过程中,对虾肌肉的蛋白脂质氧化程度和蛋白酶活性较低且能量代谢较慢,持水力显着优于模拟无水运输的对虾。
方佳丽,牛安娜,常尊学,苏昕[2]（2020）在《腈水解酶高通量筛选方法的研究进展》文中提出目的综述腈水解酶的高通量筛选方法,为进一步研究腈水解酶的生物催化与转化提供参考。方法参考国内外40余篇文献,主要介绍了腈水解酶高通量筛选方法,各个方法的优缺点和研究进展,根据腈水解酶催化反应的原理及酶活性检测方法的不同,将其高通量筛选方法主要分为基于pH指示剂、NH3分析、羧酸分析、同位素标记分析、腈类底物与羧酸同时分析的腈水解酶高通量筛选方法。结果依据腈水解酶的催化反应原理,从反应过程、反应产物和底物标记三个方面对腈水解酶高通量筛选方法进行了总结分类。结论腈水解酶高通量筛选方法虽然较为有限且新型方法尚不成熟,但高通量筛选方法能快速评价和鉴定腈水解酶,加快新腈水解酶的发现,丰富腈生物转化酶类的来源,拓宽腈水解酶底物谱,所以开发腈水解酶高通量筛选方法具有良好的应用前景和价值。
曲文君[3]（2020）在《载铅超细炭黑对溶菌酶和脾细胞毒性效应与机理的研究》文中指出城市大气颗粒物中有大量来自化工生产行业及机动车尾气排放的超细炭黑颗粒（UFCB）,而铅暴露一直是广受关注的危害人体健康的重要因素。超细炭黑具有强吸附性,可吸附大气气溶胶中的铅等重金属和有机物,造成复合污染。研究表明UFCB可经呼吸及皮肤接触进入人体,在肺泡内沉积并造成肺组织损伤,小粒径的超细炭黑粒子可穿过肺间质通过血液循环到达脾、肾、肝、淋巴等多个器官诱发毒性效应,乃至多种疾病。另外,UFCB进入机体组织和细胞后,可与其中的生物大分子发生相互作用,进而诱发细胞的毒性。因此,超细炭黑及其负载污染物后对机体各器官和组织的毒性效应和机理研究,对加强大气颗粒物污染的防治和保护人体健康具有重要意义。然而,目前对于UFCB的毒性效应研究多集中于其对肺组织和肺泡巨噬细胞等肺部细胞的影响,对于它对机体功能蛋白和其他器官的细胞毒性研究较少,对于它吸附不同污染物之后对细胞的毒性效应及作用机理也尚未被阐明。另外,UFCB在工业生产及空气中长期老化后会发生变性,因此实验室中常对UFCB进行修饰以模拟大气中的状态。UFCB的粒径、表面积、表明电荷、修饰方法、聚集程度及表面自由基等理化性质都会影响其生物学毒性,但目前很多对UFCB安全性评价的实验中缺乏对UFCB的全面表征。针对以上问题,本研究对UFCB（31 nm）进行了修饰、载铅及表征,并从分子和细胞层面研究了 UFCB载铅前后对溶菌酶及脾细胞的毒性效应和机理,主要包括以下五部分:第一章简要介绍了 UFCB的来源、性质及其生物毒性研究进展,概述了铅暴露的途径及铅对人体的危害,总结了 UFCB与大气中其他污染物所造成的的复合污染。通过文献综述,讲明了本研究的科学价值,提出了本领域尚待完善和解决的问题,并针对这些科学问题确定了研究方案。第二章经过对比酸功能化和臭氧氧化的修饰效果,选用臭氧氧化法对UFCB进行修饰。采用超声法负载醋酸铅,通过原子分光光度法和二甲酚橙分光光度法分别测定负载后和超声后上清液的铅离子浓度。采用粒度分析仪、扫描电子显微镜、ZETA电位仪、傅里叶红外变换光谱仪对载铅前后UFCB进行全面表征。结果表明,本实验所用浓度条件下,UFCB对铅的负载量可达到93.2%,且载铅后UFCB（UFCB-Pb）在超声后没有铅离子解离出来。表征实验的结果显示,UFCB和UFCB-Pb表面均带负电,UFCB-Pb在水溶液中的聚集程度要高于UFCB,但二者的分散体系都处于稳定状态,这种稳定与其表面自由基COO-相关。第三章以重要的免疫蛋白溶菌酶（LYZ）为研究对象,采用多种光谱法研究了 UFCB及UFCB-Pb对LYZ分子结构的影响,结合酶活性检测研究了 UFCB及UFCB-Pb暴露对于LYZ功能的影响,并根据上述实验结果探讨了 UFCB及UFCB-Pb相互作用的机制。结果表明,UFCB和UFCB-Pb均可与LYZ发生相互作用,使LYZ发生荧光增敏,并主要通过改变色氨酸残基周围的微环境来影响蛋白质的疏水性。相较于UFCB,随着UFCB-Pb浓度的增大LYZ酶活性降低程度更加显着,这是由于UFCB-Pb对LYZ二级结构的改变造成的。载铅前后超细炭黑与LYZ的相互作用力为疏水力,UFCB-Pb或可进入LYZ的活性空腔对LYZ产生毒性。第四章以机体重要的免疫细胞脾细胞为研究对象,经UFCB及UFCB-Pb染毒后,采用CCK-8细胞活力、caspase-3酶活力、线粒体膜电位、活性氧（ROS）等指标的变化规律,研究了 UFCB和UFCB-Pb对小鼠原代脾细胞细胞活力、细胞凋亡的影响及其毒性效应机制。结果表明,UFCB和UFCB-Pb对脾细胞产生了细胞毒性,使得脾细胞活力下降并诱发细胞凋亡。但UFCB-Pb对脾细胞的毒性效应更为显着,其诱发细胞损伤和凋亡的机制之一为UFCB及UFCB-Pb诱导脾细胞产生ROS,ROS的产生导致线粒体膜的损伤进而激活caspase,最终导致了细胞损伤及细胞凋亡。第五章总结了论文的研究结果,归纳了研究的创新点,并针对研究过程中发现的、未解决的问题展开分析,提出对策。本研究选用科学的方法对UFCB进行修饰及铅的负载,并对实验材料进行了全面表征,从分子层面研究了载铅前后超细炭黑对溶菌酶的分子结构和功能的影响,从细胞层面研究了载铅前后超细炭黑对脾细胞活力、细胞凋亡的影响以及其凋亡的具体通路,为以UFCB为模型研究大气细颗粒物负载污染物前后对机体功能蛋白及细胞的毒性提供方法学参考,为载铅前后超细炭黑对免疫相关蛋白及细胞的毒性提供了基础数据,为超细炭黑的安全应用和大气超细颗粒物的防控提供了科学依据。
胡金华[4]（2020）在《9-（2-羟丙基）腺嘌呤-柱前衍生化-HPLC-FLD法检测3-氯-1,2-丙二醇》文中进行了进一步梳理3-氯-1,2-丙二醇（3-monochloro-1,2-propanediol,3-MCPD）具有生殖毒性、肾脏毒性、神经毒性、遗传毒性、致癌性等毒性,国际癌症研究机构（international agency for cancer research,IARC）将其归类为2B类致癌物。目前,关于3-MCPD的检测方法主要有气相色谱法（gas chromatography,GC）、气相色谱-质谱联用法（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）、毛细管电泳技术（capillary electrophoresis,CE）、分子印迹法（molecular imprinting,MIP）等,而高效液相色谱-荧光法（HPLC-FLD）却鲜见报道。本课题基于实验室已建立腺嘌呤衍生化3-MCPD的基础上,对腺嘌呤第九位取代的三种物质与3-MCPD衍生化后的衍生物进行了荧光光谱分析,最终确定了9-（2-羟丙基）腺嘌呤作为衍生试剂的衍生效果更好,并在环境水和食用植物油中游离3-MCPD检测上得到了很好地应用。本课题主要包含以下几部分内容:（1）氯乙醛二乙缩醛水解获得的氯乙醛分别与腺嘌呤、9-甲基腺嘌呤、9-（2-羟乙基）腺嘌呤、9-（2-羟丙基）腺嘌呤反应,利用HPLC-UV分离获得四种3-MCDP衍生物,通过探究其荧光强度与p H值、甲醇体积分数、NaCl浓度的关系,确定HPLC-FLD法最佳分离条件,最终得出9-（2-羟丙基）腺嘌呤衍生效果更好。（2）空白峰的生成抑制探索实验表明了基于高碘酸钠氧化裂解3-MCPD、亚硫酸钠中和过量高碘酸钠的基础上再加入醋酸铅可以有效抑制空白峰的生成,衍生试剂的p H值及浓度、氧化裂解时间、衍生化温度及时间的单因素实验进一步提高了方法的灵敏度。（3）纯水体系下,0.0～100.0 ng/mL、100.0～1000.0 ng/mL 3-MCPD的标准曲线方程分别y=7.91447x+27.43477、y=7.62336x+40.83123;R2分别为0.9974、0.9974。湖水、江水、造纸厂水中3-MCPD的含量依次为0.52、1.47、3.51μg/kg。（4）0.03 g/mL NaCl溶液体系下,0.0～100.0 ng/mL 3-MCPD标准曲线方程为y=7.83635x+24.82129,R2=0.99863。对实验室已建立的食用植物油中游离3-MCPD的提取方法做了调整,并检测出大豆油、稻米油、花生油、山茶油、玉米油中3-MCPD含量分别为16.37、26.89、153.74、30.51、17.48μg/kg。（5）基于实验室腺嘌呤衍生化3-MCPD法应用于酱油中3-MCPD的检测上,发现三氯蔗糖会对实验结果造成巨大影响,透析袋分离酱油中3-MCPD和三氯蔗糖的探索实验表明了该前处理效果较差。
张弛[5]（2017）在《拟南芥叶绿素合成基因CBD1的功能研究》文中研究指明光合作用是光合生物将光能转化为化学能,同时将无机物转化为有机物后贮存在生物体内的过程,是地球生命存在和发展的能量源泉。叶绿体作为光合作用的场所,对光合生物的生长发育起着至关重要的作用。叶绿素作为叶绿体中含量最丰富的光合色素,在光合作用中负责吸收和传递光能。叶绿素等其他色素的合成缺陷会导致植物产生叶色变异。本文通过对实验室拟南芥T-DNA插入突变体库进行筛选,获得了一株叶色黄化的突变体cbd1（chlorophyll biosynthetic deficiency 1）。本论文通过保守性分析和生物信息学预测等对未知基因CBD1的功能进行了探索,从形态特征、色素含量、蛋白定位、叶绿素合成途径中间产物含量、光合特性和离子稳态等方面对该突变体进行了分析,主要研究结果如下:1.CBD1为进化保守的叶绿体跨膜蛋白通过生物信息学预测和系统发育分析发现,CBD1蛋白N端具有叶绿体定位信号肽,且具有六个可能的跨膜区域。CBD1在苔藓植物、蕨类植物和被子植物中进化保守,在裸子植物和古细菌中则没有同源蛋白存在。通过PSI-BLAST保守性分析发现CBD1蛋白属于Type Ⅱ CAAX金属蛋白酶超家族,并具有三个保守的模块。通过对与CBD1共表达基因的功能分析,推测其可能参与叶绿素合成途径与光合作用。本论文利用PEG/Ca2+介导的外源基因瞬时转化拟南芥原生质体和组织化学染色等细胞生物学方法,进一步确认CBD1为定位于叶绿体的类囊体膜并只在绿色组织表达的蛋白,在根中检测不到CBD1的表达。2.CBD1参与叶绿素合成途径的调控cbd1突变体在正常生长条件下出现叶片黄化的表型,其叶绿素含量与野生型相比下降了约30%-40%,其中叶绿素b的下降幅度更大,因而cbd1中叶绿素a/b的比例要明显高于野生型。通过对避光生长的黄化苗的分析中可以看出cbd1的叶绿素合成速率要明显慢于野生型,且CBD1基因的表达受持续光照条件的诱导升高。通过转基因方法以cbd1突变体为背景构建了基因组回补植株,发现该黄化表型可以完全回复。说明该表型的出现确由CBD1的突变引起。本论文通过实时荧光定量PCR和荧光分光光度法分别检测了 CBD1的突变对叶绿素合成途径中编码关键酶的基因表达的影响以及对叶绿素合成途径的中间产物含量的影响。结果发现CBD1的突变影响了叶绿素合成相关基因对光照变化的响应,并且在黄化和正常生长的cbd1突变体中,当分别添加Fe螯合剂DP和叶绿素合成前体物质ALA时,与野生型相比,cbd1中都检测到了 Mg-ProtoⅨ的明显累积。这些结果说明CBD1可能参与并调控了叶绿素合成途径。3.CBD1影响了光系统的组装与光合效率本论文通过蓝绿温和非变性凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析了野生型与cbd1突变体中类囊体膜蛋白组分的变化,实验结果发现,CBD1的突变造成了光系统Ⅰ中叶绿素a结合蛋白PsaA+B和PsaE的积累,同时抑制了捕光色素复合体LHCⅡ三聚体（LHCII-T）的组装,因此影响了cbd1光系统的组装以及对光能的捕获能力。本论文使用脉冲调制式荧光仪对野生型与cbd1突变体进行叶绿素荧光分析,发现cbd1突变体中光系统Ⅱ反应中心的开放程度（Fo）和实际光化学效率（ΦPSⅡ）,以及光系统Ⅰ的实际光化学效率（ΦPSI）都要高于野生型,然而cbd1的非光化学猝灭耗散也明显高于野生型。说明cbd1所吸收的光能并未能有效的转化为光化学能量。4.CBD1影响了叶绿体离子稳态本论文利用Mg2+吸收缺陷型菌株MM281发现CBD1异源表达在MM281中时可以回补该菌株在低镁条件下的生长。通过Percoll法分离野生型和cbd1突变体的完整叶绿体与类囊体并利用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）进行离子含量分析,发现cbd1叶绿体与类囊体中的Mg2+含量与野生型相比降低了约40%。说明CBD1的缺失会造成叶绿体镁离子稳态的紊乱。5.CBD1与GUN5的遗传互作本论文通过遗传学方法发现CBD1与镁螯合酶的催化亚基GUN5存在遗传互作,其双突变体cbd1gun5呈现黄化矮小的表型,其叶绿素合成途径和光系统组装都受到严重的抑制。利用透射电镜对cbd1gun5叶绿体超微结构进行分析,发现cbd1gun5的叶绿体和类囊体发育出现了明显的阻滞。综合以上结果,推测CBD1可能参与叶绿素合成途径,并与该叶绿素合成过程中Mg的获取与传递过程相关。因此,对拟南芥CBD1蛋白的研究不仅揭示了一个未知蛋白的生物学功能,还为进一步阐释GUN5的功能以及叶绿素合成途径的调控机制提供了新的思路和方向。
徐德利[6]（2016）在《钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预》文中研究指明乌骨鸡（Gallus gallus domesticus Brisson）是江西地方特色食品资源和地道药材之一,有悠久的滋补和药用历史,乌骨鸡的特殊性就在其富含黑色素,黑色素是其重要的功能成分。矿物质元素会直接或是间接地对黑色素生物合成过程产生影响,Ca、Fe元素在乌骨鸡黑色素中的含量显着高于其他矿物元素,可能是乌骨鸡黑色素生物合成中参与程度最高的矿物元素。本研究在获得能大量体外培养且稳定传代的乌骨鸡黑色素细胞的基础上,研究Ca、Fe元素对乌骨鸡黑色素细胞生长和黑色素生物合成的干预作用,为进一步提高和改善乌骨鸡中黑色素的合成量、结构组成和功能活性提供科学基础,为促进江西乌骨鸡资源开发和产业发展作出贡献。主要研究结论归纳如下:1,采用MTT法研究葡萄糖、卵黄总脂质等生长因子对黑色素细胞增殖作用,可知葡萄糖浓度是乌骨鸡黑色素细胞生长的必要条件,又是黑色素合成的主要影响因素。在高糖（25mMGlc）培养条件下,5%FBS、1%卵黄总脂质有显着促进细胞生长作用,作用强度且无显着差别,且两者联用有协同作用;TPA和卵黄总脂质的生长曲线说明,卵黄总脂质较TPA更有利于乌骨鸡黑色素细胞的生长;低浓度葡萄糖（16.8 mM）培养条件下FBS是促进细胞生长的主要因素。2,研究了钙铁元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响发现,低浓度（0.01-0.02mmol/L）Fe3+和Fe2+对黑色素细胞的生长有显着促进作用。在0.04 mmol/L Fe3+背景下,0.04-0.16 mmol/L Fe2+对乌骨鸡黑色素细胞的生长有抑制作用。不同价态的铁元素对乌骨鸡黑色素细胞的生长的作用是不同的,二价铁的细胞毒性显着高于三价铁。Ca2+在0.1-6.4 mmol/L浓度区间内会极显着的促进黑色素细胞的生长,1.6 mmol/L时促进作用最强。可知乌骨鸡黑色素细胞对Ca2+的耐受力远大于Fe3+和Fe2+,这可能和细胞内的黑色素含量有关。3,采用细胞划痕实验研究Ca2+、Fe2+、Fe3+、Fe2++Fe3+对乌骨鸡黑色素细胞迁移能力的影响。0.4mmol/L CaCl2能显着促进黑色素细胞迁移。使用钙离子拮抗剂维拉帕米阻断了L-型钙通道后,细胞外钙内流受阻,钙对黑色素细胞的迁移能力的促进作用显着下降,说明L-型钙通道是钙离子进入黑色素细胞的重要通道。FeCl3（0.040.16 mmol/L）对细胞迁移率具有明显促进作用,随FeCl3的浓度增大而增大,并呈铁剂量依赖。0.01 mmol/L FeSO4对细胞迁移率具有明显促进作用,继续增大浓度,则对细胞迁移没有促进作用。0.04 mmol/L FeCl3和（0.010.08）mmol/LFeSO4联用时即Fe3+:Fe2+=4:1、2:1、1:1、1:2,对细胞相对迁移率具有促进作用,并随着Fe2+浓度增大,促进作用减弱,可见两者联合并未有良好的协同作用。肌肽通过螯合Fe3+和Fe2+离子,或是将Fe3+还原为Fe2+离子发挥抑制作用,进而进一步验证了Fe3+和Fe2+离子对黑色素细胞的迁移的促进作用。明胶酶谱法检测乌骨鸡黑色素细胞上清液和全蛋白的基质金属蛋白酶的酶活,发现在同等培养条件下,阳性对照组有蓝色背景下的白色条带（MMPs的活性条带）,而黑色素细胞未见白色条带。说明在此培养条件下,乌骨鸡黑色素细胞不表达基质金属蛋白酶。4,溶剂A溶解精制黑色素得到黑色素标准品,分析比较精制黑色素和标准品黑色素的红外光谱图发现二者无明显差异,但各特征峰的吸收强度和宽度不同,标品黑色素烷烃结构吸收峰更强。可推断标品有酰胺结构和游离的羟基而精制黑色素有伯酰胺结构。5,发现了另一种独特的可以溶解乌骨鸡黑色素标品的溶剂B,在溶剂A中,黑色素标准品的最大溶解度为60ug/mL（25℃）,且溶剂在405nm处吸光度背景大。在溶剂B中,黑色素标品的最大溶解度为250ug/mL（25℃）,在405nm处溶剂吸光度背景小。溶剂B的细胞中黑色素含量的可见光分光光度法测定的方法学考察表明:乌骨鸡黑色素标品溶液在5250ug/mL范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,相关系数r=0.9995（n=9）。精密度实验,黑色素吸光度值的RSD为1.3%—2.0%;细胞样品在3h内稳定RSD为4.86%;试验重复性良好,RSD为4.4%。黑色素细胞样品平均加标回收率在95.2%103.6%之间,RSD为3.5%。6,酶学方法研究酪氨酸二钠、酪氨酸、葡萄糖、钙离子、不同价态的铁离子以及钙铁组合对乌骨鸡黑色素细胞黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的影响发现,酪氨酸二钠是增强乌骨鸡黑色素细胞黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的重要因子,适当的葡萄糖浓度会产生协同作用。高浓度的Ca2+（0.4-1.6mM）,低浓度的Fe2+（0.01mM）和Fe3+（0.01-0.04mM）对酪氨酸酶激活均有显着的促进作用。Ca2+、Fe3+和Fe2+均对黑色素细胞酪氨酸酶激活率有显着的促进作用,但联用后会降低各自的促进作用,而Fe3+和Fe2+联用时则对酪氨酸酶活无促进作用。7,荧光酶标仪定量检测钙铁元素对黑色素细胞内的ROS含量的影响,发现Ca2+（0.2-0.8mM）会显着提高黑色素细胞ROS含量,其中0.4mM促进作用最强。Fe2+和低浓度的Fe3+会降低黑色素细胞内ROS含量,且在此浓度下的钙离子和铁离子对黑色素细胞生长没有抑制作用,说明在钙铁的干预下,虽然黑色素细胞的ROS含量发生变化,但细胞内的ROS平衡并未失衡。8,新建立的黑色素含量测定方法考查卵黄总脂质、TPA、钙、铁元素对黑色素合成量的影响,结果表明,卵黄总脂质对低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞合成黑色素有明显的促进作用;TPA会抑制其促进作用。钙、铁元素对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素有明显促进作用,钙元素强于铁元素,且两者无协同作用,而该浓度下的二价和三价铁离子具有协同作用。钙、铁元素干预后,生物合成所获得的黑色素抗氧化能力显着增强了,以三价铁干预产生的黑色素抗氧化能力最强。9,Western bolt方法检测钙铁元素对酪氨酸相关蛋白酶1（TRP1）表达的影响,结果显示,Ca2+能显着促进黑色素细胞TRP1的表达,而Fe2+和Fe3+会显着抑制黑色素细胞TRP1的表达,而Fe2+和Fe3+联用时又会促进黑色素细胞TRP1的表达,Fe2+和Fe3+分别和Ca2+联用时,会显着抑制Ca2+对TRP1表达的促进作用,其中二价铁的抑制作用强于三价铁。10,采用钙离子拮抗剂维拉帕米阻断黑色素细胞钙离子通道后,细胞内钙离子含量减少,细胞黑色素含量显着降低,TRP1酶表达量减少,而黑色素含量依然显着高于对照组,因而说明黑色素细胞主要通过L-型钙离子通道摄取钙离子,影响黑色素合成和酪氨酸相关蛋白酶1的表达的,但也有其他摄入方式进入细胞参与黑色素合成。11,采用MTT法研究葡萄糖、过氧化氢、卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12细胞存活的影响。结果表明,高糖在72h内对细胞存活影响不大,48h除外;无糖在12-72h会显着抑制细胞存活,呈时间依赖性;1mM H2O2会显着抑制细胞存活,且呈时间依赖性;12h内,卵黄总脂质对细胞存活率无抑制作用。24h内,牛磺酸对细胞存活率无抑制作用。12h内,柠檬酸锌对细胞存活率无抑制作用。12,采用MTT法研究卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12细胞的H2O2和无糖损伤保护作用的影响。结果表明,低浓度卵黄总脂质、作用浓度的牛磺酸和柠檬酸锌对H2O2损伤内皮细胞的有保护作用。三者两两联合对H2O2损伤内皮细胞的保护作用弱于三者单独。然而,作用浓度的柠檬酸锌、牛磺酸和卵黄总脂质对无糖引起的内皮细胞的损伤没有保护作用。
陈泠伶[7]（2016）在《B-酯酶检测方法的比较研究》文中认为农药是指用来防治危害农业及农副产品的害虫、杂草和调节植物生长的药剂,在农业生产中发挥着重要作用,然而农药使用过量、不当会污染环境和农产品,造成人、畜中毒和死亡。因此,研制出经济、快速、灵敏的农药残留检测技术有利于控制农药残留,减少因农药中毒的事件发生从而保障食品安全。氨基甲酸酯类和有机磷类农药是在农业生产中常用的农药,其残留问题也值得高度重视。本论文分别选择了3种有机磷农药（敌敌畏、敌百虫、久效磷）和2种氨基甲酸酯类农药（灭多威、涕灭威）,选取B-酯酶种族中的三种酶电鳗乙酰胆碱酯酶（Acetyl cholinesterase,AChE）、马血清丁酰胆碱酯酶（Butyryl cholinesterases,BChE）、花芸豆酯酶作为酶源。胆碱酯酶是能催化水解胆碱酯酶且有不同专业性的水解酶,分为AChE和BChE,它们主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药的最适反应底物,其主要来源是动物,成本高,难保存。花芸豆酯酶是一种植物酯酶,植物酯酶酶源丰富且成本低,易于保存,通过实验得出花芸豆纯化后的酶活相对较好。本论文运用两种方法荧光法和比色法,比较该两种方法检测常见5种农药对B-酯酶的灵敏性和检出限,以及两种方法在蔬菜样品中运用并在研究中发现环糊精衍生物对荧光有增敏作用。通过这2种方法比较3种酶对于常用5种农药的敏感性与检出限的不同,运用到蔬菜样品中的研究,可以为快速检测农药提供更好的方法以及在实际样品种运用提供新的思路,为酶抑制法检测酶源提供依据。其主要研究结果如下:1.比色法测定花芸豆酯酶、AChE、BChE酶活的最佳温度为40℃、35℃、35℃,最佳pH为6.5、7.5、8.0,最佳时间均为15min。2.电鳗AChE、马血清BCh E、花芸豆酯酶在荧光法中,反应的最适pH、温度、时间分别为6.5、35℃、15min。3.比色法与荧光分光光度法分别检测农药对花芸豆酯酶、AChE、BChE的IC50值时比色法和荧光法检测5种农药对电鳗AChE、花芸豆酯酶、马血清BChE的抑制情况,随着5种农药浓度的负对数值逐渐增大,即农药的终浓度不断减小抑制强度也不断减弱。荧光法检测三种酶对5种农药敏感性比用比色法更灵敏,检出限更低。4.荧光法和比色法测定电鳗AChE、马血清BChE、花芸豆酯酶对5种农药的检出限时,荧光法测定的检出限较比色法更低更灵敏。5.5种蔬菜研磨匀浆经丙酮处理后用酶抑制法检测时对酶影响作用不大,对红油菜的影响效果最大超过30%。酶抑制法能应用于检测蔬菜中有机磷及甲酸酯类农药残留。6.不同浓度蔬菜的反应溶剂,对荧光都有淬灭作用,不同蔬菜样品液稀释浓度不同,对荧光的淬灭效果不同。7.蔬菜液对4-甲基伞形酮和吲哚乙酸酯都有淬灭作用,说明蔬菜液对底物无特异性,对荧光都有淬灭作用。8.HP-β-CD溶液浓度为400mg/mL时荧光增强效果最好,荧光增加5倍。三甲基-Beta-环式糊精浓度为40mg/mL时荧光增强效果最好,荧光增加3.5倍。9.引起荧光淬灭现象的原因有很多,机理也很复杂,如因荧光物质的分子和淬灭剂分子碰撞而损失能量。荧光增强剂能缓解一部分荧光淬灭,但提高荧光持续的能力不强。在实验中还用了增稠剂聚乙烯吡络烷酮、黄原胶,乙二胺四乙酸、十六烷基三甲基溴化铵等来减少蔬菜液对荧光的干扰,虽然对荧光有增强效果但是作用不强,运用在实际样品中时效果不好。
李院[8]（2015）在《氢化物发生—共振瑞利散射测定痕量锑锡》文中指出1绪论综述了共振瑞利散射（RRS）和氢化物发生（HG）在分析中的应用,以及硒、锑和锡的分析进展。2次亚磷酸钠还原反应-共振瑞利散射光谱测定硒在0.90 mol/L盐酸介质中,硒（Ⅳ）被次亚磷酸钠还原生成纳米硒,并在588nm处有一共振散射峰。在选定条件下,随着硒（Ⅳ）浓度的增大,生成的纳米硒增多,588nm处的共振散射峰线性增大,硒（Ⅳ）浓度在0.1-1.5mg/L范围内与ΔI588m呈良好的线性关系。其线性回归方程为ΔI588nm=489.9C-9.0,检出限为12.00μg/L。3氢化物纳米反应-共振瑞利散射光谱测定痕量Sb（Ⅲ）比较了 HAuC14、AuNP-HAuC14、13--GO、I3--RAgNP-VBB 四个吸收体系,发现 I3--GO体系共振瑞利散射法检测Sb（Ⅲ）,线性关系好,灵敏度高。在酸性条件下,NaBH4将还原成SbH3,用I3--GO作吸收液,I3-可以和GO发生共振能量转移,使共振瑞利散射光强度减弱,I3-被SbH3气体还原成I-后,使该体系的共振瑞利散射光强度增强,在选定的条件下,在4.2-376.6 μg/L范围内与ΔI322nm呈良好的线性关系,其线性回归方程为ΔJ 322nm=2.66C+20.30（C为Sb（Ⅲ）浓度μg/L）,相关系数r为0.9986,用该方法测定水中的Sb（Ⅲ）,结果令人满意。4氢化物纳米反应-共振瑞利散射光谱测定痕量Sn（Ⅱ）在酸性条件下,NaBH4将Sn（Ⅱ）还原成SnH4,用I3--GO作吸收液,I3--GO会发生共振能量转移,使GO共振瑞利散射光强度减弱,I3-被SnH4气体还原成I-后,体系的共振瑞利散射光强度增强,且在322 nm处有一个共振瑞利散射峰,其相对强度（AI322nm）与Sn（Ⅱ）的浓度在0.05～3.5 mg/L范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为AI 322nm=116.03C+21.73（C 为 Sn（Ⅱ）浓度 mg/L）,相关系数 r 为 0.9925。用 AgN03 作吸收液,Ag+被SnH4气体还原成Ag原子,Ag原子聚集生成AgNP,随着Sn（Ⅱ）含量的增加,AgNP数量增多或粒径增大,使其产生的共振瑞利散射光强度增强,且在374 nm处有一个共振瑞利散射峰,其相对强度（AI374nm）与Sn（Ⅱ）的浓度在0.05-3.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为:ΔI374nm=545.33C+48.765（C为Sn（Ⅱ）浓度mg/L）,相关系数r为 0.9957。
邓娜[9]（2010）在《速差动力学结合化学计量学应用于食品和环境中某些残留物质的分析》文中指出本论文主要是针对人们口益关注的食品和环境方面的一些复杂多组份体系进行快速的定量测定,同时综述了近年来常用的化学计量学方法在食品和环境中的应用。实验过程中将化学计量学方法用于解析实验得到的光谱和动力学数据,讨论了动力学方法的原理和实际应用,并探讨了化学计量学在复杂的体系中实现同时测定多组份物质的可行性。本论文由五个章节组成：第一章：对近年来动力学方法结合化学计量学在食品和环境方面领域中的应用进行了回顾,展望了化学计量学在动力学分析中的应用前景,对基于因子分析的多元校正方法和人工神经网络等化学计量学方法的应用和发展动向进行了评述。第二章：本章建立了一种酶动力学分光光度法同时测定食品和水样中的涕灭威、灭害威和杀线威。该方法是基于一种酶催化反应,即以碘化硫代乙酰胆碱（ATChI）为底物,利用乙酰胆碱酯酶对其进行水解生成的物质与显色剂二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）反应,生成的产物5-巯基-2-硝基苯甲酸在412nm处有最大吸收,而氨基甲酸酯类农药涕灭威、灭害威和杀线威对该反应具有不同程度的抑制作用即抑制酶的催化活性,使它们的反应速率产生差异,文中结合化学计量学从而实现对它们进行动力学同时测定。实验测得杀线威、涕灭威和灭害威的检测限分别为0.81、2.13和1.25ng mL-1。实验采集的动力学数据用主成分回归法（PCR）,偏最小二乘法（PLS）和径向基人工神经网络（RBF-ANN）处理并建立校正模型对合成样进行分析,结果表明RBF-ANN方法的预报结果最好。将该方法用于分析实际样中的三种农药,效果良好。第三章：利用动力学分光光度法实现了对金霉素、四环素和土霉素的同时测定。方法基于在氢氧化钠介质中,它们将紫红色的高锰酸钾溶液还原成绿色的锰酸钾时存在动力学速率差异。实验采集526和608nm两个最大吸收波长处的数据,金霉素、四霉素和土环素在这两个波长处的线性范围均为0.05-0.75mgL-1、0.05-0.75mgL-1和0.02-0.34mgL-1,根据所采集的数据处理得出在526nm处的检出限更低,分别为0.013mgL-1、0.015mg L-1和0.011mg L-1。随后,采用主成分回归（PCR）、偏最小二乘法（PLS）、径向基人工神经网络（RBF-ANN）和主成分径向基人工神经网络法（PC-RBF-ANN）建立了校正模型,所得的模型对未知样的预报结果表明,在526nm下利用动力学数据的PC-RBF-ANN模型的预报结果最好。将该方法用于分析实际样品中金霉素、四环素和土霉素的含量,其结果与高效液相色谱法（HPLC）的结果无显着性差异。第四章：本工作提出了一种简单和快速的速差动力学结合化学计量学方法同时测定克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。该方法是基于在酸性介质下,待测组分与黄色的硫酸铈胺发生氧化还原反应生成无色的三价铈离子,通过监测反应物硫酸铈胺在最大吸收波长312nnm处的动力学数据,建立主成分回归（PCR）、偏最小二乘（PLS）和径向基函数-人工神经网络（RBF-ANN）校正模型,对克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的混合样进行预报。将预报结果最好的RBF-ANN校正模型用于测定实际样品中的克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,得到了满意的结果。第五章：本工作提出了用荧光动力学分光光度法结合化学计量学方法对毒死蜱和乙硫磷进行同时测定,方法是基于在酸性条件下,痕量农药毒死蜱和乙硫磷的存在对Fenton试剂（Fe（Ⅱ）+H2O2）氧化罗丹明B促使其荧光猝灭的反应具有明显的抑制作用,EDTA的加入,使毒死蜱和乙硫磷在一定浓度范围内与荧光强度呈现良好的线性关系,同时增加了体系的稳定性和灵敏度。根据毒死蜱牢和乙硫磷对该反应的抑制效率存在一定的差异,从而达到同时测定两者的目的。为了得到最佳的反应条件,本文应用中心复合设计对实验条件进行了优化,使该体系具有较强的稳定性和较高的灵敏度。此外,本文用三种化学计量学方法如PCR, PLS和RBF-ANN方法对合成样品中所测量的动力学数据进行分析,从而达到对各待测且分进行预报的目的,其中PLS法的预报结果最好。将推荐的方法用于环境水样中的毒死蜱和乙硫磷的同时测定,测定结果与HPLC法进行比较发现无显着性差异。
仝万艳[10]（2009）在《不同强度聚焦超声结合原卟啉对离体培养S180肿瘤细胞的损伤作用研究》文中认为声动力学疗法（Sonodynamic therapy,SDT）是在光动力学疗法的基础上建立和发展起来的,是由日本学者Umemura等1989年提出的抗癌新思路和新方法,即利用超声激活富集且能长时间潴留于肿瘤细胞内的血卟啉及其衍生物杀伤癌细胞的方法。该疗法具有较强的针对性和对正常组织的无创伤性,且弥补了光动力学疗法只能治疗浅表组织的局限性,因而对于治疗肿瘤,特别是组织深层肿瘤有着较好的应用前景。原卟啉Ⅸ（ProtoporphyrinⅨ,PpⅨ）是血卟啉衍生物的一种有效成分,本室前期的研究表明PpⅨ比血卟啉更利于对细胞产生毒性作用。PpⅨ在肿瘤组织或细胞中的聚集可以通过直接向体系中加入PpⅨ或5-ALA的方式来实现。目前由5-ALA诱导产生内源性光敏剂PpⅨ的研究在光动力学疗法中已经发展成熟,但其在声动力学疗法的研究中报道较少,且超声激活外源性PpⅨ的抗肿瘤研究也还处于初级阶段。本论文以国家自然科学基金项目“超声激活血卟啉抗肿瘤细胞的分子生物学机制”和“超声激活血卟啉诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制的研究”为依托,采用频率为1.065 MHz的聚焦超声结合内、外源PpⅨ对离体培养的S180肿瘤细胞的损伤作用进行研究,目前取得的实验结果如下:1.测得实验所用原卟啉Ⅸ的最大荧光激发波长为408 nm,最大荧光发射波长为605 nm,通过荧光分光光度法检测了外源性PpⅨ和内源性PpⅨ在S180肿瘤细胞中的代谢。研究发现,在加入外源性PpⅨ后45-120 min,细胞对PpⅨ的吸收基本达到相对饱和状态;而5-ALA诱导S180肿瘤细胞代谢生成的内源性PpⅨ在0～12 h内随时间的延长几乎呈线性增加;高效液相色谱分析显示5-ALA在S180肿瘤细胞内的富集产物主要是PpⅨ,而非代谢过程中的其他产物,且其含量随时间延长的变化与荧光光度法分析结果一致。2.内、外源性PpⅨ在S180肿瘤细胞中的亚细胞定位及其动态变化的研究发现,两者的亚细胞定位均存在时间依赖效应;部分外源性PpⅨ主要分布于细胞膜,细胞质内也有红色荧光分布,而5-ALA诱导细胞生成的内源性PpⅨ则主要定位于线粒体。3.在外源性PpⅨ和1 mM5-ALA孵育12 h所生成的内源性PpⅨ含量相同的条件下,分别经强度为0、1、3、5 W/cm2的超声处理30 s后,台盼蓝拒染检测发现超声结合内源性PpⅨ组和超声结合外源性PpⅨ组细胞的存活率与单纯超声组相比没有明显差异。当外源性PpⅨ浓度增大至40μM时,超声结合PpⅨ协同杀伤细胞的效应较单纯超声组差异极显着（P＜0.01）。4.扫描电镜和透射电镜的形态学观察发现原卟啉Ⅸ-声动力学疗法对S180细胞膜产生损伤效应,表现为随超声强度加大,超声结合PpⅨ处理组细胞严重变形,膜表面微绒毛消失,形成指状突起,胞膜破裂,胞质流失等;乳酸脱氢酶释放实验和丙二醛、ATPase活性检测实验表明,不同处理后S180肿瘤细胞膜完整性和通透性发生不同程度的改变,膜脂质过氧化水平升高,ATP酶活性下降等。由此可推测细胞膜等膜性结构是超声激活外源性原卟啉Ⅸ作用于S180肿瘤细胞的一个主要靶位点,超声结合原卟啉Ⅸ处理可直接或间接破坏离体培养S180肿瘤细胞的膜系统。
二、用荧光分光光度法测定PBGD酶活性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、用荧光分光光度法测定PBGD酶活性（论文提纲范文）
（1）南美白对虾无水保活及其生化和肉质的应激响应（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 南美白对虾 |
| 1.2 鲜活水产品保活运输 |
| 1.2.1 无水运输 |
| 1.2.2 有水运输 |
| 1.2.3 运输前处理 |
| 1.3 鲜活水产品在无水运输过程中的应激反应 |
| 1.3.1 机体应激反应 |
| 1.3.2 细胞应激反应 |
| 1.4 无水运输对鲜活水产品品质的影响 |
| 1.4.1 脂质和蛋白质氧化途径 |
| 1.4.2 能量物质代谢途径 |
| 1.4.3 内源性蛋白酶酶解途径 |
| 1.4.4 细胞凋亡途径 |
| 1.5 本研究意义与主要内容 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 无水保活运输关键技术的研发 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.4 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 休眠和复苏的温度及时间 |
| 2.3.2 冷击温度及保活温度对模拟无水运输存活率的影响 |
| 2.3.3 暂养对模拟无水运输存活率的影响 |
| 2.3.4 无水保活运输包装的使用效果 |
| 2.3.5 防伤装载对模拟无水运输存活率的影响 |
| 2.3.6 无水保活运输过程中温度、氧气和存活率的变化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 HSP70抑制空气暴露胁迫对血淋巴细胞凋亡的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 试剂与设备 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.4 数据处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 实验模型的建立及有效性 |
| 3.3.2 血淋巴细胞HSP70基因及蛋白表达 |
| 3.3.3 HSP70对空气暴露对虾存活率的影响 |
| 3.3.4 HSP70对血淋巴细胞内ROS含量的影响 |
| 3.3.5 HSP70对血淋巴细胞内细胞色素c基因表达量的影响 |
| 3.3.6 HSP70对血淋巴细胞内caspase-3 基因表达量及其活性的影响 |
| 3.3.7 HSP70对血淋巴细胞凋亡的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 空气暴露胁迫对肌肉蛋白质和脂质氧化的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 试剂与设备 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.2.4 数据处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 肌肉中ROS和 RNS的含量 |
| 4.3.2 肌肉中脂质的FFA含量、PV、TBARs值和FR值 |
| 4.3.3 肌肉中MP的 CO浓度、SH和 S-S浓度、内在荧光强度和表面疏水性 |
| 4.3.4 肌肉中MP的蛋白组成 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 空气暴露胁迫对肌肉糖原和脂质代谢的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 试剂与设备 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.2.4 数据处理 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 对虾肌肉的肌纤维呼吸类型 |
| 5.3.2 肌肉细胞内的Ca~(2+)浓度 |
| 5.3.3 肌肉中AMPKα基因表达量 |
| 5.3.4 肌肉中HK,PK,LDH和ATGL的活性 |
| 5.3.5 肌肉中肌糖原和乳酸的含量 |
| 5.3.6 肌肉中ATP、IMP的含量及AMP/ATP值和K值 |
| 5.3.7 肌肉中脂肪酸的组成 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 空气暴露胁迫对肌肉内源性蛋白酶的影响 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 试剂与设备 |
| 6.2.3 实验方法 |
| 6.2.4 数据处理 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 肌肉中蛋白酶的总活性 |
| 6.3.2 肌肉中组织蛋白酶B和L的活性 |
| 6.3.3 肌肉中钙蛋白酶的活性 |
| 6.3.4 肌肉中caspase-3 的活性及细胞的凋亡状况 |
| 6.3.5 肌肉中明胶蛋白酶的活性 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 空气暴露胁迫对肌肉品质的影响 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 材料与方法 |
| 7.2.1 实验材料 |
| 7.2.2 试剂与设备 |
| 7.2.3 实验方法 |
| 7.2.4 数据处理 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.3.1 肌肉的pH值、纤维碎片指数和微观形态 |
| 7.3.2 肌肉的水分状态 |
| 7.3.3 肌肉的离心失重率和汁液损失率 |
| 7.3.4 肌肉的质构特性 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 本章小结 |
| 第八章 结论与展望 |
| 8.1 主要结论 |
| 8.2 主要创新点 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 博士期间主要科研成果 |
（2）腈水解酶高通量筛选方法的研究进展（论文提纲范文）
| 1 基于pH指示剂的腈水解酶高通量筛选方法 |
| 2 基于NH3分析的腈水解酶高通量筛选方法 |
| 2.1 基于Berthelot反应的分光光度比色法 |
| 2.2 基于荧光法测定 |
| 2.3 基于偶联反应的间接测定法 |
| 3 基于羧酸分析的腈水解酶高通量筛选方法 |
| 3.1 基于腈水解酶探针的时间分辨荧光法 |
| 3.2 基于羟肟酸铁反应的分光光度比色法 |
| 3.3 基于络合显色反应的紫外分光光度法 |
| 3.4 其它复杂显色反应或系统的分光光度法 |
| 4 基于同位素标记分析的腈水解酶高通量筛选方法 |
| 5 基于腈类底物和羧酸同时分析的腈水解酶高通量筛选方法 |
| 6 腈水解酶高通量筛选的研究展望 |
（3）载铅超细炭黑对溶菌酶和脾细胞毒性效应与机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 超细炭黑及其毒性研究进展 |
| 1.1.1 超细炭黑的来源及理化性质概述 |
| 1.1.2 国内外超细炭黑毒性机理研究进展综述 |
| 1.2 铅简介及其毒性效应 |
| 1.2.1 铅污染概述 |
| 1.2.2 铅毒性概述 |
| 1.3 超细炭黑的复合污染 |
| 1.4 论文的研究目的、主要研究内容及研究意义 |
| 1.4.1 论文的研究目的 |
| 1.4.2 论文的研究内容 |
| 1.4.3 论文的研究意义 |
| 第2章 超细炭黑的修饰、载铅及表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 超细炭黑的修饰及载铅 |
| 2.2.3 超细炭黑载铅量的测定 |
| 2.2.4 粒度分析实验 |
| 2.2.5 超细炭黑的表征实验 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 修饰前后超细炭黑的粒度分析 |
| 2.3.2 超细炭黑载铅量 |
| 2.3.3 载铅前后超细炭黑的表征 |
| 2.3.4 载铅前后超细炭黑分散度变化 |
| 2.3.5 载铅前后超细炭黑的表面官能团 |
| 2.4 结论 |
| 第3章 载铅前后超细炭黑与溶菌酶相互作用的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 样品的配制 |
| 3.2.3 荧光光谱测定实验 |
| 3.2.4 共振光谱测定实验 |
| 3.2.5 紫外吸收光谱测定实验 |
| 3.2.6 圆二色谱测定实验 |
| 3.2.7 酶活性检测实验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 UFCB及UFCB-Pb诱发LYZ荧光增敏效应及机理 |
| 3.3.2 UFCB及UFCB-Pb对LYZ氨基酸微环境的影响 |
| 3.3.3 UFCB及UFCB-Pb对LYZ粒径大小影响的研究 |
| 3.3.4 UFCB及UFCB-Pb对LYZ骨架结构的影响 |
| 3.3.5 UFCB及UFCB-Pb对LYZ二级结构的影响 |
| 3.3.6 UFCB及UFCB-Pb对LYZ酶活性的影响 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 载铅前后超细炭黑诱发小鼠脾细胞凋亡及氧化损伤的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验试剂的配制 |
| 4.2.3 小鼠原代脾细胞匀浆液的制备及染毒 |
| 4.2.4 细胞活力测定实验 |
| 4.2.5 细胞内caspase-3酶活力测定实验 |
| 4.2.6 细胞线粒体膜电位损伤测定实验 |
| 4.2.7 细胞内活性氧含量测定实验 |
| 4.2.8 数据处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 UFCB及UFCB-Pb对小鼠原代脾细胞活力的影响 |
| 4.3.2 UFCB及UFCB-Pb对脾细胞内caspase-3酶活力的影响 |
| 4.3.3 UFCB及UFCB-Pb对脾细胞线粒体膜电位损伤的影响 |
| 4.3.4 UFCB及UFCB-Pb诱发小鼠原代脾细胞ROS含量的变化 |
| 4.4 结论 |
| 第5章 主要结论和展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.1.1 超细炭黑的修饰、载铅及表征 |
| 5.1.2 载铅前后超细炭黑与溶菌酶相互作用的研究 |
| 5.1.3 载铅前后超细炭黑诱发小鼠脾细胞凋亡及氧化损伤的研究 |
| 5.2 论文的创新点 |
| 5.3 论文的不足和研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间的科研情况 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）9-（2-羟丙基）腺嘌呤-柱前衍生化-HPLC-FLD法检测3-氯-1,2-丙二醇（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 3-MCPD的物理、化学性质 |
| 1.2 3-MCPD形成的机理 |
| 1.2.1 酸水解产生 |
| 1.2.2 热处理产生 |
| 1.2.3 氯丙醇酯降解产生 |
| 1.3 3-MCPD的来源 |
| 1.4 3-MCPD的毒性 |
| 1.4.1 生殖毒性 |
| 1.4.2 遗传毒性 |
| 1.4.3 致癌性 |
| 1.5 3-MCPD的代谢途径 |
| 1.6 部分国家对3-MCPD的限量要求 |
| 1.7 减少或避免3-MCPD生成的方法 |
| 1.8 3-MCPD的萃取方法 |
| 1.8.1 固相萃取(SPE) |
| 1.8.2 固相微萃取(SPME) |
| 1.8.3 磁性固相萃取(MSPE) |
| 1.8.4 液-液萃取(LLE) |
| 1.9 3-MCPD的检测方法 |
| 1.9.1 气相色谱法(GC) |
| 1.9.2 气相色谱-质谱法(GC-MS) |
| 1.9.3 毛细管电泳-电导法(CE-CD) |
| 1.9.4 毛细管电泳-电化学法(CE-ED) |
| 1.9.5 分子印迹法(MIP) |
| 1.9.6 高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV) |
| 1.10 3-MCPD酯的简介 |
| 1.11 立题意义及背景 |
| 1.12 研究的主要内容 |
| 第2章 四种腺嘌呤类试剂衍生效果与荧光性能评价 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 氯乙醛及腺嘌呤类衍生试剂溶液的配制 |
| 2.3.2 高浓度衍生产物溶液的制备 |
| 2.3.3 衍生产物荧光光谱研究 |
| 2.3.4 四种腺嘌呤类衍生试剂的荧光效果比较及评价 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.4.1 衍生化原理 |
| 2.4.2 四种3-MCPD衍生物的制备 |
| 2.4.3 四种3-MCPD衍生物的质谱分析 |
| 2.4.4 四种3-MCPD衍生物的荧光强度与p H关系 |
| 2.4.5 四种3-MCPD衍生物的荧光强度与甲醇体积分数关系 |
| 2.4.6 四种3-MCPD衍生物的荧光强度与NaCl浓度关系 |
| 2.4.7 四种腺嘌呤类衍生试剂的衍生效果对比及评价 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 以9-(2-羟丙基)腺嘌呤为衍生试剂的HPLC-FLD法测定3-MCPD的参数优化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 HP-Ade作为衍生试剂空白峰的生成抑制探索 |
| 3.3.2 HP-Ade作为衍生试剂空白峰的生成抑制优化比较实验 |
| 3.3.3 最佳抑制空白峰的条件下比较体系及干扰物的液相分析结果,验证可行性 |
| 3.3.4 最佳抑制空白峰的条件测定3-MCPD条件优化实验 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.4.1 空白干扰峰生成及抑制探索实验结果 |
| 3.4.2 方法3和方法6衍生效果对比 |
| 3.4.3 空白峰生成最小化及3-MCPD衍生物峰生成最大化的优化实验 |
| 3.4.4 利用最佳抑制空白峰的条件比较体系及干扰物的液相分析结果,验证可行性 |
| 3.4.5 最佳抑制空白峰的条件测定3-MCPD条件优化实验 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 以9-(2-羟丙基)腺嘌呤为衍生试剂的HPLC-FLD法测定食用油中游离的3-MCPD |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 NaCl溶液的浓度对3-MCPD衍生化的影响探索 |
| 4.3.2 NaCl溶液的浓度对空白峰生成的影响探索 |
| 4.3.3 0.03 g/mL NaCl溶液体系下3-MCPD标准曲线的绘制(0.0-100.0ng/mL) |
| 4.3.4 食用油中游离3-MCPD的测定实验 |
| 4.4 实验结果与分析 |
| 4.4.1 不同浓度的NaCl溶液对3-MCPD衍生化及空白峰生成的影响 |
| 4.4.2 0.03 g/mL NaCl溶液体系下3-MCPD标准曲线的绘制结果 |
| 4.4.3 萃取时间的选择 |
| 4.4.4 加标回收率实验结果 |
| 4.4.5 不同食用油中游离3-MCPD的测定结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 荧光分光光度法检测环境水样中3-MCPD的探索 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 3-MCPD标准曲线的绘制—HPLC-FLD法 |
| 5.3.2 3-MCPD标准曲线的绘制—荧光分光光度法 |
| 5.3.3 HPLC-FLD法和荧光分光光度法的加标回收率实验 |
| 5.3.4 HPLC-FLD法和荧光分光光度法分别检测环境水中的3-MCPD |
| 5.4 实验结果与分析 |
| 5.4.1 HPLC-FLD法绘制3-MCPD标准曲线的结果 |
| 5.4.2 荧光分光光度法绘制3-MCPD标准曲线的结果 |
| 5.4.3 HPLC-FLD法和荧光分光光度法加标回收率的结果 |
| 5.4.4 HPLC-FLD法和荧光分光光度法分别检测环境水中3-MCPD的实验结果 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 酱油检测中三氯蔗糖的干扰、样品前处理方法探索 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与仪器 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 实验仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 检测方法 |
| 6.3.2 液-液萃取法提取酱油中3-MCPD的探索 |
| 6.3.3 酱油中3-MCPD加标回收率实验 |
| 6.3.4 目标峰的验证实验 |
| 6.3.5 9-(2-羟丙基)腺嘌呤与三氯蔗糖反应 |
| 6.3.6 3-MCPD与三氯蔗糖分离的探索 |
| 6.4 实验结果与分析 |
| 6.4.1 液-液萃取法提取酱油中3-MCPD的探索实验结果 |
| 6.4.2 酱油中3-MCPD加标回收率的测定结果 |
| 6.4.3 对目标峰进行验证实验结果 |
| 6.4.4 9-(2-羟丙基)腺嘌呤与三氯蔗糖反应结果 |
| 6.4.5 3-MCPD与三氯蔗糖分离的探索实验结果 |
| 6.5 本章小结 |
| 第7章 总结与展望 |
| 7.1 实验总结 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（5）拟南芥叶绿素合成基因CBD1的功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 叶色突变体的研究进展 |
| 1.1.1 叶色突变体的类型 |
| 1.1.2 叶色突变的产生途径 |
| 1.1.3 叶色突变的分子机制 |
| 1.2 叶绿体发育对叶色突变的影响 |
| 1.2.1 叶绿体进化 |
| 1.2.2 叶绿体发育 |
| 1.2.3 叶绿体结构 |
| 1.3 四吡咯生物合成对叶色突变的影响 |
| 1.3.1 叶绿素合成途径的酶促反应步骤 |
| 1.3.2 叶绿素合成途径的调控 |
| 1.4 质核信号传导对叶色突变的影响 |
| 1.4.1 细胞核与质体之间的基因交流 |
| 1.4.2 基因组解偶联突变体 |
| 1.4.3 镁卟啉介导的质核反向信号途径 |
| 1.4.4 其他因子介导的质核反向信号途径 |
| 1.5 叶绿体离子稳态对叶色突变的影响 |
| 1.5.1 叶绿体中镁离子对叶色的影响以及镁离子稳态的调控 |
| 1.5.2 叶绿体中铁离子对叶色的影响以及铁离子稳态的调控 |
| 1.6 叶色突变对光合作用的影响 |
| 1.6.1 叶色突变对光合结构的影响 |
| 1.6.2 叶色突变对光合蛋白与光合速率的影响 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 拟南芥材料 |
| 2.1.2 菌株及质粒 |
| 2.1.3 各种酶类及试剂、药品 |
| 2.1.4 研究中所用到的主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 拟南芥种子消毒和生长条件 |
| 2.2.2 拟南芥基因组DNA的提取以及突变体鉴定 |
| 2.2.3 基因克隆与载体构建 |
| 2.2.4 农杆菌转化侵染拟南芥 |
| 2.2.5 RNA的提取和荧光实时定量PCR |
| 2.2.6 拟南芥原生质体制备和转化及激光共聚焦显微观察分析 |
| 2.2.7 GUS表达体系的组织化学分析 |
| 2.2.8 拟南芥杂交实验 |
| 2.2.9 叶绿体透射电镜分析 |
| 2.2.10 叶绿素及叶绿素合成中间产物的测定 |
| 2.2.11 叶绿素荧光动力学参数测定 |
| 2.2.12 P700氧化还原动力学曲线 |
| 2.2.13 完整叶绿体与类囊体的提取 |
| 2.2.14 类囊体膜蛋白的制备 |
| 2.2.15 蓝绿温和胶(Blue-Native gel)电泳分析 |
| 2.2.16 可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析与银染 |
| 2.2.17 蛋白免疫印迹分析 |
| 2.2.18 MM281功能性回补实验 |
| 2.2.19 酵母双杂交 |
| 2.2.20 ICP含量测定 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 拟南芥CBD1基因的鉴定与功能分析 |
| 3.1.1 cbd1突变体的筛选鉴定与功能回补植株的获得 |
| 3.1.2 cbd1突变体的表型分析 |
| 3.1.3 CBD1蛋白的进化分析及功能预测 |
| 3.1.4 CBD1基因的共表达分析 |
| 3.1.5 CBD1蛋白的亚细胞定位分析 |
| 3.1.6 CBD1的表达模式分析 |
| 3.1.7 CBD1基因受光诱导表达 |
| 3.2 CBD1对叶绿素合成途径的影响 |
| 3.2.1 cbd1突变体中叶绿素合成途径关键基因的表达变化 |
| 3.2.2 cbd1突变体中叶绿素合成途径中间产物的变化 |
| 3.3 CBD1对光合作用的影响 |
| 3.3.1 CBD1对光系统组装的影响 |
| 3.3.2 CBD1对光合效率的影响 |
| 3.4 CBD1参与叶绿体金属离子稳态的调控 |
| 3.4.1 CBD1功能互补MM281沙门氏菌突变株 |
| 3.4.2 cbd1突变体中金属离子含量的测定 |
| 3.5 CBD1与GUN5的遗传互作 |
| 3.5.1 cbd1gun5双突变体的表型分析 |
| 3.5.2 cbd1gun5双突变体对叶绿素合成的影响 |
| 3.5.3 cbd1gun5双突变体对光系统组装的影响 |
| 3.5.4 cbd1gun5双突变体对叶绿体结构的影响 |
| 3.5.5 CBD1与GUN5重组蛋白在酵母双杂交系统中的互作 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 拟南芥CBD1参与植物叶绿素的生物合成途径 |
| 4.2 拟南芥CBD1与GUN5可能的作用机制 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间论文(待)发表情况 |
| 致谢 |
（6）钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 黑色素的简介 |
| 1.3 黑色素的合成 |
| 1.3.1 黑色素合成途径 |
| 1.3.2 黑色素合成相关的通路 |
| 1.3.3 钙铁元素对黑色素合成的影响 |
| 1.4 黑色素生成量的测定方法 |
| 1.4.1 HPLC方法 |
| 1.4.2 紫外-可见分光光度法 |
| 1.5 主要研究内容 |
| 1.6 本研究的创新性 |
| 第2章 低黑色素起点黑色素细胞生长的培养基组分的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 2.2.3 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞 |
| 2.3.2 乌骨鸡黑色素细胞最适细胞接种浓度研究 |
| 2.3.3 葡萄糖对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.4 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,FBS和卵黄总脂质对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.5 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,TPA和卵黄总脂质的乌骨鸡黑色素细胞生长曲线研究 |
| 2.3.6 低浓度葡萄糖(16.8 mM)背景下,FBS、卵黄总脂质、TyrNa2对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.7 钙、铁元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.8 MTT法测定乌骨鸡黑色素细胞存活率 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞形态观察 |
| 2.5.2 黑色素细胞数和OD值关系曲线 |
| 2.5.3 葡萄糖浓度对乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.4 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,FBS和卵黄总脂质对乌骨鸡黑色素细胞生长的促进作用 |
| 2.5.5 高浓度葡萄糖(25mM)和5%FBS培养背景下,TPA、卵黄总脂质的乌骨鸡黑色素细胞生长曲线 |
| 2.5.6 在低浓度葡萄糖(16.8 mM)背景下FBS、卵黄总脂质、TyrNa2 对乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.7 不同价态的Fe元素对低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.8 Ca元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 本章小结 |
| 第3章 钙铁元素对黑色素细胞迁移能力的影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 乌骨鸡黑色素细胞的培养 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 划痕实验检测钙铁对乌骨鸡黑色素细胞迁移影响研究 |
| 3.3.4 明胶酶谱检测乌骨鸡黑色素细胞基质金属蛋白酶的表达活性 |
| 3.4 统计学分析 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 细胞培养因子对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.2 钙对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.3 铁对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.4 维拉帕米和肌肽对钙铁促进黑色素细胞迁移作用的干预 |
| 3.5.5 明胶酶谱检测乌骨鸡黑色素细胞MMPs的表达活性 |
| 本章小结 |
| 第4章 乌骨鸡黑色素含量测定的方法学研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 仪器设备与试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 乌骨鸡黑色素的标准品的制备 |
| 4.3.2 乌骨鸡黑色素标准品红外图谱分析 |
| 4.3.3 两种溶解黑色素标品溶剂的比较 |
| 4.3.4 乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量测定及溶剂B的方法学考察 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 乌骨鸡黑色素标准品的制备 |
| 4.4.2 精制黑色素和黑色素标品的红外吸收图谱 |
| 4.4.3 两种溶解黑色素标品溶剂的比较 |
| 4.4.4 溶剂B溶解的乌骨鸡黑色素的含量测定方法学考察 |
| 本章小结 |
| 第5章 钙铁元素对黑色素细胞生物合成黑色素的影响研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 5.2.3 仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 黑色素细胞培养 |
| 5.3.2 酶学方法测定酪氨酸酶活性 |
| 5.3.3 乌骨鸡黑色素细胞内ROS含量的测定 |
| 5.3.4 实验分组 |
| 5.3.5 黑色素含量测定 |
| 5.3.6 DPPH清除能力的测定乌骨鸡细胞黑色素的抗氧化能力 |
| 5.3.7 乌骨鸡黑色素细胞钙离子水平检测 |
| 5.3.8 Ca、Fe元素对乌骨鸡黑色素细胞酪氨酸相关蛋白酶1(TRP1)表达量的影响 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 卵黄总脂质、TPA对乌骨鸡黑色素细胞黑色素合成的影响 |
| 5.4.2 不同培养基因子对乌骨鸡黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的影响 |
| 5.4.3 钙铁元素对乌骨鸡黑色素黑色细胞ROS含量的影响 |
| 5.4.4 钙、铁元素对黑色素合成量的影响以及其黑色素抗氧化能力的差别. |
| 5.4.5 钙、铁元素对酪氨酸相关蛋白酶1(TRP1)表达的影响 |
| 5.4.6 维拉帕米对黑色素细胞黑色素合成的干预作用 |
| 本章小结 |
| 第6章 卵黄总脂质、牛磺酸、柠檬酸锌对无糖和H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与设备 |
| 6.2.1 材料与试剂 |
| 6.2.2 仪器与设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 MTT法测定HUVEC-12 细胞的存活率 |
| 6.3.2 H_2O_2 和葡萄糖对HUVEC-12 细胞增殖的影响 |
| 6.3.3 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12 细胞存活率的影响 |
| 6.3.4 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对H_2O_2 和低浓度葡萄糖诱导HUVEC-12 细胞增殖抑制作用的影响 |
| 6.4 数据处理 |
| 6.5 结果与讨论 |
| 6.5.1 葡萄糖和H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤模型的建立 |
| 6.5.2 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12 细胞存活率的影响 |
| 6.5.3 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 6.5.4 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌联用对H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 6.5.5 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对无糖诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 进一步工作方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（7）B-酯酶检测方法的比较研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 农药残留及其危害 |
| 2 农药残留检测方法 |
| 2.1 高效液相色谱法(HPLC) |
| 2.2 气相色谱法(GC) |
| 2.3 毛细管电泳 |
| 2.4 超临界流体色谱(SFE) |
| 2.5 酶联免疫法 |
| 3 酶抑制法 |
| 3.1 酶抑制法的原理 |
| 3.2 酶的来源 |
| 3.2.1 动物酶源 |
| 3.2.2 植物酶源 |
| 3.3 酶抑制法的分类 |
| 3.1.1 试纸法 |
| 3.3.2 酶传感器 |
| 3.3.3 比色法 |
| 3.3.4 荧光分析法 |
| 4 环糊精及环糊精衍生物 |
| 5 本研究课题的目的和意义 |
| 第一章 B-酯酶酶学性质的研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 酶源 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 仪器及设备 |
| 1.1.4 主要试剂配制方法 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 比色法检测B-酯酶单因素实验 |
| 1.2.2 比色法检测花芸豆酯酶检测单因素实验 |
| 1.2.3 荧光法检测B-酯酶单因素实验 |
| 1.3 结果与分析 |
| 1.3.1 比色法检测B-酯酶单因素实验结果 |
| 1.3.2 比色法检测花芸豆酯酶单因素实验结果 |
| 1.3.3 荧光法检测B-酯酶单因素实验结果 |
| 1.4 本章小结 |
| 第二章 B-酯酶对农药敏感性的研究 |
| 2.1 材料与主要试剂 |
| 2.1.1 酶源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 |
| 2.1.4 主要试剂配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 比色法检测B-酯酶对农药的敏感性 |
| 2.2.2 荧光法检测B-酯酶对农药的敏感性 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 两种方法检测B-酯酶对农药的敏感性 |
| 2.3.2 两种方法检测B-酯酶对5种农药IC50值的比较 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 两种方法检测检出限的比较研究 |
| 3.1 实验材料与主要试剂 |
| 3.1.1 酶源 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及设备 |
| 3.1.4 主要试剂配制方法 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 两种方法测定电鳗AChE对5种农药的检出限 |
| 3.2.2 两种方法测定马血清BChE对5种农药的检出限 |
| 3.2.3 两种方法测定花芸豆酯酶对5种农药的检出限 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 两种方法测定电鳗AChE对5种农药的检出限结果 |
| 3.3.2 两种方法测定马血清BChE对5种农药的检出限结果 |
| 3.3.3 两种方法测定花芸豆酯酶对5种农药的检出限结果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 两种方法在实际应用中的研究探索 |
| 4.1 材料与主要试剂 |
| 4.1.1 酶源 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 |
| 4.1.4 主要试剂配制方法 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.2 荧光法在蔬菜样品中的应用 |
| 4.2.3 环糊精衍生物对荧光强度的增强研究 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.2 荧光法在蔬菜样品中的应用结果 |
| 4.3.3 环糊精衍生物对荧光强度的增强研究结果 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及科研成果 |
| 致谢 |
（8）氢化物发生—共振瑞利散射测定痕量锑锡（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 共振瑞利散射光谱分析 |
| 1.1.1 光的散射 |
| 1.1.2 共振瑞利散射光谱法概况 |
| 1.1.3 RRS在重金属分析中的应用 |
| 1.1.4 共振瑞利散射能量转移光谱分析 |
| 1.2 氢化物发生及其在分析技术中的应用 |
| 1.2.1 氢化物发生-分子光谱分析 |
| 1.2.2 氢化物发生-RRS分析法 |
| 1.3 硒分析进展 |
| 1.3.1 硒的特性 |
| 1.3.2 硒的分析方法概况 |
| 1.3.3 硒的氢化物分子光谱分析进展 |
| 1.4 锑分析进展 |
| 1.4.1 锑的特性 |
| 1.4.2 锑的分析方法概况 |
| 1.4.3 锑的氢化物发生-分子光谱分析进展 |
| 1.5 锡分析进展 |
| 1.5.1 锡的特性 |
| 1.5.2 锡的分析方法概况 |
| 1.5.3 锡的氢化物发生-分子光谱分析进展 |
| 1.6 本课题研究的共作内容 |
| 1.7 本课题研究的意义 |
| 参考文献 |
| 2 次亚磷酸钠还原反应-共振瑞利散射光谱测定硒 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与仪器 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 实验原理 |
| 2.3.2 共振瑞利散射光谱 |
| 2.3.3 定量分析条件的优化 |
| 2.3.4 共存物质的影响 |
| 2.3.5 工作曲线 |
| 2.3.6 样品分析 |
| 2.4 结语 |
| 参考文献 |
| 3 氢化物纳米反应-共振瑞利散射光谱测定痕量Sb(Ⅲ) |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 主要仪器与试剂 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 原理分析 |
| 3.3.2 光谱 |
| 3.3.3 扫描电镜 |
| 3.3.4 激光散射 |
| 3.3.5 分析条件优化 |
| 3.3.6 工作曲线 |
| 3.3.7 共存物质的影响 |
| 3.3.8 样品分析 |
| 3.4 结语 |
| 参考文献 |
| 4 氢化物纳米反应-共振瑞利散射光谱测定痕量Sn(Ⅱ) |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 主要仪器与试剂 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 实验原理 |
| 4.3.2 光谱 |
| 4.3.3 透射电镜 |
| 4.3.4 能谱 |
| 4.3.5 分析条件优化 |
| 4.3.6 工作曲线 |
| 4.3.7 共存物质的影响 |
| 4.3.8 样品分析 |
| 4.4 结语 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间已发表的论文 |
| 致谢 |
（9）速差动力学结合化学计量学应用于食品和环境中某些残留物质的分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 速差动力学结合化学计量学在食品和环境分析中的应用 |
| 1 引言 |
| 2 多元校正方法 |
| 3 人工神经网络 |
| 4 结语 |
| 5 参考文献 |
| 第二章 化学计量学-酶动力学分光光度法同时测定三种氨基甲酸酯类农药 |
| 1 引言 |
| 2 理论背景 |
| 3 实验部分 |
| 4 结果与讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第三章 化学计量学-动力学分光光度法同时测定三种四环素类抗生素 |
| 1 引言 |
| 2 理论背景 |
| 3 实验部分 |
| 4 结果与讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第四章 速差动力学-多元校正及人工神经网络测定克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇 |
| 1 引言 |
| 2 理论背景 |
| 3 实验部分 |
| 4 结果与讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第五章 荧光动力学结合中心组合优化条件设计同时测定水样中的毒死蜱和乙硫磷 |
| 1 引言 |
| 2 动力学理论 |
| 3 实验部分 |
| 4 结果与讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（10）不同强度聚焦超声结合原卟啉对离体培养S180肿瘤细胞的损伤作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 声敏剂与声动力学疗法 |
| 1.1 声敏剂 |
| 1.1.1 声敏剂种类 |
| 1.1.2 声敏剂改造 |
| 1.1.3 声敏剂的联合运用 |
| 1.1.4 5-ALA—卟啉类声敏剂的生物合成及富集 |
| 1.1.5 卟啉类声敏剂的亚细胞定位及其影响因素 |
| 1.2 5-ALA—卟啉类声敏剂的光动力学疗法 |
| 1.3 卟啉类声敏剂的声动力学疗法 |
| 1.4 声敏靶部位 |
| 1.4.1 细胞膜 |
| 1.4.2 线粒体 |
| 1.4.3 细胞核和DNA |
| 1.4.4 细胞骨架 |
| 1.4.5 其它靶分子 |
| 第2章 研究论文的立论依据、内容及目的意义 |
| 第3章 内、外源PpⅨ在离体培养S180肿瘤细胞内的定性、定量及亚细胞定位研究 |
| 3.1 外源性PpⅨ在离体培养S180肿瘤细胞内的代谢 |
| 3.1.1 PpⅨ荧光激发光谱和荧光发射光谱测定 |
| 3.1.2 PpⅨ标准曲线的绘制 |
| 3.1.3 外源性原卟啉Ⅸ在S180肿瘤细胞中的富集实验 |
| 3.2 δ-氨基乙酰丙酸诱导细胞生成的内源性PpⅨ在离体培养S180肿瘤细胞内的代谢及定性分析 |
| 3.2.1 δ-氨基乙酰丙酸诱导细胞生成的内源性PpⅨ在S180肿瘤细胞内的代谢 |
| 3.2.2 高效液相色谱法定性分析5-ALA诱导细胞生成的内源性原卟啉Ⅸ |
| 3.3 外源性PpⅨ在离体培养S180肿瘤细胞中的亚细胞定位研究 |
| 3.4 内源性PpⅨ在离体培养S180肿瘤细胞中的亚细胞定位研究 |
| 第4章 内、外源性原卟啉Ⅸ-声动力学疗法对离体培养S180肿瘤细胞增殖的影响及实验参数的确立 |
| 4.1 内、外源性原卟啉Ⅸ-声动力学疗法对离体培养S180肿瘤细胞增殖的影响 |
| 4.1.1 MTT法测定S180肿瘤细胞不同接种密度的生长曲线 |
| 4.1.2 内、外源性原卟啉Ⅸ-声动力学疗法对离体培养S180肿瘤细胞增殖的影响 |
| 4.2 超声结合不同浓度的原卟啉Ⅸ对离体培养S180肿瘤细胞的杀伤作用 |
| 4.3 不同强度的超声结合原卟啉Ⅸ对离体培养S180肿瘤细胞存活率的影响 |
| 第5章 外源性原卟啉Ⅸ—声动力学疗法对离体培养S180肿瘤细胞膜的损伤作用研究 |
| 5.1 超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜损伤的形态学观察 |
| 5.1.1 聚焦超声结合原卟啉Ⅸ杀伤S180肿瘤细胞的扫描电镜观察 |
| 5.1.2 聚焦超声结合原卟啉Ⅸ杀伤S180肿瘤细胞的透射电镜观察 |
| 5.2 超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜完整性和通透性作用的研究 |
| 5.3 超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜脂质过氧化程度的影响 |
| 5.4 超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞ATP酶活性的影响 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 图版及图版说明 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
四、用荧光分光光度法测定PBGD酶活性（论文参考文献）
- [1]南美白对虾无水保活及其生化和肉质的应激响应[D]. 管维良. 浙江大学, 2021
- [2]腈水解酶高通量筛选方法的研究进展[J]. 方佳丽,牛安娜,常尊学,苏昕. 沈阳药科大学学报, 2020(08)
- [3]载铅超细炭黑对溶菌酶和脾细胞毒性效应与机理的研究[D]. 曲文君. 山东大学, 2020
- [4]9-（2-羟丙基）腺嘌呤-柱前衍生化-HPLC-FLD法检测3-氯-1,2-丙二醇[D]. 胡金华. 武汉轻工大学, 2020(06)
- [5]拟南芥叶绿素合成基因CBD1的功能研究[D]. 张弛. 南京大学, 2017(04)
- [6]钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预[D]. 徐德利. 南昌大学, 2016(05)
- [7]B-酯酶检测方法的比较研究[D]. 陈泠伶. 西华大学, 2016(12)
- [8]氢化物发生—共振瑞利散射测定痕量锑锡[D]. 李院. 广西师范大学, 2015(12)
- [9]速差动力学结合化学计量学应用于食品和环境中某些残留物质的分析[D]. 邓娜. 南昌大学, 2010(04)
- [10]不同强度聚焦超声结合原卟啉对离体培养S180肿瘤细胞的损伤作用研究[D]. 仝万艳. 陕西师范大学, 2009(06)