一、绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响（论文文献综述）
李娜[1]（2020）在《绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究》文中研究表明绵羊卵裂期早期胚胎经历了受精卵形成、合子基因组激活、卵裂球压实等四个阶段,涉及胚胎转录结构的剧烈变化,研究8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段绵羊体外受精胚胎转录组,对了解早期胚胎生长发育规律十分重要。本研究为获得绵羊体外受精胚胎样本进行转录组测序,对绵羊体外受精培养体系进行优化;分别用单细胞裂解液和PicoPure?RNA Isolation Kit获得RNA,筛选有效单个胚胎RNA获取方法,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,采用Illumina HiSeq Xten高通量测序技术进行转录组测序;筛选不同卵裂期胚胎差异表达基因,进行GO功能分析及KEGG分析。获得结果如下:1.在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加10μg/mL的LH卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,显着高于添加0μg/mL、5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL LH的成熟培养液（P<0.05）。2.用单细胞裂解液裂解绵羊单个胚胎,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA,检测PCR产物浓度均在60 ng以上,cDNA片段大小集中分布在1kbp2 kbp之间,成功构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,而采用PicoPure?RNA Isolation Kit提取单个胚胎RNA,检测RNA质量,RIN<1.5且28S/18S<0.2,未满足cDNA扩增要求,无法构建转录组测序文库。3.用DEGSeq软件分析差异表达基因,以FC>2or<0.5且Q-value<0.05为筛选标准,8-细胞VS 16-细胞筛选到170条DEGs,其中上调126条,下调44条;16-细胞VS桑椹胚筛选找到417条DEGs,其中上调47条,下调370条;8-细胞VS桑椹胚筛选到126条DEGs,其中上调36条,下调90条。对差异表达基因进行GO生物功能分析,主要涉及核苷酸化合物合成、代谢调节、有机环化合物生物合成、RNA代谢、化合物代谢等生物过程。对差异表达基因进行KEGG分析结果显示,8-细胞VS 16-细胞DEGs参与到126条通路中,显着富集在癌症中转录失调、Hippo信号通路等11条代谢通路;16-细胞VS桑椹胚DEGs参与到206条代谢通路,显着富集在剪接体、调控干细胞多能性的信号通路2条代谢通路;8-细胞VS桑椹胚DEGs无显着富集代谢通路。
瞿静雯,王健,李拥军,王强,尹修远[2]（2019）在《绵羊卵母细胞成熟培养的研究进展》文中研究指明卵母细胞培养是胚胎工程的重要组成部分,是体外受精、胚胎移植及转基因技术的基础。不断完善卵母细胞成熟培养条件,可以大大提高卵母细胞体外成熟的质量,充分发挥绵羊卵母细胞的繁殖潜力。绵羊卵母细胞体外成熟培养受到多种因素的限制,其中培养液成分包括基础培养基、血清、激素、卵泡液、生长因子、抗氧化物和维生素等6个方面。笔者对绵羊卵母细胞成熟培养的培养液成分相关研究进展进行综述,旨在提高绵羊卵母细胞体外成熟培养的质量和促进体外胚胎技术研究。
朱肖亭[3]（2016）在《绵羊胞质内单精子注射（ICSI）的研究》文中研究表明本实验重点研究了影响绵羊胞质内单精子注射（ICSI）中的因素,以期优化绵羊ICSI的操作技术和体外成熟体系,为开展发育机理研究及提高绵羊ICSI效率提供进一步的技术支持。研究结果主要包括如下几个方面:（1）不同季节对卵母细胞体外培养的影响。结果表明季节对卵母细胞的总数量没有影响。春季和秋季获得的可用卵母细胞数显着高于夏季和冬季。就成熟率而言,春季、秋季和冬季差异不显着。综合回收率和成熟率,秋季是绵羊卵母细胞体外培养的最佳时节,而夏季不适绵羊卵母细胞的采集培养。（2）不同成熟时间（2022h、2224h、2426h、2628h）对ICSI的影响。结果显示卵母细胞的卵裂率随成熟时间的增加而逐渐提高;卵母细胞成熟2224 h桑囊率最高,之后开始降低。因此,卵母细胞成熟2224h是进行ICSI的最佳时机。（3）高渗操作液对ICSI的影响,结果显示高渗操作液能显着提高操作成功率,但对卵裂率（43.9%、36.5%;P>0.05）和桑囊率（41.4%、38.7%;P>0.05）差异不显着。（4）第一极体位置（6点和12点）对ICSI的影响,结果发现极体位置对ICSI卵裂率（32.5%vs 34.5%,P>0.05）和桑囊率（33.6%、33.3%;P>0.05）都没有显着影响。（5）超声波处理不同状态精子（鲜精和冻精）对ICSI的影响。结果表明超声波处理鲜精和冻精对卵母细胞的卵裂率（39.1%vs 37.4%,P>0.05）和桑囊率（33.7%vs 35.1%,P>0.05）均差异不显着。（6）精子不同处理方式（NaOH和超声波处理）对ICSI的影响,结果表明两种处理方式对卵母细胞的卵裂率（37.4%vs 46.6%,P<0.05）差异显着;NaOH处理组的桑囊率（52.1%）差异显着高于超声波处理组（35.1%）。（7）精子共孵育对ICSI卵发育的影响。以NaOH处理精子ICSI作为对照,NaOH处理精子与质粒共孵育后对ICSI胚的卵裂率（37.9%vs 46.6%,P>0.05）和桑囊率（45.3%vs52.1%,P>0.05）的影响差异不显着。（8）非共培养和卵丘细胞共培养系统对ICSI胚的影响。结果显示共培养和非共培养对卵裂率（41.7%vs 44.0%,P>0.05）和桑囊率（41.8%vs 35.7%,P>0.05）影响不显着。
赵佳[4]（2016）在《VEGF在绵羊未成熟和成熟睾丸中的表达差异研究》文中研究说明绵羊的繁殖性状是重要经济性状之一,公羊的繁殖性状主要与羊睾丸有直接关系。VEGF可以诱导内皮细胞增殖,促进细胞迁移和抑制细胞凋亡,从而发挥促进血管生成和血管生成调控的核心作用。是已发现的最有力的刺激血管新生和血管内皮细胞生长的因子。在雄性生殖系统中,VEGF可以通过受体介导的方式发挥生物学作用,参与生殖系统中各器官的血管新生和改变血管通透性。本研究对比性成熟前后VEGF表达差异研究,从睾丸血管新生角度揭示睾丸内部组织的动态成熟过程。旨在探讨VEGF在公羊睾丸组织发育和精子发生过程的作用机制,为公羊的早期利用与调控其繁殖机能提供理论依据。1.本试验采用荧光定量PCR法对乾华肉用美利奴羊核心群中2月龄和12月龄公羊睾丸中VEGF基因mRNA表达量差异进行检测,结果显示:VEGF基因mRNA在羊性成熟前后睾丸中均有表达,但表达水平有一定差异,12月龄公羊睾丸中VEGF基因的相对表达量显着高于2月龄（P<0.05）。结果表明VEGF可能对羊睾丸微血管形成起重要作用并参与了雄性睾丸的生长发育及精子发生。2.应用SP免疫组化分析VEGF在性成熟前后睾丸在组织中的定位,结果显示:VEGF在性成熟前后睾丸中均有表达,性成熟前期VEGF表达于精原细胞、初级精母细胞及Sertoli细胞、Leydig细胞;性成熟期VEGF表达于各级生精细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞。表明VEGF以自分泌或旁分泌的方式影响睾丸内微环境,为精子发生提供适宜环境。VEGF在各级精子的表达说明精子本身也是VEGF的靶细胞,VEGF直接参与精子发生。3.利用western blot方法对VEGF在性成熟前后绵羊睾丸中的标的差异进行检测,结果显示12月龄绵羊睾丸中VEGF的表达量显着高于2月龄（P<0.05）。结果表明:VEGF在睾丸发育以及精子发生中不仅可以旁分泌调节睾丸内部微循环,也可以自分泌或旁分泌方式影响生殖细胞的增殖分化和生精,并参与精子的睾丸后成熟过程。
倪艺娜,王生奎,权国波,洪琼花[5]（2015）在《山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展》文中研究表明卵母细胞体外成熟（IVM）是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。
柳海星[6]（2013）在《转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化》文中认为人血清白蛋白（Human serum albumin, HSA）是迄今为止产量最大、用量最大的蛋白质药物。可是现在的生产方式主要是人的血液通过分级过滤获得,产量有限,而且因为血浆来源复杂,容易导致污染。因此,通过转基因技术构建乳腺表达载体,利用体细胞克隆技术得到分泌含人血清白蛋白乳汁的转基因克隆动物,并从动物乳汁中提取人血清白蛋白,是解决人血清白蛋白供应短缺的有效方法。乳腺生物反应器生产人血清白蛋白具有生产成本低、产品产量高、活性高、易于纯化等优点。制约转基因乳腺生物反应制药的主要因素是体细胞核移植技术效率低下。因此,本研究以延边奶山羊和本地绵羊为研究对象,对卵母细胞体外成熟、延边奶山羊-绵羊重构胚胎的构建及体外发育进行了研究,以期提高核移植效率,为以后得到表达人血清白蛋白的转基因延边奶山羊奠定坚实的基础。本研究共分为三个部分,第一部分进行了不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响的研究；第二部分进行了转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建研究；第三部分是表没食子儿茶素没食子酸酯（Epi-gallocatechin-3-gallate, EGCG）对转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚体外发育质量的影响。主要研究结果如下：1.在绵羊卵母细胞体外成熟培养过程中,核成熟抑制剂HX、IBMX最适宜的添加浓度分别为2mM和0.2mM,抗氧化剂最佳添加量,除了半胱氨酸为0.6mM、 EGCG为5μM之外,其余三种β-ME、VC、VE最佳添加量均为100μM；2.盲吸去核法或化学辅助去核法去核,重构胚的卵裂率及囊胚率没有显着差异,但化学辅助去核法（0.2μg/mL的Deme处理0.5h）去核率为100%,可以高效快速地去核,且不影响重构胚的早期发育；3.延边奶山羊-绵羊重构胚的适宜电融合参数为2个120V,40μs次的电脉冲,适宜激活方法为Ion预激活5分钟,6-DMAP激活2h；4.重构胚体外培养时EGCG的适宜添加浓度为15μM,适宜添加时间为IVM和重构胚体外培养1-2天。
赛务加甫[7]（2007）在《提高绵羊体细胞核移植效率的研究》文中指出本研究对绵羊卵母细胞体外成熟、卵母细胞冷冻保存、卵母细胞孤雌激活、绵羊同种和异种体细胞核移植及重构胚胎体外培养等关键技术进行了试验分析,以期提高绵羊体细胞核移植的效率,建立完善的核移植技术体系,为进一步获得体细胞克隆绵羊和异种克隆个体提供技术支撑。本研究内容包括以下几个方面:（1）在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加孕酮等某些影响体外成熟的成份,确定绵羊卵母细胞的最佳成熟方案。（2）并通过对比不同冷冻保护剂对卵母细胞的冷冻保存效果,为核移植操作批量提供成熟的卵母细胞。（3）采用胞质注射法,建立精子提取物激活卵母细胞的方法,并且与离子霉素结合6-DMAP激活法和电激活法进行了比较,筛选出适宜激活方法。（4）体外分离培养得到道赛特绵羊和莎能奶山羊的耳皮肤成纤维样细胞,对绵羊皮肤成纤维细胞的生物学特性和不同细胞因子对其生长增殖的影响进行了研究,并对绵羊成纤维细胞和山羊成纤维细胞分别进行体外传代及冻存,为绵羊体细胞核移植和绵羊-山羊种间核移植试验提供了供体细胞。（5）绵羊孤雌激活胚、绵羊重构胚和绵羊-山羊种间重构胚分别置于不同的培养系统中培养,优化绵羊胚胎体外体系,增加胚胎的体外发育潜力。主要研究结果如下:1.绵羊卵母细胞体外成熟基础液中分别添加5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%发情牛血清（OCS）、5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%胎牛血清（FBS）、0.075 IU/mL HMG+OCS和0.075 IU/mL HMG+10% FBS,结果表明成熟液中添加OCS更有利于卵母细胞的成熟;添加5%～10%的BFF能够提高卵母细胞的成熟率,但20%BFF卵母细胞的体外成熟率下降;培养液中分别添加0.1μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL和2.0μg/mL孕酮,结果表明孕酮的最适添加剂量为0.5μg/mL。结果表明绵羊卵母细胞的体外成熟培养液组成为M199+10 mmol/L Hepes+0.38 mmol/L丙酮酸钠+ 25 mmol/L谷氨酰胺+1μg/mL 17β雌二醇（17β-E2）+5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%OCS+0.5μg/mL孕酮时其体外成熟培养效果最好。2.采用程序冷冻法对处于不同发育时期的绵羊卵母细胞进行冷冻保存,冷冻液Ⅰ～冷冻液Ⅳ对同一时期卵母细胞冷冻解冻后的形态正常率、卵裂率和桑囊胚发育率均无显着影响,而冷冻液Ⅳ体外成熟24 h冷冻解冻后的卵母细胞发育率显着高于GV期和体外成熟10 h的卵母细胞,说明用乙二醇（EG）作为冷冻保护剂,添加0.1 mol/L海藻糖较合适对成熟培养24 h的绵羊卵母细胞进行冷冻保存;-6.5℃植冰时冷冻卵母细胞囊胚发育率显着高于其他组。采用玻璃化冷冻方法对绵羊GV期到体外成熟培养24 h卵母细胞进行冷冻保存试验证实,以玻璃化冷冻液Ⅱ作为冷冻剂,体外成熟培养24 h卵母细胞的卵裂率和囊胚发育率最好,不经过成熟培养的卵母细胞玻璃化冷冻效果最差,认为添加0.1 mol/ L海藻糖来进行卵母细胞的玻璃化冷冻可以起到保护作用,卵母细胞冷冻解冻后可以用作受体胞质进行核移植,重构胚的发育能力受冷冻处理的影响不显着。3.对绵羊卵母细胞以连续3次120 v/mm的直流脉冲进行电激活获得最佳激活效果,囊胚发育率显着高于脉冲1次和2次（P<0.05）;用分别注射不同剂量的精子提取物,对绵羊卵母细胞进行孤雌激活,结果表明最佳注射剂量为向每个卵母细胞注入精子提取物3 pL;分别用电激活法,离子霉素联合6-DMAP法和精子提取物胞质内注射法对绵羊卵母细胞进行激活,结果表明电脉冲的激活效果显着低于后二者的效果,且差异显着,精子提取物和离子霉素联合6-DMAP法的囊胚率差异不显着,均可以用于绵羊卵母细胞的激活。4.高糖DMEM较适宜于绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养和继代培养。以DMEM+50% NCS（new - born calf serum）,添加10% DMSO为冻存保护剂,进行冷冻保存的无角道赛特绵羊皮肤成纤维细胞,解冻细胞经体外56次传代培养,细胞形态维持在初始状况,保持了良好的遗传特性;添加EGF和胰岛素对绵羊皮肤成纤维细胞的生长均有促生长作用。5.卵母细胞体外成熟培养时间分别为1517 h、1921 h与2325 h时,随着培养时间的增加成熟率也增加,卵母细胞去核成功率随着成熟时间的延长而下降,试验认为卵母细胞体外成熟1921 h,既可以保证高的去核成功率,又可以保证卵母细胞较高的成功率,有利于提供充足的卵源;不经血清饥饿处理的供体细胞采用胞质注射法构建克隆胚,其胚胎发育率略高于血清饥饿处理组,但差异不显着。试验认为体外成熟培养1921 h的卵母细胞可以作为核移植受体细胞,未经血清饥饿处理的成纤维细胞作为供体细胞进行核移植,可以获得较高的重构胚胎发育率。6.采用胞质内注射法构建绵羊皮肤纤维细胞重组胚,胚胎经离子霉素联合6-DMAP激活后,其细胞融合率、卵裂率和囊胚发育率均高于电融合法,同时结果表明重构胚用离子霉素联合6-DMAP或精子提取物激活后,卵裂率和囊胚发育率相近,其中精子提取物的激活效果优于离子霉素激活法;激活间隔时间研究结果证实,卵母细胞注核后经体外培养3～4 h后再激活,可以获得较高的激活率。7.用冷冻的山羊成纤维细胞可以成功构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,种间体细胞核移植胚能够进行正常的早期发育,种间重构胚经离子霉素联合6-DMAP或者胞质注射精子提取物激活后,卵裂率和囊胚发育率差异不显着（P>0.05）;用电脉冲融合法构建异种核移植胚胎时,其融合率、卵裂率和囊胚发育率均低于胞质注射法;不同山羊供体细胞进行山羊-绵羊异种核移植胚胎构建时,血清饥饿处理与否对种间核移植囊胚率无显着影响,表明山羊皮肤成纤维细胞可以不经过血清饥饿处理直接进行核移植。8.联合使用培养液能改善绵羊同种和异种重构胚的发育。即使用CR1aa+BSA培养重构胚3 d,再用SOFaa+5%FBS继续培养,获得的重构胚囊胚发育率较高。在胚胎培养液中添加孕酮可在一定程度上提高重构胚的卵裂率和囊胚率。其中以2.0和4.0μg/mL孕酮组的囊胚率最高,与对照组和其他孕酮浓度组差异显着。发现共培养体系对绵羊同种核移植重构胚的发育有显着的影响,而且在3 d更换1次新的饲养细胞单层对重构胚的发育有明显的促进作用。
张晓建[8]（2005）在《绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植》文中认为哺乳动物体细胞核移植是一项复杂而有序的操作过程。本文从不同方面研究了绵羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活以及重构胚的构建过程,建立了一套比较稳定的核移植体系,其结果如下: 1. 分析了EGF 不同添加量、FSH:LH 的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明:（1）添加30ng/ml EGF 显着高于其他试验组的成熟率（85.0% vs 60.0%, 71.7%, 72.7%, P﹤0.05）,并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;（2）成熟液中添加FSH 1μg/ml,LH 5.0IU/ml成熟率最高;（3）在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显着高于小卵泡液的20%添加组（78.6% vs 36.5%,P﹤0.01）,显着高于小卵泡液的3%添加组和未添加组（78.6% vs60.0%, 67.5%, P<0.05）。2. 比较了不同发育时期卵母细胞进行OPS 玻璃化冷冻效果及其对以后发育的影响。研究发现,成熟培养0h（GV 期）、16h、24h、26h的卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后形态正常率差异不显着（P>0.05）,培养24h卵母细胞冷冻保存后,卵裂率、囊胚率与培养0h、16h、26h试验组差异显着（38.3% vs 13.3%、26.7%、28.3%;13.0% vs 0%、6.3%、5.9%,P<0.05）,而培养16h、26h两个试验组之间差异不显着（P>0.05）。结果表明:成熟培养24h的卵母细胞OPS玻璃化冷冻效果最好,成熟培养16h、26h 次之,而不经过成熟培养的卵母细胞玻璃化冷冻效果最差。3. 研究了不同化学激活方法对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响。在囊胚率上,Ionomycin联合6-DMAP 与联合6-DMAP +CB差异不显着,而与联合CB 组差异显着（P<0.05）,与单独Ionomycin 激活差异极显着（P<0.01）;乙醇联合6-DMAP+CB与联合6-DMAP、CB 差异显着（P<0.05）,而与单独乙醇激活差异极显着（P<0.01）。结果表明: Ionomycin+6-DMAP 、Ionomycin+6-DMAP +CB与乙醇+6-DMAP +CB在绵羊卵母细胞孤雌激活上都可获得较好的效果,其中以乙醇+6-DMAP +CB组为最佳。4. 比较了不同电激活参数对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响。结果发现:1.2 Kv/cm 的直流脉冲具有最佳激活效果,与1.6 Kv/cm 组差异不显着,但与0.8 Kv/cm、2.0 Kv/cm 组在卵裂率、囊胚率上差异显着。脉冲次数3 次效果最好,其卵裂率、囊胚率显着高于2 次脉冲（ P<0.05 ）,与1 次脉冲差异极显着（P<0.01）。
吕丽华[9]（2004）在《山羊胚胎体外培养体系的优化以及胚胎干细胞分离培养技术的研究》文中研究说明本文研究山羊卵母细胞体外培养、体外受精及胚胎体外培养程序的优化,目的是为建立一套完善的山羊胚胎体外生产体系。从而为该技术走出实验室,在实践中得以应用提供理论依据。同时探讨山羊胚胎干细胞的分离培养技术,为核移植、转基因等胚胎工程后技术的应用奠定基础。试验一研究山羊卵母细胞体外成熟的培养方法,以提高山羊卵母细胞的成熟率。使用微滴法培养,探讨山羊卵母细胞的回收、成熟液的调整对比、添加不同激素、以及不同抗氧化物质等对山羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,选用胞质均一致密,外围至少有3 层以上卵丘细胞包裹的A 级卵母细胞,添加浓度为1 μg/ml 的E 2、5 μM 的?-ME,成熟培养27h 可显着提高卵母细胞体外培养的成熟率。使用国产绒促激素完全可以代替进口的FSH 和LH 用于山羊卵母细胞体外成熟培养,在相同效果的前提下可大大降低成本。试验二研究山羊体外受精条件的优化,为提高体外成熟卵母细胞的受精质量和数量提供理论基础。比较体外受精方法,不同获能物质的影响表明不同精子获能中,肝素效果比较稳定。Percoll 法处理精子卵裂率要显着高于上浮法,但是囊胚率和囊胚细胞数并没有提高。上浮法的精子镜检活力要好于Percoll 法分离的精子。但是,总体受精率、发育率还很低。试验三通过优化培养程序,筛选培养液,以建立适合山羊胚胎体外发育的培养体系。通过共培养方法对共培养体系、换液程序、以及不同培养液的研究表明,在山羊胚胎培养中,基础培养液选用配制简单的SOF（CR1 也可使用）,添加BSA/FCS,并采用正确换液程序,即48h 前是SOF+BSA,之后换为SOF+FCS 可获得理想的囊胚率和卵裂率。共培养条件下颗粒细胞和输卵管细胞对胚胎的发育并没有明显差异,但就发育率而言,显着优于无共培养体系。由此,说明共培养细胞类型对胚胎发育影响不大,但可以很好地克服胚胎的816-细胞阻滞。试验四利用透射电镜研究山羊体内胚和体外胚的超微结构,旨在对体外胚胎质量及其培养体系进行评价,为进一步提高体外胚胎的质量提供超微结构方面的理论依据。结果表明山羊体外胚胎质量要比体内发育胚差,包含有大量脂滴、畸形线粒体以及空泡化严重、细胞间隙连接较少且松散、核质比下降等。试验五以体内受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚三种不同来源的囊胚为材料,分离山
布赫,王建国,旭日干[10]（2002）在《绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响》文中指出目的 利用在培养液中添加绵羊卵泡液和次黄嘌呤 ,抑制卵母细胞GVBD发生 ,延长转录活性 ,从而使卵母细胞真正成熟 ,提高胚胎质量及生产效率。方法 利用体外成熟技术对有屠宰采集的绵羊卵母细胞进行培养 ,培养液中添加卵泡液及次黄嘌呤 ,检查成熟效果。结果 将卵母细胞培养在 5 0 %和 10 0 %的卵泡液中 ,2 4h后处于GV期的卵母细胞分别为 19% （8 4 2 ）和 33 3% （13 39）。在含有 4mmol L次黄嘌呤的培养液中 ,2 4h后有2 1 6 % （16 74 ）的卵母细胞处GV期 ,而对照组中只有 6 % （3 5 0 ） ,经过次黄嘌呤处理的卵母细胞多数都停滞于PⅠ期（44 6 % ,33 74 ）。在 4mmol L次黄嘌呤培养液中添加FSH并未使受到抑制的卵母细胞诱导成熟。结论 卵泡液和次黄嘌呤只能在有限的程度上抑制减数分裂的重新启动 ,并对减数分裂的全过程都有影响 ,这种影响程度与抑制因子的浓度相关 ,存在明显的剂量效应。
二、绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响（论文提纲范文）
（1）绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 早期胚胎基因表达 |
| 1.1.1 早期胚胎母源基因表达 |
| 1.1.2 早期胚胎DNA甲基化基因表达 |
| 1.1.3 早期胚胎发育阻滞 |
| 1.2 单细胞转录组技术 |
| 1.2.1 单细胞RNA-Seq技术 |
| 1.2.2 单细胞RNA-Seq技术在早期胚胎中的应用 |
| 1.3 绵羊体外胚胎的生产 |
| 1.3.1 卵母细胞质量对绵羊体外胚胎培养的影响 |
| 1.3.2 促性腺激素对绵羊体外胚胎培养的影响 |
| 1.4 研究目的意义 |
| 1.5 技术路线 |
| 第2章 促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 主要试剂配制 |
| 2.1.3 试验方法 |
| 2.1.4 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度LH对 COCs成熟率的影响 |
| 2.2.2 不同浓度LH对卵裂率的影响 |
| 2.2.3 不同浓度LH对桑葚胚率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 Smart-Seq2 技术构建绵羊单个胚胎测序文库 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂和仪器 |
| 3.1.2 试验设计 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 PicoPure?RNA Isolation Kit提取RNA质量检测 |
| 3.2.2 单细胞裂解液获取RNA经 Smart-Seq2 扩增产物质量检测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因筛选及功能注释研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 绵羊8-细胞、16-细胞、桑椹胚转录组测序数据质量分析 |
| 4.2.2 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚基因表达水平分析 |
| 4.2.3 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚部分基因表达量分析 |
| 4.2.4 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因筛选 |
| 4.2.5 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因GO富集分析 |
| 4.2.6 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异基因KEGG通路分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 差异表达基因及GO功能分析 |
| 4.3.2 早期胚胎发育相关基因分析 |
| 4.3.3 KEGG通路分析 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）绵羊卵母细胞成熟培养的研究进展（论文提纲范文）
| 1 基础培养液对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 2 血清对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 3 激素对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 4 卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 5 生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 5.1 表皮生长因子 |
| 5.2 转化生长因子 |
| 5.3 胰岛素样生长因子 |
| 5.4 血管内皮生长因子 |
| 6 抗氧化物和维生素对绵羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 7 小结与展望 |
（3）绵羊胞质内单精子注射（ICSI）的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 缩略语 |
| 摘要 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 绵羊卵母细胞体外成熟 |
| 1.2 卵母细胞成熟影响因素 |
| 1.2.1 季节和年龄、卵巢大小 |
| 1.2.2 卵母细胞的获取 |
| 1.2.2.1 卵母细胞的储存温度、采集方法及时间 |
| 1.2.2.2 卵母细胞形态和卵泡的大小 |
| 1.2.3 培养温度和时间 |
| 1.2.4 培养基添加的成分 |
| 1.2.4.1 血清 |
| 1.2.4.2 激素 |
| 1.2.4.3 卵泡液 |
| 1.2.4.4 生长因子和细胞因子 |
| 1.2.4.5 抗氧化物质 |
| 1.3 哺乳动物卵母细胞成熟的一般过程和鉴定 |
| 1.3.1 成熟的一般过程 |
| 1.3.2 卵母细胞成熟的鉴定 |
| 1.4 胞质内单精子注射（ICSI） |
| 1.4.1 胞质内单精子注射的研究简史 |
| 1.4.2 卵子状态对ICSI的影响 |
| 1.4.3 精子对ICSI的影响 |
| 1.4.3.1 精子来源和状态 |
| 1.4.3.2 精子的预处理 |
| 1.4.4 卵母细胞的激活机制 |
| 1.4.5 ICSI卵的人工激活 |
| 1.4.6 显微操作技术 |
| 1.4.7 第一极体的位置对ICSI的影响 |
| 1.4.8 ICSI技术的应用前景及存在问题 |
| 2 引言 |
| 3 材料和方法 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试剂药品 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要溶液 |
| 3.2 实验方法和设计 |
| 3.2.1 卵巢的清洗 |
| 3.2.2 卵母细胞的采集 |
| 3.2.3 卵母细胞的分级 |
| 3.2.4 卵母细胞体外成熟 |
| 3.2.5 卵母细胞成熟的鉴定 |
| 3.2.6 颗粒细胞单层的制备 |
| 3.2.7 精子处理: |
| 3.2.8 显微操作针的制备 |
| 3.2.8.1 制作显微操作针前的玻璃管处理 |
| 3.2.8.2 拉针 |
| 3.2.8.3 制作注射针 |
| 3.2.8.4 持卵针的制作 |
| 3.2.9 操作盘的准备 |
| 3.2.10 精子的注射 |
| 3.2.11 ICSI卵的激活 |
| 3.2.12 ICSI卵的培养 |
| 3.2.13 数据分析 |
| 3.3 实验设计 |
| 3.3.1 比较不同季节对绵羊卵母细胞的数量和成熟质量的影响 |
| 3.3.2 比较不同成熟时间对ICSI的影响 |
| 3.3.3 比较高渗操作液对ICSI的影响。 |
| 3.3.4 第一极体位置对ICSI的影响 |
| 3.3.5 比较精子预处理对ICSI的影响 |
| 3.3.6 比较精子共孵育和非共孵育对胚胎发育的影响 |
| 3.3.7 培养系统对ICSI胚发育的影响 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 不同季节采卵对绵羊卵母细胞获得数和体外成熟的影响 |
| 4.2 卵母细胞成熟时间对绵羊ICSI的影响 |
| 4.3 操作液不同渗透压对ICSI注射效率的影响 |
| 4.4 第一极体的位置对绵羊ICSI的影响 |
| 4.5 超声波处理不同状态精子对ICSI卵的影响 |
| 4.6 精子不同预处理方法对 ICSI 的影响 |
| 4.7 培养系统对ICSI胚发育的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 不同季节对采集卵母细胞的数量和质量的影响 |
| 5.2 卵母细胞成熟时间对ICSI的影响 |
| 5.3 高渗操作液对显微操作及ICSI卵发育的影响 |
| 5.4 第一极体位置对ICSI注射的影响 |
| 5.5 不同状态精子处理对ICSI的影响 |
| 5.6 精子不同方法预处理和外源 DNA 共孵育对 ICSI 的影响 |
| 5.7 培养系统对绵羊ICSI胚发育的影响 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| ABSTRACT |
（4）VEGF在绵羊未成熟和成熟睾丸中的表达差异研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 文献综述一 羊的生殖生理与繁殖技术的研究概述 |
| 一.羊的生殖生理 |
| 二.羊的人工授精 |
| 三.胚胎移植 |
| 文献综述二 VEGF的研究进展 |
| 2.1 VEGF的发现 |
| 2.2 VEGF家族及亚型 |
| 2.3 VEGF受体 |
| 2.4 VEGF与雄性哺乳动物的生殖相关 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 第二章 试验结果与分析 |
| 1 荧光定量PCR结果 |
| 2 免疫组化结果 |
| 3 Western blot结果 |
| 第三章 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（5）山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展（论文提纲范文）
| 1 影响卵母细胞体外成熟效率的因素 |
| 1.1 卵母细胞体外成熟能力 |
| 1.1.1 卵母细胞来源 |
| 1.1.2 卵巢运送时间与温度 |
| 1.2 卵母细胞体外成熟培养条件 |
| 1.3 成熟培养体系 |
| 1.3.1 基础培养基 |
| 1.3.2 血清 |
| 1.3.3 生长因子 |
| 1.3.4 卵泡液 |
| 1.3.5 激素 |
| 1.3.6 抗氧化剂 |
| 2 山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展 |
| 2.1 无血清培养体系的发展 |
| 2.2 核成熟抑制剂的添加 |
| 3 存在的问题 |
| 3.1 卵母细胞体外成熟培养体系的标准化这实施 |
| 3.2 体外成熟卵母细胞质量低下 |
| 3.3 山羊卵母细胞体外成熟调控机制不明 |
| 4 展望 |
（6）转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 前言 |
| 第一章 不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验方案 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响 |
| 2.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响 |
| 3.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验方案 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同去核法对核移植效率的影响 |
| 2.2 不同电融合方式对核植效率的影响 |
| 2.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同去核法对核移植效率的影响 |
| 3.2 不同电融合方式对核植效率的影响 |
| 3.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 EGCG对转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚体外发育质量的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验方案 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同浓度EGCG对囊胚率及囊胚细胞数的影响 |
| 2.2 不同浓度EGCG对重构胚囊胚内GSH和ROS水平的影响 |
| 2.3 不同时间添加EGCG对囊胚细胞凋亡的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第四章 哺乳动物体细胞核移植研究进展 |
| 1 供体细胞的选择和培养 |
| 1.1 供体细胞的选择 |
| 1.2 供体细胞的培养 |
| 2 受体细胞的选择与去核 |
| 2.1 受体细胞的选择 |
| 2.2 受体细胞去核 |
| 3 细胞核的移植 |
| 3.1 带下注射 |
| 3.2 胞质内注射 |
| 3.3 全细胞胞质内注射 |
| 4 重构胚的融合与激活 |
| 4.1 重构胚的融合 |
| 4.2 重构胚的激活 |
| 5 重构胚的培养与移植 |
| 5.1 重构胚的培养 |
| 5.2 重构胚的移植 |
| 6 异种体细胞核移植的研究进展 |
| 6.1 异种核移植技术的研究历史 |
| 6.2 影响异种核移植技术的因素 |
| 参考文献 |
| 第五章 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展 |
| 1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究概况 |
| 2 哺乳动物卵母细胞成熟及调控机制 |
| 2.1 哺乳动物卵母细胞成熟 |
| 2.2 哺乳动物卵母细胞体外成熟培养形态学变化 |
| 2.3 哺乳动物卵母细胞成熟过程中的分子调控机理 |
| 3 卵母细胞体外成熟培养的影响因素 |
| 3.1 卵母细胞来源 |
| 3.2 培养系统 |
| 3.3 激素和生长因子 |
| 4 蛋白添加物 |
| 4.1 血清 |
| 4.2 卵泡液 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）提高绵羊体细胞核移植效率的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 哺乳类动物卵母细胞的体外利用开发 |
| 1.1 卵泡卵母细胞体外成熟 |
| 1.1.1 卵母细胞成熟概论 |
| 1.1.2 卵母细胞成熟的特征 |
| 1.1.3 卵母细胞成熟的判断 |
| 1.1.4 卵母细胞的获取与分级 |
| 1.1.5 影响卵母细胞体外成熟的因素 |
| 1.2 卵母细胞冷冻保存的研究进展 |
| 1.2.1 卵母细胞冷冻保存原理 |
| 1.2.2 冷冻保护剂的种类 |
| 1.2.3 卵母细胞的冷冻方法 |
| 1.2.4 影响卵母细胞冷冻的因素 |
| 第二章 哺乳类动物核移植的研究进展 |
| 2.1 哺乳类动物胚胎细胞及干细胞核移植研究进展 |
| 2.2 哺乳类动物同种体细胞核移植研究进展 |
| 2.2.1 国外哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况 |
| 2.2.2 国内哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况 |
| 2.3 异种动物细胞核移植研究进展 |
| 2.3.1 国外异种动物细胞核移植研究历史概况 |
| 2.3.2 国内异种动物细胞核移植研究历史概况 |
| 2.3.3 异种动物细胞核移植相关问题的研究概况 |
| 2.3.4 提高动物细胞异种核移植尚待解决的问题 |
| 2.4 哺乳动物核移植相关机制的研究进展 |
| 2.4.1 MPF 与核移植的关系 |
| 2.4.2 卵母细胞激活 |
| 2.4.3 核的重编程 |
| 2.4.4 端粒及端粒酶问题 |
| 2.4.5 基因印迹问题 |
| 2.5 影响哺乳动物核移植的因素 |
| 2.5.1 核受体胞质的准备及其对核移植的影响 |
| 2.5.2 核供体的准备及其对核移植的影响 |
| 2.5.3 卵母细胞去核方法对核移植的影响 |
| 2.5.4 融合-激活方案对核移植的影响 |
| 2.6 体细胞核移植技术的应用前景和存在问题 |
| 2.6.1 体细胞核移植技术的应用前景 |
| 2.6.2 体细胞核移植存在的问题 |
| 前言 |
| 第三章 绵羊卵母细胞的体外成熟培养 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验材料及仪器 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同类型血清和促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2.2 添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2.3 不同浓度的孕酮添加对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 不同类型血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.2 不同来源促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.3 添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.4 不同浓度的孕酮对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 绵羊卵母细胞的冷冻保存试验研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 试验材料及仪器设备 |
| 4.1.2 冷冻液的配制及试验设计 |
| 4.1.3 绵羊卵母细胞的采集 |
| 4.1.4 卵母细胞的体外成熟 |
| 4.1.5 卵母细胞的程序化冷冻 |
| 4.1.6 卵母细胞的玻璃化冷冻 |
| 4.1.7 卵母细胞的孤雌激活 |
| 4.1.8 卵母细胞冷冻效果的评定与数据的统计分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 在程序冷冻中不同冷冻液对绵羊卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.2.2 不同植冰温度对绵羊卵母细胞程序化冷冻的效果 |
| 4.2.3 不同玻璃化冷冻液对绵羊卵母细胞的冷冻效果分析 |
| 4.2.4 不同发育时期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的发育能力 |
| 4.2.5 不同浓度海藻糖对卵母细胞的冷冻效果的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 卵母细胞冷冻效果的评判标准 |
| 4.3.2 不同冷冻方法对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.3.3 不同发育时期对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.3.4 非渗透性保护剂与渗透性保护剂配合使用对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 不同激活方法对卵母细胞的孤雌激活效果 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.3 数据统计方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的效果 |
| 5.2.2 绵羊精子提取物对卵母细胞的激活效果 |
| 5.2.3 不同激活方法对绵羊卵母细胞的激活效果的比较 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.3.2 精子提取物对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.3.3 离子霉素的对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 绵羊体细胞核移植的研究 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 绵羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养 |
| 6.1.3 绵羊同种体细胞核移植 |
| 6.1.4 统计方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 培养液对原代成纤维细胞培养结果的影响 |
| 6.2.2 消化传代对细胞纯化及生长的影响 |
| 6.2.3 培养液对传代细胞培养结果的影响 |
| 6.2.4 EGF 和胰岛素对细胞生长的影响 |
| 6.2.5 冻存对皮肤成纤维细胞形态及生物学特性的影响 |
| 6.2.6 去核时间与去核率对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.7 不同核移植重构胚构建方法对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.8 不同供体细胞的处理方法对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.9 不同激活方法对体细胞核移植效果的影响 |
| 6.2.10 成纤维细胞注核后不同间隔时间激活对移植胚发育的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 绵羊皮肤成纤维细胞的生长特性 |
| 6.3.2 核移植重构胚的构建方法对体细胞核移植效率的影响 |
| 6.3.3 不同激活方法对体细胞核移植胚胎发育的影响 |
| 6.3.4 注核后激活间隔时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 山羊－绵羊异种体细胞核移植的研究 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.2 山羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养及颗粒细胞的准备 |
| 7.1.3 山羊-绵羊种间体细胞核移植 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 组织块的保存和细胞培养 |
| 7.2.2 莎能山羊皮肤细胞冻存 |
| 7.2.3 不同激活方法对山羊-绵羊异种核移植胚胎发育的影响 |
| 7.2.4 不同核移植胚构建方法对山羊-绵羊异种体细胞核移植的影响 |
| 7.2.5 供体细胞不同处理方法对核移植结果的影响 |
| 7.2.6 受体细胞冷冻对异种体细胞核移植结果的影响 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 培养液对皮肤成纤维细胞生长的影响 |
| 7.3.2 成纤维细胞的不同处理方法对异种体细胞核移植结果的影响 |
| 7.3.3 不同类型供体细胞对异种体细胞核移植胚效率的影响 |
| 7.5 小结 |
| 第八章 提高体细胞核移植胚体外发育能力的研究 |
| 8.1 材料和方法 |
| 8.1.1 试验材料及仪器设备 |
| 8.1.2 培养液 |
| 8.1.3 绵羊卵母细胞的采集与体外成熟 |
| 8.1.4 共培养单层细胞的制备 |
| 8.1.5 体细胞核移植胚胎的获得 |
| 8.1.6 核移植胚激活 |
| 8.1.7 胚胎的体外培养 |
| 8.1.8 试验设计及统计分析 |
| 8.2 结果 |
| 8.2.1 不同培养液组合对重构胚发育的影响 |
| 8.2.2 添加孕酮对胚胎发育的影响 |
| 8.2.3 不同共培养体细胞对绵羊核移植胚胎早期发育的影响 |
| 8.2.4 不同蛋白质添加物对颗粒细胞与核移植胚共培养的影响 |
| 8.3 讨论 |
| 8.3.1 不同培养液组合对重构胚发育的影响 |
| 8.3.2 孕酮对重构胚发育的影响 |
| 8.3.3 共培养体系对重构胚发育的影响 |
| 8.3.4 蛋白添加物对胚胎发育的影响 |
| 8.4 小结 |
| 论文总结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 综述部分 |
| 第一章 哺乳动物核移植研究进展 |
| 1.1 哺乳动物胚胎细胞核移植研究进展 |
| 1.2 哺乳动物体细胞核移植研究进展 |
| 1.3 胚胎干细胞核移植研究进展 |
| 1.4 转基因克隆动物研究进展 |
| 1.5 种间细胞核移植研究进展 |
| 1.6 哺乳动物核移植有关机理研究进展 |
| 1.6.1 细胞核、细胞质及其互作 |
| 1.6.2 细胞周期 |
| 1.7 核移植操作本程序与影响因素 |
| 1.7.1 核受体胞质的准备及其对核移植结果的影响 |
| 1.7.2 核供体的准备及其对核移植结果的影响 |
| 1.7.3 卵母细胞去核方案及其对核移植结果的影响 |
| 1.7.4 融合-激活方案及其对核移植结果的影响 |
| 1.7.5 核移植方案及其对核移植结果的影响的影响 |
| 1.7.6 重组胚培养方案及其对核移植效率的影响 |
| 1.8 体细胞核移植技术的应用前景 |
| 1.9 细胞核移植存在的问题 |
| 1.10 结语 |
| 实验部分 |
| 第二章 绵羊卵母细胞体外成熟与孤雌激活 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 绵羊卵母细胞的采集 |
| 2.2.2 COCS的体外成熟 |
| 2.2.3 OPS玻璃化冷冻操作步骤 |
| 2.2.4 卵母细胞的孤雌激活 |
| 2.2.5 孤雌激活胚的体外培养 |
| 2.2.6 试验设计 |
| 2.2.7 试验数据的统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 EGF对卵母细胞成熟及孤雌发育的影响 |
| 2.3.2 不同激素配比对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3.3 不同直径绵羊卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞成熟及孤雌发育的影响 |
| 2.3.4 不同发育时期卵母细胞进行OPS法冷冻效果的比较 |
| 2.3.5 IONOMYCIN的不同组合激活方式对绵羊孤雌胚胎发育效果的影响 |
| 2.3.6 乙醇的不同组合激活方式对绵羊孤雌胚胎发育效果的影响 |
| 2.3.7 电激活时不同场强对绵羊卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 2.3.8 不同脉冲次数对绵羊卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 卵母细胞去核时期对绵羊核移植效率的影响 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试剂及培养液的配制 |
| 3.1.2 绵羊卵巢的采集、运输及绵羊卵母细胞的采集、体外成熟 |
| 3.1.3 供体细胞的准备 |
| 3.1.4 成熟卵母细胞的去核 |
| 3.1.5 核移植 |
| 3.1.6 克隆胚胎的激活 |
| 3.1.7 克隆胚胎的体外培养 |
| 3.1.8 试验设计及统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同成熟时间卵母细胞去核效率的比较 |
| 3.2.2 不同时期卵母细胞去核效率的比较 |
| 3.2.3 去核卵母细胞高渗处理对绵羊带下注核核移植效率的影响 |
| 3.2.4 卵丘/颗粒细胞的血清饥饿处理对核移植效率的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 以后研究的方向 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 致谢 |
| 个 人 简 历 |
（9）山羊胚胎体外培养体系的优化以及胚胎干细胞分离培养技术的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 卵母细胞体外成熟的研究进展 |
| 1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究概况 |
| 2 哺乳动物卵母细胞发生、发育和成熟规律及调控机理 |
| 2.1 哺乳动物卵泡卵母细胞的发生 |
| 2.2 哺乳动物卵泡卵母细胞发育及成熟的一般过程 |
| 2.2.1 减数分裂启动及核网阻滞期 |
| 2.2.2 卵母细胞生长期 |
| 2.2.3 减数分裂恢复期 |
| 2.2.4 卵母细胞在MЦ期的停滞 |
| 2.3 哺乳动物卵母细胞体外成熟培养超微结构变化 |
| 2.4 哺乳动物卵母细胞生长和成熟过程的分子调控机理 |
| 2.4.1 成熟分裂阻滞 |
| 2.4.2 卵母细胞生长的调控 |
| 2.4.3 成熟分裂恢复 |
| 3 卵母细胞体外成熟培养的影响因素 |
| 3.1 成熟培养液对卵母细胞的影响 |
| 3.2 激素对卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 3.3 生长激素和生长因子的作用 |
| 3.4 卵泡液和颗粒细胞对卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 3.5 卵泡大小和卵丘细胞对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.6 其他添加物对卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 3.7 延迟成熟培养 |
| 3.8 其它条件对卵母细胞成熟的影响 |
| 第二节 哺乳动物体外受精和早期胚胎体外培养的研究进展 |
| 1 精子获能 |
| 1.1 精子获能的概念及特点 |
| 1.2 精子获能后的变化 |
| 1.3 影响精子获能的因素 |
| 1.3.1 环境因素 |
| 1.3.2 获能液和获能方法 |
| 1.3.3 影响精子获能的物质 |
| 2 体外受精 |
| 2.1 体外受精过程 |
| 2.2 影响体外受精的因素 |
| 3 胚胎培养体系 |
| 3.1 体内胚胎和体外胚胎发育的对比 |
| 3.2 胞质的不完全成熟是胚胎早期发育阻滞的主要原因 |
| 3.3 能量物质和蛋白质等有机物对胚胎发育的影响 |
| 3.3.1 能量物质对胚胎发育的影响 |
| 3.3.2 蛋白质及生长因子对胚胎发育的影响 |
| 3.3.3 氨基酸及粘多糖对胚胎发育的影响 |
| 3.4 抗氧化作用 |
| 3.5 培养液及共培养体系对胚胎发育的影响 |
| 3.5.1 培养液对胚胎发育的影响 |
| 3.5.2 共培养体系对胚胎发育的影响 |
| 3.6 物理因素对胚胎发育的影响 |
| 3.6.1 氧气浓度和无机离子及渗透压对胚胎发育的影响 |
| 3.6.2 其它方面的影响 |
| 第三节 哺乳动物胚胎干细胞的研究进展及应用前景 |
| 1 胚胎干细胞的生物学特性 |
| 2 各种动物ES 细胞的研究进展 |
| 2.1 小鼠ES 细胞的研究进展 |
| 2.2 仓鼠ES 细胞的研究进展 |
| 2.3 牛ES 细胞的研究进展 |
| 2.4 猪ES 细胞的研究进展 |
| 2.5 羊鼠ES 细胞的研究进展 |
| 2.6 兔ES 细胞的研究进展 |
| 2.7 猴ES 细胞的研究进展 |
| 3 胚胎干细胞的建系方法 |
| 3.1 早期胚胎来源及适宜分离培养的时间 |
| 3.2 胚胎干细胞分离培养方法 |
| 3.2.1 全胚胎培养法 |
| 3.2.2 ICM 培养法 |
| 3.2.3 克隆法 |
| 3.3 胚胎干细胞鉴定方法 |
| 3.3.1 形态学鉴定 |
| 3.3.2 免疫学鉴定 |
| 3.3.3 核型分析 |
| 3.3.4 体内分化试验 |
| 3.3.5 体外分化试验 |
| 3.3.6 嵌合体实验 |
| 3.4 胚胎干细胞的冻存及解冻 |
| 4 胚胎干细胞的应用前景 |
| 4.1 生产克隆动物 |
| 4.2 ES 细胞是基因修饰的高效载体 |
| 4.3 生产用于人类器官移植的动物器官 |
| 4.4 建立人类遗传病研究的动物模型 |
| 4.5 研究胚胎发育的基因调控 |
| 第二章 山羊卵母细胞体外成熟培养 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 液体 |
| 1.1.1 操作液 |
| 1.1.2 成熟培养液 |
| 1.2 山羊卵丘–卵母细胞复合体的收集与培养 |
| 1.3 COC 复合体的分级 |
| 1.4 卵母细胞成熟的判定 |
| 1.5 受精处理及胚胎培养 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同分级卵母细胞的成熟比较 |
| 2.2 不同成熟时间对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 2.3 成熟液中添加不同浓度雌激素对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 2.4 HT 和β–ME 对卵母细胞成熟的影响 |
| 2.5 不同成熟激素对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同分级卵母细胞的成熟分析 |
| 3.2 不同成熟时间对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 3.3 成熟液中添加不同浓度雌激素对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 3.4 HT 和β–ME 对卵母细胞成熟的影响 |
| 3.5 不同成熟激素对山羊卵母细胞成熟的影响 |
| 4 结论 |
| 第三章 山羊卵母细胞体外受精方法的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵母细胞采集和成熟 |
| 1.2 体外受精 |
| 1.2.1 受精液 |
| 1.2.2 精子的准备 |
| 1.2.3 精子获能 |
| 1.2.4 体外受精 |
| 1.2.5 受精率的观察 |
| 1.2.6 胚胎培养 |
| 1.2.7 胚胎细胞计数 |
| 1.2.8 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 肝素、咖啡因和钙离子载体对受精和胚胎发育的影响 |
| 2.2 精子的不同处理方法对卵裂率和囊胚率的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肝素、咖啡因和钙离子载体对对山羊精子获能、受精和胚胎发育的影响 |
| 3.2 精子的不同处理方法对卵裂率和囊胚率的影响 |
| 4 结论 |
| 第四章 山羊胚胎体外培养 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 山羊卵母细胞体外成熟和受精 |
| 1.2 胚胎培养 |
| 1.2.1 颗粒细胞制备 |
| 1.2.2 输卵管上皮制备 |
| 1.3 胚胎培养 |
| 1.4 囊胚细胞计数 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同共培养系统对受精后胚胎发育的影响 |
| 2.2 胚胎培养液中添加BSA、FCS 和不同换液程序对胚胎发育的影响 |
| 2.3 不同培养液在共培养系统的支持下对胚胎发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同共培养系统对受精后胚胎发育的影响 |
| 3.2 培养液中添加BSA、FCS 和不同换液程序对胚胎发育的影响 |
| 3.3 不同培养液在共培养系统的支持下对胚胎发育的影响 |
| 4 结论 |
| 第五章 山羊体外胚胎和体内胚胎的超微结构比较 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 体内胚胎的生产 |
| 1.2 体外胚胎的生产 |
| 1.2.1 卵母细胞成熟 |
| 1.2.2 精子体外获能和受精 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.3.1 受精卵分组 |
| 1.3.2 观察内容 |
| 1.4 电镜切片制备 |
| 1.4.1 电镜切片制作 |
| 1.4.2 线粒体的观察 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第六章 山羊胚胎干细胞的分离培养 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 主要溶液配制 |
| 2.1.1 无钙、镁DPBS 缓冲液的配制 |
| 2.1.2 消化液的配制 |
| 2.1.3 1mol/Lβ—巯基乙酸的配制 |
| 2.1.4 DMEM 培养液的配制 |
| 2.1.5 丝裂素—C 溶液的配制 |
| 2.1.6 0.196明胶溶液的配制 |
| 2.1.7 LIF 的分装 |
| 2.1.8 AKP 染色液的配制 |
| 2.2 山羊ES 细胞培养液 |
| 2.3 小鼠及山羊胎儿成纤维细胞饲养层的制备 |
| 2.3.1 小鼠胎儿成纤维(MEF)的分离与培养 |
| 2.3.2 山羊胎儿成纤维(GEF)的分离与培养 |
| 2.3.3 MET 和GEF 的继代培养 |
| 2.3.4 MET 和GEF 饲养层的制备 |
| 2.4 胚胎的制备 |
| 2.4.1 体内受精囊胚 |
| 2.4.2 体外受精囊胚 |
| 2.4.3 孤雌激活胚 |
| 2.5 山羊ES 细胞的分离与培养 |
| 2.5.1 ICM 的初次代代培养 |
| 2.5.2 山羊ES 细胞的继代培养 |
| 2.6 ES 细胞的鉴定 |
| 2.6.1 形态学鉴定 |
| 2.6.2 AKP 染色 |
| 2.6.3 核型分析 |
| 2.6.4 体外分化 |
| 3 结果 |
| 3.1 山羊ICM 的生长行为 |
| 3.2 不同来源的胚胎对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 3.3 不同饲养层对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 3.4 不同种类血清对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 3.5 不同培养液对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 3.6 山羊ES 细胞的鉴定 |
| 3.6.1 形态学鉴定 |
| 3.6.2 AKP 染色 |
| 3.6.3 核型分析 |
| 3.6.4 体外分化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胚胎来源及质量对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 4.2 饲养层对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 4.3 血清对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 4.4 细胞因子对山羊ES 细胞分离培养的影响 |
| 4.5 山羊ES 细胞的鉴定 |
| 5 结论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文摘要 |
（10）绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 药品试剂 |
| 1.2 卵巢的采集及卵母细胞培养 |
| 1.3 裸卵的获得 |
| 1.4 卵泡液的采集 |
| 1.5 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟分裂的影响 |
| 2.2 次黄嘌呤及FSH在体外对绵羊卵母细胞成熟分裂的作用 |
| 3 讨论 |
四、绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响（论文参考文献）
- [1]绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究[D]. 李娜. 塔里木大学, 2020(12)
- [2]绵羊卵母细胞成熟培养的研究进展[J]. 瞿静雯,王健,李拥军,王强,尹修远. 江苏农业科学, 2019(10)
- [3]绵羊胞质内单精子注射（ICSI）的研究[D]. 朱肖亭. 河南农业大学, 2016(05)
- [4]VEGF在绵羊未成熟和成熟睾丸中的表达差异研究[D]. 赵佳. 吉林农业大学, 2016(02)
- [5]山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展[J]. 倪艺娜,王生奎,权国波,洪琼花. 家畜生态学报, 2015(05)
- [6]转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化[D]. 柳海星. 延边大学, 2013(12)
- [7]提高绵羊体细胞核移植效率的研究[D]. 赛务加甫. 西北农林科技大学, 2007(01)
- [8]绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植[D]. 张晓建. 西北农林科技大学, 2005(02)
- [9]山羊胚胎体外培养体系的优化以及胚胎干细胞分离培养技术的研究[D]. 吕丽华. 山西农业大学, 2004(06)
- [10]绵羊卵泡液和次黄嘌呤对卵母细胞体外减数分裂的影响[J]. 布赫,王建国,旭日干. 中国实验动物学报, 2002(04)